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丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及纯化
目的 制备丙型肝炎病毒(HCV)单克隆抗体(McAb),为HCV抗原诊断试剂的研发奠定基础.方法 用纯化的含NS4抗原位点及NS5抗原位点的基因工程表达的融合蛋白(HCAg)免疫Balb/c小鼠,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆及腹腔注射,制备McAb,用ELISA进行特异性鉴定,使用亲和层析法纯化.结果 筛选出4株能稳定分泌特异性抗-HCV的McAb杂交瘤细胞株,经多次复苏、传代仍能稳定分泌抗体,特异性强、效价高.间接免疫荧光显示,4株杂交瘤细胞株分泌的抗体对HCAg具有特异亲和性.结论 获得了4株抗-HCV的McAb,为今后研发HCV抗原诊断试剂打下了基础.
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出入境人员丙型肝炎病毒核心蛋白基因巢式RT-PCR检测及分型研究
目的 建立一种检测丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因的巢式RT-PCR方法,以及HCV核心蛋白基因区测序分型方法.方法 从国际HCV数据库查找HCV核心蛋白基因序列,设计HCV RNA巢式RT-PCR引物及测序引物,并建立巢式RT-PCR反应体系.采用出入境人员抗-HCV阳性血清60份,及50份标本为HCV抗体检测阴性,且谷丙转氨酶(ALT)＞ 100 U/L的血清进行巢式RT-PCR检测,阳性结果使用本研究建立的测序引物进行基因测序以确定HCV基因型.结果 60份抗-HCV阳性血清中,42份(70.0％)核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,其中1b型27例、1a型12例、6a型1例、3a型1例、2a型1例.50份ALT＞ 100 U/L且抗-HCV阴性标本中,1份HCV核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,测序鉴定为3a型.结论 本研究建立了一种HCV RNA核心蛋白基因的巢式RT-PCR检测和分型方法,为出入境人员HCV的诊断和监测提供重要依据.
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转移生长因子与生殖道病毒感染
生殖道病毒感染引起的性传播疾病(STIs)近年来广泛流行,已成为全球范围公共卫生的重大问题,如人乳头状瘤病毒(HPV)、人单纯疱疹病毒(HSV)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)等感染给众多患者带来了很多后遗症和并发症,特别是艾滋病病毒(HIV)的传播造成了很多患者的死亡并引发了一系列的社会问题.
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确证检测HCV在某些临床情况时的临床意义
目的:了解HCV-IgG阳性时,仅肝功能轻度异常时、有丙型肝炎或HCV接触史等临床情况下HCV在血液内存的几率,了解在这些临床情况下开展检测HCV确证试验的临床意义.方法:以轻度肝功能异常而无其他阳性发现者、HCV-IgG阳性者、有丙型肝炎或HCV接触史为实验对象,血清为检测标本,用ELISH技术检测HCV-IgG,RT-PCR技术检测HCV.结果:血清RT-PCR-HCV的检出率,HCV-IgG阳性组为41.9%、仅肝功能轻度异常组为25.7%、无症状体检组为29.4%.结论:本实验,各临床情况组均有不同的PCR-HCV阳性检测结果.提示,临床对HCV-IgG阳性者、仅肝功能轻度异常者、有接触史者等特殊人群应做检测HCV的确证试验,RT-PCR技术可以用做临床检测HCV的确证试验方法.
关键词： 丙型肝炎病毒 反转录-聚合酶链反应 确定试验 临床意义 -
浅谈化学发光技术在 HCV 和 HIV 检测中的应用
在现代医学技术快速发展的过程中，化学发光技术在疾病感染状况的检测以及疾病进展检测方面的应用也越来越广泛。利用化学发光技术对 HCV（丙型肝炎病毒）和 HIV（艾滋病病毒）进行检测，具有自身的独特优势。利用化学发光技术对 HCV 核心抗原进行检测，具有较高的特异度、灵敏度、窗口期也比较短，同时也能计算样本中的 HCV RNA 滴度；利用化学发光技术对抗～HCV、抗～HIV 进行检测，具有较高的特异度、灵敏度、低假阳性率。利用化学发光技术对 HCV/HIV 核算进行检测，具有较宽的线性范围和检测限。除此之外化学发光技术还能有效检测病毒变异和反转录酶活性。在 HCV 和 HIV 的检测工作中，化学发光技术的应用前景非常广泛。
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核酸检测与2种ELISA试剂灰区检测提示丙型肝炎病毒阳性样本1例
目的:证实HCV(丙型肝炎病毒)血液核酸检测的重要性,探讨ELISA(酶联免疫吸附测定)灰区设置的必要性.方法:1447份献血者血液标本采用ELISA方法检测HCV抗体,采用实时荧光定量PCR方法检测血液HCV的RNA.结果:发现1例两种试剂ELISA灰区PCR方法阳性的标本.结论:血液核酸检测能提高血液安全性,ELISA实验中灰区的设置具有现实必要性.
