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DNA疫苗机制研究进展
DNA疫苗可全面激活机体的免疫反应,具有安全,热稳定性,价廉等优点,尤其是激活的CTL活性将使之在慢性感染性疾病以及肿瘤治疗领域具有广阔应用前景,但DNA疫苗诱发机体产生免疫反应的机制尚有许多问题有待于搞清,现就DNA疫苗机制及研究进展进行综述.
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衣原体疫苗研究进展
衣原体是一类专一细胞内寄生的人兽共患病病原体,所引起的动物及人类疾病相当广泛.本文以亚单位疫苗及DNA疫苗为重点,对衣原体疫苗的研究状况做了简要的介绍.
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口服结核Ag85 A-CD226 DNA疫苗在小鼠脾与肠道的表达水平检测
目的：了解结核 Ag85A-CD226 DNA 疫苗经灌胃方式接种小鼠后在脾淋巴细胞与肠道的表达情况。方法将构建的pcDNA3.1-Ag85A-CD226、pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-CD226真核表达质粒转化DH5α感受态大肠杆菌,扩增并提取纯化质粒,用脂质体包裹制成DNA疫苗。经灌胃方式将制备的DNA疫苗接种C57BL/6小鼠,设置Ag85A-CD226疫苗组、Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组。采用间接免疫荧光法检测Ag85A和CD226在肠道的表达。采用流式细胞术检测脾CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的CD226表达。结果 CD226在Ag85A-CD226疫苗组脾脏CD4+T细胞和NK细胞的表达均明显强于Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)；CD226在Ag85A-CD226疫苗组脾脏CD8+T细胞的表达明显强于Ag85A疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),与CD226疫苗组相比虽有所增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。 CD226在Ag85A-CD226疫苗组小肠派氏淋巴结表达明显强于Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义( P<0.01)。 Ag85A只在Ag85A-CD226疫苗组和CD226疫苗组小肠固有层表达,且在Ag85A-CD226疫苗组的表达明显强于CD226疫苗组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Ag85A-CD226 DNA疫苗接种后,CD226在脾淋巴细胞和肠道表达增强,Ag85A 在肠道表达增强,CD226的表达增加会增强Ag85A在肠道的表达水平。
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龋齿DNA疫苗(PGJAP)中污染大肠杆菌噬菌体的检测方法的建立
龋齿DNA疫苗工程菌采用的大肠杆菌DH-5α在生产过程中极易污染大肠杆菌噬菌体,所以应对原始菌种、主菌种和工作菌种及大量生产时的发酵液作大肠杆菌噬菌体检测. 用大肠杆菌噬菌体VCSM13为标准噬菌体株,对大肠杆菌C3000和DH-5α分别作噬菌斑检测和pfu值计算,验证并确定以VCSM13作为标准噬菌体株,C3000作为检测菌株,对龋齿DNA疫苗原始菌种、主菌种(第一代)、工作菌种(2007001)和其发酵液(200703)分别作噬菌体检测,并建立了检测大肠杆菌噬菌体的直接噬菌斑法.结果显示VCSM13在DH-5α的噬菌斑计数为76,pfu/ml为7.6×1013,C3000的噬菌斑计数为81,pfu/ml为8.1×1013,龋齿DNA疫苗的原始菌种、主菌种、工作菌种和发酵液,噬菌斑计数全部为0.Pfu也为0.阳性对照为74,pfu/ml是7.4×1013,阴性对照为0. 通过对阳性对照样本作增殖法试验及挑斑接种验证后,证明此法操作简单,灵敏度高.
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白细胞介素2提高HBV-S DNA疫苗的免疫效应
目的:观察IL-2真核表达载体对HBV-S DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的特异性免疫应答的影响.方法:肌肉注射基因疫苗及IL-2真核表达载体,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4 h 51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果:免疫8周后,单纯注射pCR3.1-S及共注射IL-2真核表达载体的小鼠血清450 nm A值分别为1.24±0.10及1.98±0.17.CTL细胞杀伤活性分别为(50.5±6.4)%及(61.9±7.1)%,两组均有明显差异(P＜0.01).结论:IL-2的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答.基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染.
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白细胞介素12真核表达载体对DNA疫苗诱导免疫应答的影响
目的:观察白细胞介素12真核表达载体(pWRG3169)对HBV-S DNA疫苗(pCR3·1-S)诱导Balb/c小鼠(H-2d)的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤P815细胞(P815-HBV-S)成瘤性的影响.方法:肌肉注射 DNA疫苗及白细胞介素12真核表达载体,背部皮下接种P815-HBV-S细胞,观察成瘤情况,4 h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果:对照组成瘤率100%,pCR3·1-S组小鼠成瘤率为12.5%,pCR3·1-S+IL-12真核表达载体组成瘤率为0,对照组平均存活期和6周后存活率分别为28.4 d和 0.后两组分别大于38.2 d及45 d,存活率为87.5%及100%,pCR3·1-S 组CTL细胞杀伤活性51.1%, 联合白细胞介素12真核表达载体组72.6%,对照组为20.5%(P<0.01).结论:DNA疫苗可以诱导小鼠细胞免疫应答,对体内HBV感染具有预防及治疗作用.白细胞介素12真核表达载体可加强 DNA疫苗的上述作用.
