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结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究
目的构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A基因为基础的DNA疫苗.方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因组中,扩增出分泌蛋白Ag85A成熟蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体pGEM-T Easy中.经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1的相应酶切位点.重组质粒肌注免疫小鼠,4周后用ELISA法检测抗体滴度.结果结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A成熟蛋白的编码基因经序列测定证实无突变;经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定证实克隆基因正确插入载体pcDNA3.1.ELISA法检测几何平均滴度为1∶1 000.结论以Ag85A成熟蛋白的编码基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础.
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HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建
目的构建HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒.方法运用PCR扩增HPV-6/11 L1、E6、E7序列,PCR产物连接至pGEM T-Easy质粒,测序鉴定正确后,分别连接至真核表达载体pVAX,再用酶切、连接而构建成HPV-6/11 L1-E6/E7-pVAX质粒.运用电穿孔法将所获得质粒转染COS-7细胞,免疫组化检测蛋白表达情况.结果所构建质粒的插入目的片段测序正确;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积.结论所构建的HPV-6/11 L1-E6/E7-pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1-E6/L1-E7蛋白,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备.
关键词： 人乳头瘤病毒6/11型 DNA疫苗 宫颈癌 -
DNA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的作用
目的研究DNA核酸疫苗诱导机体免疫应答的能力,为揭示其诱导机制奠定基础.方法采用本室构建的单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白D的真核表达质粒pcDNA-gD2免疫小鼠,通过ELISA法动态检测特异性抗体的产生及小鼠外周血Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2的水平同时进行病毒攻击实验.结果 pcDNA-gD2和HSV-2免疫组小鼠从第2周开始产生特异性抗糖蛋白D抗体,第4～5周达到高峰;外周血清中IFN-γ、IL-2水平明显高于阴性对照组.病毒攻击实验显示2周内pcDNA-gD2和HSV-2免疫组小鼠无一只死亡,而阴性对照组小鼠全部死亡.结论 pcDNA-gD2真核表达质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和Th1型细胞免疫,并具有免疫保护作用.
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HSV-1截短gB基因DNA疫苗的构建及初步鉴定
目的为有效预防单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV -1)感染,给多价DNA疫苗的构建奠定基础,构建表达截短HSV-1?gB糖蛋白的DNA疫苗.方法用PCR技术从HSV-1基因组中扩增出编码HSV-1?gB糖蛋白1-51 7氨基酸序列的一段基因序列,通过pGEM-T中介载体,将其插入到真核表达质粒pcDNA?3 .1(+)的CMV启动子下游.结果构建的重组真核表达质粒可在动物体内正确表达目的基因,对HSV- 1病毒攻击具有免疫保护作用.结论本研究对截短HSV-1?gB基因DNA疫苗进行了初步的探索性研究,也为多价HSV-1?DNA疫苗的构建奠定了基础.
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结核多表位DNA疫苗免疫效果及其对小鼠耐药结核病的疗效观察
