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商品化的登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒效果评价
目的 比较登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒四种商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,并用健康人血清对商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒进行效果评价.方法 登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒感染病例(各3例)的恢复期血清,采用ELISA方法检测四种黄病毒IgG抗体,评估商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,从此前出现过输入性寨卡病毒感染确诊病例的江门市采集健康人群血清,检测上述四种黄病毒IgG抗体,后通过蚀斑减少中和实验验证ELISA方法检测的寨卡病毒IgG抗体阳性结果.结果 通过确诊登革热、寨卡和乙脑病例恢复期血清检测发现,已有商品化试剂盒在检测登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒阳性血清时存在交叉反应.IgG抗体ELISA检测试剂盒检测发现,78例健康人血清样本中登革病毒抗体阳性样本数为0例;寨卡病毒抗体阳性样本数为8例(阳性率10.25％);日本脑炎病毒抗体阳性样本数37例(阳性率47.43％);33例健康人血清样本中西尼罗病毒抗体阳性样本数为0例.蚀斑减少中和实验结果显示,8例寨卡病毒IgG抗体阳性样本均未检测到中和抗体.结论 商品化黄病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒存在交叉反应,单纯运用ELISA试剂盒检测会出现假阳性结果,因此在进行血清学方法检测时应联合其他检测方法.
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黄病毒多功能酶NS3研究进展
黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶/核苷三磷酸酶/RNA 5'三磷酸酶结构域.NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能.对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计.本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾.
关键词： 黄病毒 NS3 蛋白酶 解旋酶 核苷三磷酸酶'RNA 5'三磷酸酶 -
黄病毒及其相关疾病研究进展
黄病毒科黄病毒属包括70余种病毒,其中20多种病毒与人类疾病密切相关.登革、乙型脑炎、蜱媒脑炎、黄热、西尼罗、圣路易脑炎、库宁、墨累谷脑炎、罗西奥、波瓦生、科萨努尔森林病、鄂木斯克出血热、韦塞尔斯布朗病、跳跃病、伊利乌斯等黄病毒可引起人类脑炎和出血热等严重疾病,对人类健康危害较大,仍属全球性公共卫生问题.本文就黄病毒的分类、生物学特性、主要疾病及其分布、宿主、媒介等方面的研究进展作一综述.
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黄病毒衣壳蛋白研究进展
衣壳蛋白是黄病毒的主要结构蛋白之一,除与RNA结合构成病毒核衣壳外,衣壳蛋白还参与了病毒感染的其他过程.同时,衣壳蛋白作为减毒突变的靶标为黄病毒疫苗的研究提供了新的思路.本文就黄病毒衣壳蛋白的结构、功能及其在疫苗研究中的应用做一综述.
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媒介动物(蚊、猪)体内黄病毒分子流行病学调查研究
[目的]通过对珠海注册养猪场及珠海口岸地区的蚊虫体内黄病毒的带毒率、宿主动物(猪群)及其人群进行血清黄病毒类(日本脑炎、登革热等)抗体水平的调查研究,为控制黄病毒在人群中的流行提供科学依据.[方法]采集养猪场猪血清、养猪场和口岸蚊标本、养猪场从业人员、入境的东南亚船员和城区部分发热病人血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测猪群和人群血清中的日本脑炎、登革热抗体;使用紫外灯诱蚊法在养猪场和口岸捕捉蚊类,经鉴定种类后,按20只蚊一组制成蚊悬液后,采用细胞培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及荧光定量PCR技术检测蚊体内日本脑炎病毒、登革和西尼罗病毒等黄病毒的携带情况.[结果]1.猪血清日本脑炎病毒IgG抗体:结果已发表于《中国国境卫生检疫杂志》2007年第3期《珠海市部分注册猪场日本脑炎调查研究》.2.蚊媒带毒情况检测:2005年1月～2006年12月共捕获的2763只成蚊,经鉴定隶属4属8种,其中白纹伊蚊所占比例高(32.75%),其次为致倦库蚊(26.06%)、三带喙库蚊(25.30%)、海滨库蚊(7.75%)、中华按蚊(3.84%)、骚扰阿蚊(3.18%),其他(常型曼蚊和巨型阿蚊等)(1.12%);在132组蚊研磨液的病毒细胞培养中,有7份标本出现CPE病变,使用黄病毒通用引物,RT-PCR反应能扩增出相应的阳性条带,其中白纹伊蚊组阳性3份,致倦库蚊组阳性3份,三带喙库蚊组阳性1份,但用日本脑炎病毒、登革病毒Ⅰ-Ⅳ型和西尼罗病毒等特异性引物,未能扩增出相应的阳性条带,说明可能存在着其它黄病毒类的病毒感染;采用荧光定量PCR法,对蚊悬液和细胞培养液日本脑炎、登革和西尼罗病毒进行检测,从1组海滨库蚊标本中检出日本脑炎病毒核酸阳性,但强度较弱,这与珠海地区是乙脑低发地区相一致.3.