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编码完整膜蛋白Sj23质粒DNA核酸疫苗免疫小鼠及其保护力的研究
目的 探讨用编码完整膜蛋白(Sj23)核酸疫苗诱导BALB/c小鼠抗日本血吸虫病保护力的作用.方法 大量制备DNA疫苗,BALB/c小鼠被分成3组,肌肉内注射进行免疫.免疫小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周,用ELISA法和Western Blotting法检测免疫鼠血清特异性抗体效价.结果 编码Sj2-pcDNA质粒免疫的小鼠产生了针对Sj23的特异性IgG,而peDNA对照组免疫小鼠血清则无此作用.Sj23-pcDNA疫苗对日本血吸虫攻击感染有一定的保护力.结论 Sj23-pcDNA疫苗能够诱导小鼠产生抗日本血吸虫攻击感染的保护力.
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GM-CSF增强免疫调节作用的研究进展
DNA疫苗免疫哺乳动物存在免疫原性差和免疫效果不理想的诸多问题,因而影响DNA疫苗的免疫效果和应用性.如果要获得效力更持久、反应强度更优化的免疫应答,需要进一步改善DNA疫苗的免疫效果.根据目前的研究,采用佐剂辅助疫苗提高抗原的免疫刺激性,可以使机体更好地获得对外源病原体的防护性免疫应答.佐剂是与抗原同时或预先应用,均能增强机体针对抗原的免疫应答能力,或改变免疫反应类型,成为促进免疫作用的增强剂.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 DNA疫苗 佐剂 免疫调节 -
全长细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及DNA疫苗的构建
目的：克隆分析新疆地区细粒棘球蚴95(Eg95)抗原全长基因的结构特点，并构建Eg95 DNA疫苗。方法：根据细粒棘球蚴95抗原基因序列设计PCR引物，应用PCR方法从新疆株细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95全长抗原目的基因。利用定向克隆技术将全长Eg95抗原基因片段克隆至真核表达质粒pcDNA3上，构建DNA疫苗pcDNA3-Eg95，测序确定基因碱基序列。利用DNAman软件及GeneBank／Blast功能，对其进行基因全序列分析及同源性比较。结果：从新疆株细粒棘球蚴cDNA文库中克隆出全长Eg95抗原基因。所克隆的全长Eg95抗原基因长度为471 bp，编码156个氨基酸。pcDNA3-Eg95阳性克隆均为正确连接全长Eg95抗原基因的重组质粒，可作为DNA疫苗作进一步的研究。新疆株全长Eg95抗原基因与GeneBank中已登录的新西兰株Eg95抗原基因序列一致。结论：成功克隆并构建了新疆株全长细粒棘球蚴95抗原基因DNA疫苗。
关键词： 细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因 DNA疫苗 同源性分析 -
癌胚抗原DNA疫苗对大肠癌特异性细胞免疫的激活效果
目的检测以质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果.方法将CEA基因片段连接于真核表达质粒pIRES中,用肌肉注射方法接种核酸疫苗;检测CEA在小鼠肌肉组织中的表达情况及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫反应的激活效果.结果小鼠经肌肉注射质粒后,免疫组化证实该核酸疫苗可在体内有效表达CEA;分子免疫检测显示注射后小鼠特异性淋巴细胞增值反应明显并且伴有自然杀伤细胞NK活性显著增高.结论实验所构建的核酸疫苗pIRES-CEA可在体外及小鼠体内高效表达并表现出良好的细胞免疫原性.
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小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1DNA疫苗免疫避孕效果的评价
目的:观察小鼠富含半胱氨酸分泌蛋白-1 (Crisp-1)DNA避孕疫苗免疫雌、雄性BALB/c小鼠后特异性抗体的表达及免疫避孕效果.方法:将雌、雄性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组雌鼠12只,雄鼠8只.每只动物经肌肉接种重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1或pcDNA3.1空载体3次,ELISA测定小鼠血清中抗Crisp-1抗体水平的变化,Western blotting检测抗体的特异性.免疫结束后2周,将实验小鼠分别与未接种的正常雌、雄性小鼠合笼,记录每组雌鼠的妊娠率与每窝产仔数.结果:重组质粒pcDNA 3.1-Crisp-1可以在小鼠体内诱发特异性抗Crisp-1免疫应答,免疫后雌、雄性小鼠妊娠率和平均每窝产仔数均显著降低(P＜0.05).结论:重组质粒pcDNA3.1-Crisp-1具有一定的抗生育潜能.