目的：研究比较结核分枝杆菌 Hsp70、Ag85A、ESAT-6多表位 DNA 疫苗和卡介苗(BCG)的免疫效果,观察该疫苗联合抗结核药物治疗耐药结核病小鼠的疗效。方法随机将BALB/c 小鼠分成 A、B、C组,分别用 PBS、BCG和多表位DNA疫苗经皮下免疫,1、3、5周各免疫1次。免疫后眼球采血,分离血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法测定特异性 IgG抗体,用 ELISA双抗体夹心法测定 IL2和 IFN-γ；同时分离小鼠脾细胞,用 MTT法测定淋巴细胞增殖指数。为观察多表位疫苗的疗效,小鼠尾静脉注射结核分枝杆菌双耐菌株(耐利福平和耐异烟肼),4周后将感染模型小鼠随机分成D、E、F3组,其中D组为阴性对照,注射生理盐水；E 组用利福平、异烟肼治疗；F 组为联合用药组,用结核分枝杆菌 Hsp70、Ag85A、ESAT-6多表位DNA 疫苗和利福平、异烟肼联合治疗,疗程均为10周。治疗结束后称取小鼠体重,取其肺、肝、脾,称取质量,并作肺和脾脏菌落计数。结果多表位 DNA 疫苗组小鼠血清特异性IgG抗体、IL2、IFN-γ和淋巴细胞增殖指数均明显高于PBS组和BCG组(P<0.05)；多表位 DNA疫苗联合抗结核化疗药能明显降低耐药结核病小鼠肺、脾菌落计数和肺、肝和脾脏指数(P<0.05)。结论结核分枝杆菌 Hsp70、Ag85 A、ESAT-6多表位DNA疫苗能在小鼠体内诱导较强的特异性免疫反应,产生高水平的特异性 IgG 抗体、诱导IL2和 IFN-γ分泌和特异性淋巴细胞增殖,并能显著提高抗结核药物对耐药结核病小鼠的疗效。
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DNA疫苗及其在传染病控制中的应用
随着近年来传染疾病的不断增加，积极的预防与控制传染性疾病是当前医疗中重要的一个问题。其中，疫苗在预防传染性疾病具有重要的作用。随着临床中对疫苗的不断研究，DNA疫苗逐渐的得到相关的疾病预防中，而且具有较好的应用效果。因此，本文对DNA疫苗的特征和在预防传染性疾病的应用情况进行综述。
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汉滩病毒包膜糖蛋白嵌合DNA疫苗的细胞免疫评价及其优势表位的筛选
目的:筛选Gn和Gc抗原优势表位,为汉滩病毒疫苗研究提供方向.方法:通过构建汉坦病毒包膜糖蛋白Gn与Gc嵌合溶酶体相关膜蛋白的DNA疫苗pVAX-LAMP/Gn,pVAX-LAMP/Gc,利用酶联免疫斑点实验(ELISpot)长期评估了BALB/c小鼠体内的细胞免疫应答.结果:在刺激T淋巴细胞的短效与长效免疫中,pVAX-LAMP/Gc组的效应优于其他组,并筛选出优势抗原表位.结论:目前许多新型汉滩病毒疫苗研究缺少细胞免疫应答评价和记忆免疫应答评价.筛选出的Gn和Gc的抗原优势表位,可以为新型汉滩病毒疫苗的研制奠定良好的基础.
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基于融合蛋白的呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展
呼吸道合胞病毒( respiratory syncytial virus,RSV) 是一种引起严重下呼吸道感染的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫功能低下者.目前尚无有效的抗病毒药物和预防疫苗.RSV融合蛋白( fusion protein,F蛋白) 具有高度保守性,其诱导的抗体可同时抑制A型和B型两个亚型的RSV感染.因此,以F蛋白作为靶抗原的RSV亚单位疫苗、颗粒样疫苗和病毒载体疫苗是目前研究的主要策略.现就基于F蛋白的RSV疫苗研究进展作一综述.
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衣原体疫苗的研究进展
衣原体是一类严格真核细胞内寄生、具有独特发育周期的原核细胞型微生物.其分布于世界各地,感染宿主广泛,引起人和动物多种疾病,临床表现复杂,需要寻找一种有效疫苗来加强免疫保护以预防衣原体感染.以亚单位疫苗及相关新策略为重点,就衣原体疫苗的研究状况作一简要介绍.
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DNA传感器及其免疫信号传导通路的研究新进展
DNA于哺乳动物细胞质中的存在是一个危险信号,提示机体内微生物感染的存在.近五年来的研究显示,细胞质DNA的传导机制是免疫系统产生免疫应答的分子基础.迄今为止已报道多种DNA传感器,其中STING是一个关键的衔接蛋白,参与大部分DNA信号传导途径.近,cGAS-cGAMP第二信使通路、IFI16及其他传感器的发现为解析胞质DNA识别的分子机制提供了新见解.这些重要的发现有助于了解宿主防御系统,提高疫苗免疫原性,为感染性疾病的预防与治疗提供新思路.
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DNA 疫苗研究进展
DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗，近年来发展迅速，在预防和治疗病毒性疾病及肿瘤等方面效果显著。同传统的疫苗相比，DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、临床应用方便等优点，但同样存在安全性的担忧。对DNA疫苗的发展及其作用机制、优势进行了综述，并对DNA疫苗的安全性提出了自己的观点与看法，可供DNA疫苗的研究者参考。
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载体在结核DNA疫苗中的应用及其优化
用于抗结核DNA疫苗的免疫效果受很多因素影响,主要包括佐剂及辅佐分子、DNA疫苗导人的方法、载体设计等几方面,其中表达载体对DNA结核疫苗的影响逐渐为研究者所重视.本文就应用于结核DNA疫苗的载体及如何构建优化结核DNA载体作一综述.