人群登革热和日本脑炎血清抗体检测:从东南亚的入境船员、本地发热病人和养猪场从业人员等血清标本511份中,登革病毒抗体IgG总阳性率为7.24%,其中以东南亚的入境船员的阳性率高,为12.76%,没有检出登革病毒抗体IgM和日本脑炎IgM抗体.[结论]珠海地区存在日本脑炎的主要传播媒介,并且在蚊媒中携带有日本脑炎病毒;蚊标本细胞培养出现细胞病变和RT-PCR扩增出黄病毒基因的特异性片段,提示在捕获蚊标本中可能存在着其他病毒感染的可能;虽然养猪场猪群日本脑炎感染率不高,但存在着日本脑炎病毒的隐性感染或曾经感染过,提示不能够放松对乙型脑炎的预防控制工作,应采取积极的预防措施,防止人群和猪场日本脑炎的发生与流行.此外,研究结果表明东南亚船员有较高的登革热感染率,因此,在登革热流行期间,我国口岸应加强对来自东南亚国家交通工具员工和旅客的登革热的监测,以及有可能藏带、孳生蚊虫的废旧物品、集装箱等的检验检疫工作,以防止登革热的传入与流行.
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寨卡病毒病的危害及防控
近年的寨卡病毒病疫情波及全球40多个国家和地区,2016年2月,世界卫生组织将其定为“国际关注的突发公共卫生事件”,并指定紧急研究和发展计划.本文着重阐述了寨卡病毒的发现、寨卡病毒的传播途径、寨卡病毒病疫情发展及医学危害,以及口岸防控建议.
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主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定
目的 对主要黄病毒结构蛋白的抗原表位情况进行系统分析,鉴别共同及特异性抗原表位并对可能的特异性抗原表位进行原核表达.方法 分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎(乙脑)病毒及黄热病毒E蛋白的亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性和Garnier-Robson的二级结构进行分析,预测可能的抗原表位.在此基础上,根据表位位置和氨基酸序列的相似性,分析6种病毒的共有及特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息,对预测的抗原表位进行比对,进一步分析抗原表位在不同病毒株中的保守性.然后利用pET32及pMAL-c2x系统对可能的特异性抗原表位进行高效原核表达、Western blot验证其抗原性.结果 经系统的生物信息学分析,共预测获得登革病毒1～4型、乙脑病毒及黄热病毒共有抗原表位15个,病毒特异性抗原表位47个.利用pET32及pMAL-c2x系统对6种病毒部分可能的特异性抗原表位进行了高效表达.Western blot结果显示登革病毒1型及2型表达抗原片段表现良好的抗原反应原性,并与试验中所用其他黄病毒及甲病毒多克隆抗体无明显的交叉反应.而所表达的登革病毒3型和4型、乙脑病毒及黄热病毒片段无抗原反应原性.结论 6条原核表达抗原片段经Western blot验证,获得登革病毒1型和2型特异性抗原片段.
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GM-CSF在登革热病毒和丙型肝炎病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用
研究GM-CSF在DV、HCV等几种黄病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用,并分析其作为黄病毒DNA疫苗佐剂的可能性.构建各种真核表达质粒,抽提质粒DNA,分组免疫小鼠,通过ELISA及间接免疫荧光染色检测小鼠血清抗体的动态水平.DV1及DV2 prM/E核酸疫苗与GM-CSF质粒共接种的佐剂组小鼠血清抗体水平低于无佐剂的疫苗组,即GM-CSF显示了一定的免疫抑制作用,其中以DV1prM/E核酸疫苗更为显著；而在HCVC及E1蛋白核酸疫苗中,GM-CSF则具有一定免疫增强作用.GM-CSF作为疫苗佐剂,其作用具有复杂的多样性,因抗原的不同可能会呈现免疫提升或免疫抑制,因此选择其作为核酸疫苗佐剂时需慎重.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 黄病毒 DNA疫苗 免疫增强 免疫抑制 -
CODEHOP RT-PCR技术在黄病毒属病毒筛查中应用
为了探讨CODEHOP RT-PCR技术在黄病毒属病毒筛查中的应用效果,根据GenBank发表的不同黄病毒多聚蛋白氨基酸序列,利用CODEHOP方法设计合成一对简并引物,用一步RT-PCR对乙型脑炎病毒株JEV1201、登革热病毒株JKD001和黄热疫苗YV6161进行检测,扩增产物测序后进行BLAST同源性比对和系统分生分析.结果显示该方法可以特异的对黄病毒进行扩增,目的片段的大小和序列与预期结果相符,JEV1201与乙脑病毒株YL2009-4/YC2009-3同源性为接近,位于乙脑病毒株进化树分支.JKD001与登革热病毒株DENV-2/ID/1022DN/1975同源性为接近,位于登革热病毒株进化树分支.YV6161与黄热病病毒株17D同源性为接近,位于黄热病病毒株进化树分支.由此可知CODEHOP RT-PCR技术可以被有效的用于对黄病毒属病毒的筛查、种类鉴定和分子溯源.