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1201例劳教人员HIV、HBV、HCV及梅毒检测结果分析
目的:掌握劳教场所吸毒类人群艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及梅毒感染状况及特点,以采取有效的预防和干预措施.结论:劳教场所吸毒类高危人群HCV抗体阳性和HBV五项标志物阳性率较高;梅毒阳性检出率次之;吸毒人群的HIV、HBV、HCV及梅毒合并感染比例较大;HIV抗体阳性检出率呈快速增长的势头.面对劳教所HIV和梅毒感染的现状,采取切实可行的所内宣传教育和防治干预措施非常重要.
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2型糖尿病并丙型肝炎中HCV-RNA与转氨酶的关系
目的:了解2型糖尿病并丙型肝炎中病毒核糖核酸(HCV-RNA)与天冬氨酸转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)之间的关系.方法:对95例糖尿病并丙型肝炎患者中进行抗-HCV、HCV-RNA及AST、ALT检测.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗-HCV,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测标本中的HCV-RNA,用全自动生化检测仪测定AST、ALT及血糖水平.分析2型糖尿病并丙型肝炎患者分别在HCV-RNA大于临界值组(≥1000copies/ml)和小于临界值组的HCV-RNA与血清转氨酶关系.结果:本研究95例糖尿病合并丙型肝炎标本中抗-HCV均为阳性,其中HCV-RNA高于上限值67例,二者有很好的相关性;共有56例存在ALT异常,64例存在AST异常,ALT、AST水平与HCV-RNA含量对数值无显著相关性,但ALT、AST阳性率与HCV-RNA大于临界值有一定的吻合关系.结论:HCV-RNA是反映HCV复制的可靠指标.在2型糖尿病合并丙型肝炎患者中结合AST、ALT结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的损伤情况.
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两种方法检测丙型肝炎病毒(HCV)的对比观察及临床应用价值
实验室检测对丙型肝炎病毒(HCV)感染的诊断和治疗的监测起着关键作用.随着分子生物学检测技术的发展,HCV的实验室诊断也取得了长足的进步.HCV抗体检测操作简便,耗时少,但对处于窗口期的标本容易漏检,且不能判别是活动性感染还是感染已被清除.HCV RNA检测有较高的敏感度和特异度,但成本高,不易普及,限制了其在实验室的广泛应用.国际上,HCV RNA检测发展趋势为全自动化.所以HCV抗体检测应作为筛选试验,而确证还需RNA检测.
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武威地区丙型肝炎基因分型情况分析
目的:了解武威地区丙型肝炎基因分型特征,为HCV感染者的个体化治疗提供科学依据.方法:实时荧光定量RT-PCR检测70例抗-HCV阳性血清标本,并对血清标本PCR扩增基因片段,测定核苷酸序列进行基因分型.结果:70例标本中HCV1b型38例,占54%;HCV2a型21例,占30%;HCV1b/2a混合型9例,占13%;HCV2b型2例,占3%.结论:武威地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,同时存在1b/2a混合型和2b型,与相邻城市HCV基因型分布比较有一致和差异.
关键词： 丙型肝炎病毒 荧光定量RT-PCR 测序 基因分型 -
辽源地区近5年丙型肝炎流行病学调查分析
丙型肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的以肝脏炎症和坏死病变为主的血源性传染病,主要为慢性经过.我国丙肝发病及死亡率急速上升,如何预防和控制丙肝,减少其对人身造成的危害,是迫在眉捷的一件大事,现就我市丙肝疫情情况、流行趋势以及丙肝相关防制措施进行分析,旨在提高公众对丙肝有正确认知,帮助有危险因素的人群及时就诊治疗,对我国未来病毒性肝炎的防治,排除潜在公共卫生危机具有非常重要的意义.近5年辽源地区丙肝疫情情况,报告如下.