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DNA疫苗的质粒型细胞因子佐剂
细胞因子是机体产生的一系列免疫效应和免疫调节蛋白.在近几年,质粒型细胞因子作为能增强DNA疫苗免疫应答的佐剂已引起了研究者广泛的关注.本文就细胞因子的生物学机制、T细胞分化和利用质粒型细胞因子佐剂优化DNA疫苗等方面的进展进行了讨论.
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DNA疫苗免疫增强效应研究进展
DNA疫苗能够诱导机体产生特异性体液和细胞免疫反应,而且与传统疫苗相比具备诸多优点.DNA疫苗能够在小鼠体内诱导有效的免疫应答,但是其效力在灵长类动物和人体内却不尽人意.目前已经有很多方法用于增强DNA疫苗的免疫原性,本文就增强DNA疫苗免疫效应常用方法的新进展作一综述.
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流感病毒DNA疫苗的研究进展
流感病毒是一种危害极大的病原体.常见的流感疫苗有灭活疫苗、减毒活疫苗.随着分子生物学技术的发展,流感DNA疫苗成为流感疫苗的一个重要发展方向.常见的流感DNA疫苗有血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)DNA疫苗、核壳蛋白(NP)、膜蛋白(M)DNA疫苗.联合使用细胞因子DNA对流感DNA疫苗的免疫效果有明显加强作用.众多试验表明,流感病毒DNA疫苗效果良好,其保护效果不逊于传统灭活疫苗,具有良好的发展前景.
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临床用DNA疫苗生产工艺研究进展
DNA疫苗是继传统疫苗和基因工程蛋白亚单位疫苗之后的新一代疫苗,具有很好的市场潜力.DNA疫苗生产工艺的质粒DNA大规模制备技术对DNA疫苗的产业化具有重要意义.本文介绍了DNA疫苗生产工艺的研究进展包括提高质粒DNA产量的策略、发酵后处理工艺、有效去除杂质和分离超螺旋构象质粒DNA的纯化工艺以及DNA疫苗生产相关的质量控制体系等.
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结核DNA疫苗免疫策略研究进展
近年来,结核DNA疫苗的研制得到飞速发展,在传统结核DNA疫苗的基础上构建新型DNA疫苗以及基于结核DNA疫苗的Prime-Boost免疫策略的研究成为热点,新的接种途径及接种技术有助于提高DNA疫苗在试验动物的免疫保护作用,同时对结核DNA疫苗的安全性也不可忽视.
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结核杆菌DNA疫苗研究近况
当今结核病成为一种严重的传染性疾病,现正在研究新型DNA疫苗以取代BCG.目前研究以Antigen85、hsp65,以及结核杆菌培养过滤液中的分泌蛋白ESAT-6和MPT-64编码基因构建的DNA疫苗中取得一定进展,并与BCG联合使用,会大大加强免疫效果,联合疫苗是未来结核菌DNA疫苗的研究方向.
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运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌载体系统
减毒沙门氏菌通过自然感染的方式高效地将DNA疫苗直接运送给体内的抗原提呈细胞(APCs)如树突细胞(DCs)和巨噬细胞,在粘膜和全身淋巴组织诱发以Th1型应答为主的细胞免疫和体液免疫,APCs尤其是DCs可能在其中起到了关键作用.减毒沙门氏菌已被应用于运送病毒、细菌和肿瘤DNA疫苗并取得一定效果,该途径所诱发的细胞免疫要强于肌注途径接种的相同DNA疫苗,原核表达的重组沙门氏菌和接种蛋白质抗原等免疫方法.本文还对如何增强携带DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的免疫效果作了探讨.
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减毒活疫苗作为DNA疫苗载体的研究进展
由于胞内感染菌与宿主细胞之间的相互作用,使相应的减毒活疫苗有可能成为更为理想的DNA疫苗载体.本文就减毒活疫苗作为理想的DNA疫苗的生物学基础、研究进展、存在的问题等方面进行综述.