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黄病毒属病毒CODEHOP RT-PCR检测方法的建立
目的 建立一种能快速检测黄病毒属病毒的CODEHOP RT-PCR方法. 方法 根据GenBank发表的不同黄病毒多聚蛋白氨基酸序列,利用CODEHOP方法设计合成一对引物,建立能快速检测黄病毒属所有病毒的CODE-HOP RT-PCR方法,并用3种不同病毒株对该方法进行特异性和灵敏度评价. 结果 建立的CODEHOP RT-PCR能对黄病毒RNA进行特异性扩增,目的片段的大小(400～500 bp)和序列与预期结果相符.该方法对黄病毒核酸的小检出量为8 pg. 结论 建立的CODEHOP RT-PCR方法特异强、灵敏高,可用于黄病毒的检测.
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MicroRNA与流行性乙型脑炎病毒感染研究新进展
流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是引起病毒性脑炎的重要病原,其发生机制与炎症因子的大量释放和神经系统的炎症损伤密切相关.microRNA作为一类具有调控功能的非编码RNA分子,对JEV感染过程中炎症因子的释放及其信号传导通路具有重要调节作用.本文就microRNA在JEV感染过程中的作用机制研究进行简要综述.
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海南省虫媒病毒分离物的初步鉴定
目的:鉴定海南省虫媒病毒分离物.方法:现场捕蚊,分离与鉴定虫媒病毒,主要方法为逆转录-聚合酶链反应等.结果:1995年从海南省琼中县大丰农场、三亚市立才农场、万宁县兴隆农场、乐东县尖峰林场及西沙捕获的4种蚊虫中分离到14株虫媒病毒,均可在C6/36细胞、Vero-E6细胞组织培养中增殖,并产生明显的病变;对酸、乙醚敏感,抵抗5-碘脱氧尿苷,属RNA病毒.结论:经血清学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)初步鉴定,有8株为黄病毒科病毒,6株为披膜病毒科甲病毒.
关键词： 黄病毒 甲病毒 逆转录-聚合酶链反应 -
我国从节肢动物中新分离的虫媒病毒
20世纪80年代以来在我国不同地区先后分离到14种虫媒病毒,其中甲病毒6种(辛德毕斯、基孔肯雅、盖塔、西方马脑炎、东方马脑炎和罗斯河病毒)、黄病毒3种(流行性乙型脑炎、登革热和蜱传脑炎病毒)、布尼安病毒3种(克里米亚一刚果出血热、巴泰和阿卡斑病毒)和呼肠孤病毒2种(东南亚十二节段RNA病毒和环状病毒),并有数十株病毒未确定种类.现就我国近几年新分离的虫媒病毒及其分布、媒介等方面的研究进展进行综述.
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丙型肝炎病毒细胞培养系统的研究进展
丙型肝炎病毒HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因,为单股正链RNA病毒,属黄病毒家族.
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一株西尼罗病毒基因组cDNA亚克隆的构建与鉴定
目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础.方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物.以感染细胞中的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的5个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM(R) -T easy载体,通过片段间共有的酶切位点进行连接,终获得基因组5′和3′半分子,并分别通过序列测定加以鉴定.结果与结论:已构建出西尼罗病毒CH-01株基因组的5′和3′半分子,经酶切鉴定和序列测定表明所获得的cDNA克隆为该株病毒的特异性序列.