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丙型肝炎病毒抗体检测方法探析
目的 探讨酶联法与金标法在检测丙型肝炎病毒抗体中的应用.方法 将2种方法取得的检测结果进行对照分析.结果 酶联法检查丙型肝炎病毒抗体结果为阳性27例,阴性11例,金标法检测丙型肝炎病毒抗体呈阳性者27例,阴性9例.结论 2种方法相比较无统计学差异,P＞0.05.
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化学发光检测方法学在丙型肝炎病毒的临床诊断价值
目的 探讨化学发光发在丙型肝炎病毒(HCV)检测中的临床诊断应用价值.方法 采用化学发光法(HCV-CLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)法、胶体金法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法,分别对50例疑似丙型肝炎病毒感染的血液标本进行检测,并对结果进行统计分析.结果 HCV-CLIA检测阳性为46例,阳性率为92％.ELISA法阳性37例,阳性率为74％.胶体金法阳性32例,阳性率为64％.FQ-PCR法42例,阳性率为84％.其中FQ-PCR法和ELISA法、胶体金法比较符合率分别为88.09％和76.19％,HCV-CLIA法和FQ-PCR法比较符合率为91.30％.当化学发光发的S/CO值低于2.00时,HCV-CLIA法和FQ-PCR法比较符合率为33.33％.结论 在丙型肝炎病毒(HCV)实验室的检测方法学中,CLIA法检出灵敏性和特异性显著高于ELISA法、胶体金法,有统计学意义.当CLIA法S/CO低于2.00时,假阳性率显著增高,有统计学意义.在感染早期使用CLIA法做临床筛查HCV病毒时,建议结合临床表现和作进一步FQ-PCR法确诊.
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贵阳市艾滋病哨点人群HIV、HCV、TP检测及结果分析
目的 了解贵阳市男男同性行为者(MSM)、吸毒者(DUS)、性病门诊男性就诊者(STD)、孕产妇(PRG)人群艾滋病病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒螺旋体(TP)的感染状况,为相应疾病制定相关预防措施提供科学依据.方法 使用酶联免疫吸附实验(ELISA)对贵阳市2015—2017年艾滋病哨点人群共有4296人进行HIV抗体、HCV抗体、TP抗体初筛和复检,使用蛋白免疫印迹实验(WB)进行HIV确证,并对检测结果 进行统计学处理.结果2015—2017年HIV、HCV、TP总感染人数分别为197人、550人、317人,感染率分别为4.59％、12.80％、7.38％;MSM、DUS、STD、TP的HIV感染率分别为24.11％、0.58％、0.41％、0.27％,差异有统计学意义(P<0.01).HCV感染率分别为0.40％、44.56％、0.74％、0.18％,差异有统计学意义(P<0.01).TP感染率分别为13.77％、14.96％、2.21％、0.54％,差异有统计学意义(P<0.01).结论 贵阳市HIV感染率高的是男男同性行为者,HCV和TP感染率高的是吸毒者,在今后的疾病预防控制中要加大对男男同性行为者和吸毒者的监测.
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亚甲蓝与可见光联合作用对血浆中病毒核酸的影响
用RT-PCR方法检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA,以了解亚甲蓝与可见光联合作用对HCV RNA的影响.结果,向含HCV血浆中加lμmol/L亚甲蓝,经可见光(30000 Lux)照射l 5 min或30 min,HCV RNA含量随照射时间延长而减少;仅加亚甲蓝不经光照者,与阳性对照者基本相同.说明仅甲亚蓝对HCV RNA基本无损伤作用,结合可见光照射时才可.
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口腔器械消毒及卫生监督管理现状分析
口腔器械是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、艾滋病病毒(HIV)等血液传播性疾病和消化道传染病的传播媒介.为加强和改进口腔器械消毒灭菌工作.我们于2004年对本市城区18家牙科门诊口腔器械消毒现状进行了监督检查.
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口腔诊疗器械丙型肝炎病毒污染及其消毒效果调查
丙型肝炎主要通过血液传播,而口腔治疗器械常有微量血污染,为此于1997年11～12月用ELISA法对口腔科诊疗器械进行了抗-HCV检测,并对3种消毒方法的效果进行了观察.采样时,用含 1%小牛血清的0.85%氯化钠溶液(BSAS)将棉拭浸湿后,对器械涂抹采样.将采样后棉拭头置于盛有0.5 mlBSAS的试管内,放4℃冰箱待检.ELISA法试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供.检测的结果,阴性对照＜0.050时按0.050计,阴性对照值×4为边界值(C0),样本检测值(S)与C0的比值(S/C0)≥1.0为抗-HCV阳性.
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云南省德宏州少数民族村寨居民丙型肝炎病毒感染及其影响因素
目的 了解云南省德宏州少数民族村寨居民丙型肝炎病毒(HCV)感染状况及其影响因素.方法 采用横断面研究方法,从德宏州整群抽样10个相邻的少数民族村寨,所有16岁及以上居民为研究对象,问卷调查收集社会人口学、性行为和吸毒行为信息,并采集外周静脉血检测HCV抗体.对研究对象的基本情况采用描述性分析,对分类计数变量关联性采用x2检验,并应用logistic回归分析HCV感染的影响因素,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 本项研究共有735人符合入选标准,参与应答者582人,占79.18％.其中男性306人,占52.58％;年龄16～56岁,平均(34.55±10.17)岁;景颇族364人,占62.54％;农民569人,占97.77％;已婚491人,占84.36％.543人有过性行为,占93.30％; 109人吸毒,占18.73％.HCV抗体阳性25人,占4.30％.多因素logistic回归分析显示,景颇族HCV感染风险高于其他民族(OR=3.69,95％ CI:1.03～13.14),吸毒者HCV感染风险高于非吸毒者(OR=3.58,95％CI:1.17～10.97).结论 云南省德宏州少数民族村寨居民特别是景颇族、吸毒者HCV感染率较高,有必要加强HCV防控.
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上海市浦东新区丙型肝炎病毒感染者基因分型与危险因素分析
目的 了解上海市浦东新区丙型肝炎病毒(HCV)基因分型现状,掌握HCV感染的主要危险因素.方法 采用病例对照研究的方法,通过问卷调查分析浦东新区2008-2009年报告的109例HCV感染者(病例组)和109例健康者(对照组)的危险因素,同时利用巢式RT-PCR检测血清HCV RNA,并进行基因分型,后比较各基因亚型的社会人口学特征和感染危险因素.结果 病例组与对照组的职业和文化程度构成显著不同.多因素logistic回归分析显示,输血/血制品使用史(OR=13.97)、创伤性美容史(OR=4.03)和修面/刮胡须史(OR=4.72)是HCV感染的可能危险因素.病例组患者血清HCV RNA检出率为63.83％ (60/94),以1b亚型(51.67％)和2a亚型(15.00％)为主;但同时存在1a、3a、3b、6a、6n亚型.其中,1b和2a亚型的感染者年龄较高,且退休人员的比例较高.各亚型患者间,仅创伤性美容史的分布有差异.结论 输血/血制品使用、创伤性美容和修面/刮胡须是浦东新区HCV感染的主要危险因素.本地区HCV基因型仍以1b/2a亚型为主,但其他亚型并存,且各亚型的流行特征存在一定差别.
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中国深圳地区丙型肝炎病毒RNA阳性与人类白细胞抗原分型的关联研究
目的 探讨深圳地区丙型肝炎病毒感染情况,病毒载量,基因分型与人类白细胞抗原分型的关联.方法 收集2005年7月至2006年7月深圳市血液中心与深圳市肝病研究所的丙型肝炎病毒RNA阳性的献血者和病人血清152人份,采用特异性引物进行丙型肝炎病毒定量分析后,再设计特异性引物进行基因分型和采用序列特异性引物聚合酶链反应(sequence specific primers polymerase chain reaction,PCR-SSP)技术进行人类白细胞抗原分型.结果 丙型肝炎病毒RNA阳性者中,定量水平在4×106～6×106 copies/ml左右,基因分型以2B为主,HIA-A3[相对危险度(RR)为4.3,P＜0.053,HIA-B46(RR=5.2,P＜0.02)和HLA-DRB4(RR=1.61,P＜0.01)与丙型肝炎病毒持续感染有关,HIA-B58(RR=0.37,P＜0.01),HLA-B*60(RR=0.37,P＜0.01),HLA-DRB13(RR=0.28,P＜0.01)和HLA-DRB15(RR=0.02,P＜0.01)似乎具有保护性意义.结论 在深圳汉族人群中,HLA等位基因可能会影响丙型肝炎的持续感染与转归.