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人类致病病毒属水平基因筛查芯片的制备及其在黄病毒属检测中的初步应用
目的:制备人类致病病毒属水平高通量筛查用基因芯片,并通过检测黄病毒属病毒初步验证其筛查效果.方法:利用Clustal W和BLAST软件设计针对人类致病病毒的属特异性寡核苷酸探针,对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行优化.分别用特异或随机PCR方法从病毒感染的细胞培养上清中扩增病毒核酸,在扩增过程中掺入aa-dUTP并进一步偶联Cy5或Cy3荧光素进行标记,随后与基因芯片进行杂交,并通过荧光扫描仪对杂交结果进行分析,然后分析检测的特异性和敏感性验证基因芯片的筛查效果.结果:共设计了针对人类医学病毒的1 090条寡核苷酸探针及其他阳性、阴性对照探针,其中黄病毒属共46条探针,Tm值为77.67～83.53℃,通过随机或特异PCR扩增8株黄病毒属病毒核酸,在42℃、过夜杂交的条件下,通过基因芯片方法均获得了黄病毒属特异性杂交信号,与其他属病毒之间没有非特异性交叉反应.结论:所制备的基因芯片可用于黄病毒属病毒的快速筛查,本研究为进一步建立大规模病毒性病原体的高通量筛查与鉴定技术平台提供了实验依据.
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细胞融合病毒全长cDNA克隆的构建与鉴定
目的 分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础.方法 通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对.选取细胞融合病毒Galveston株的全基因序列,通过体外基因合成的手段获得覆盖病毒全基因的3个DNA片段,并分别克隆至pBR002载体.利用限制性内切酶和T4连接酶将分片段基因组连入pACNR载体,终获得含有pACNR的细胞融合病毒Galveston全长cDNA克隆.根据Galveston病毒株基因组序列和pBR002载体的序列,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物,用来对其连接处进行测序及鉴定.结果与结论 构建了细胞融合病毒系统发生树,明确了其进化地位和其他黄病毒的同源性关系. 构建出细胞融合病毒Galveston株全长cDNA克隆,经过酶切鉴定和序列测定表明所获得cDNA克隆为该病毒的全长序列.
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虫媒黄病毒基因组复制的分子机制研究进展
虫媒黄病毒包括多种重要的可导致人类疾病的病原体.对其基因组复制的分子机制的研究一直是此类病毒致病机制研究的重点.本文着重介绍病毒基因组末端与其复制相关的调控元件、病毒非结构蛋白及宿主蛋白在虫媒黄病毒基因组复制中的作用.
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云南省澜沧江下游地区人及动物血清虫媒病毒抗体调查
目的:对澜沧江下游地区的思茅和西双版纳两地州进行虫媒病毒抗体调查,了解当地虫媒病毒的流行情况.方法:采集人及动物血清,用ELISA和血凝抑制试验检测抗体.结果:发热病人血清中,乙型脑炎(JE)、登革3型(DEN3)、DEN4、基孔肯雅(CHIK)、辛德毕斯(SIN)、贝巴鲁(BEB)、雪鞋野兔(SSH)和巴泰(BAT)病毒抗体的阳性率依次为7.50%、5.00%、1.67%、3.33%、2.50%、1.67%、5.00%和4.17%;未查到DEN1、DEN2和寨卡(Zika)病毒抗体.正常人血清JE、墨累山谷脑炎(MVE)、库京(KUN)、DEN、圣路易脑炎(SLE)、科萨努尔森林病(KFD)、森林脑炎(RSSE)、兰加特(LAG)、波瓦生(POW)、马雅罗(MAY)、CHIK、SIN、委内瑞拉马脑炎(VEE)、西门利克森林病(SFD)和格塔(GET)病毒抗体阳性率依次为34.88%、、35.03%、20.81%、9.25%、1.78%、12.46%、4.76%、2.85%、2.49%、21.71%、11.03%、1.93%、2.49%、2.49%、3.20%.从恒河猴血清中检出DEN、KUN、RSSE、KFD、POW、LAG、CHIK和GET病毒抗体,阳性率以DEN4、KUN和RSSE为高.棕果蝠血清中查到JE、DEN4、RSSE、POW和LAG病毒抗体,JE的阳性率高.猪血清中查到JE、DEN和CHIK抗体.黄胸鼠血清检出JE、KFD、CHIK和SIN病毒抗体,JE的阳性率较高.结论:证实该地区不仅广泛存在着JE、DEN、CHIK、SIN和BAT病毒,还可能存在有其它甲病毒、蚊媒和蜱媒黄病毒以及布尼安病毒.
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分子生物学技术在黄病毒属病毒疫苗研制中的应用及该类疫苗的研究进展
黄病毒科黄病毒属包括70多种病毒,其中约40多种与人类疾病相关,大部分为虫媒病毒.其中对人类致病的重要病原主要有登革病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒、蜱传脑炎病毒等.分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒疫苗的设计带来了新的策略.本文对当前分子生物学技术如感染性克隆技术在黄病毒属病毒疫苗研制中的应用以及嵌合疫苗、蛋白亚单位疫苗和DNA疫苗的研究进展作一综述.