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携带EBV-LMP1△基因的DNA疫苗和腺病毒疫苗联合免疫效果研究
目的 构建携带EBV-LMP1△基因的DNA疫苗,并与携带LMP1△基因的重组非复制5型腺病毒疫苗联合免疫,观察在小鼠体内诱导LMP1△特异性细胞免疫应答的效果.方法 用PCR方法获得去除癌基因的LMP1△基因,插入到pcDNA3.1 (+)-His质粒载体中,构建携带LMP1△基因的DNA疫苗pcDNA-LMP1△.使用pcDNA-LMP1△单独或与携带LMP1△基因的非复制5型重组腺病毒疫苗Ad-LMP1△联合免疫Balb/C小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γ ELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中LMP1△特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)水平.结果 构建成pcDNA-LMP1△DNA疫苗,酶切及测序证实LMP1△基因插入正确,在细胞中能有效表达LMP1△蛋白.pcDNA-LMP1△单独免疫Balb/C小鼠能够诱导产生LMP1△特异性的CTL应答;与Ad-LMP1△联合使用后,能够提高特异性细胞应答水平.结论 构建的重组DNA疫苗pcDNA-LMP1△能够有效表达LMP1△蛋白,并能够在小鼠体内诱导出LMP1△特异性的CTL反应;与重组腺病毒疫苗联合应用,可以提高特异性CTL应答水平.
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DNA疫苗佐剂
DNA疫苗出现于20世纪90年代,Wolff首先发现携带外源基因的质粒DNA通过肌内注射可以使外源基因在体内表达,这激起了科学家们对DNA疫苗初的探索,随后Tang等进行了人类历史上首次DNA疫苗实验,由此一个新型疫苗形式诞生了[1-2].
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以减毒沙门氏菌作为载体的DNA疫苗抗肿瘤血管生成
肿瘤持续性生长和转移依赖于血管生成(angiogenesis).在肿瘤血管生成的影响因素中,有效和特异的因子是血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF).
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HBV表面抗原DNA疫苗对小鼠脏器影响的实验研究
目的:用乙型肝炎病毒(HBV,Hepatitis B Virus)表面抗原DNA疫苗对小鼠进行基因免疫,观察主要脏器病理形态改变,探讨该DNA疫苗是否对肝、肾、脾等有损伤作用.方法:用乙型肝炎表面抗原(HBsAg)DNA疫苗经肌肉注射法免疫小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗HBsAg抗体水平.免疫12周后取小鼠肝、肾、脾等组织,观察其病理形态改变情况.结果:DNA疫苗接种l周后,免疫组小鼠血清中可检测到抗HBsAg抗体,12周后多只小鼠脾脏明显增大,肝、肾组织切片染色观察,可见免疫组小鼠的肝、肾组织均有不同程度的病理改变.结论:HBsAg DNA疫苗可诱导小鼠机体产生特异性抗体(可诱发全面、持久的免疫应答)持续12周以上,同时伴有脾脏肿大和肝肾损伤提示,该DNA疫苗表达产物与免疫小鼠脏器病变有一定的关系,对其临床应用前景值得进一步探索.
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Ⅱ型登革病毒DNA疫苗在小鼠体内免疫保护作用与性别相关性的研究
目的 探讨Ⅱ型登革病毒DNA疫苗pVAX1-D2ME对不同性别小鼠的免疫保护效果的差异.方法 利用pVAX1-D2ME质粒分别免疫雄性和雌性小鼠,每次免疫前及末次免疫后取其血清,检测体液免疫应答的各项指标;并于末次免疫后两周攻毒,观察小鼠的生存率.结果 不同性别小鼠对该疫苗均产生良好的免疫应答,免疫应答具有Th1趋向性;且免疫后不同性别小鼠均可抵抗致死量病毒的攻击,生存率为100%.结论 小鼠性别对免疫应答和免疫保护无明显影响,pVAX1-D2ME免疫小鼠能够诱导产生良好的免疫应答和免疫保护作用.
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综述结核疫苗的的研究进展
目的:总结结核疫苗干预进展.方法:查询与分析近年来有关结核疫苗方面所对应的学术研究成果以及期刊文献资料,对有关问题进行全面归纳与总结.结果:近年来,结核疫苗的研究进展主要集中为重组卡介苗、活载体疫苗、以及DNA疫苗这三种类型.其中,活载体疫苗包括痘病毒载体疫苗以及腺病毒载体疫苗两种类型,DNA疫苗则包括单价/多价DNA疫苗以及转基因植物疫苗这两种类型.结论:针对目前临床广泛使用的卡介苗在抗结核方面效果不甚理想的现状,本文对结核疫苗的新研究进展进行总结,认为通过应用重组卡介苗、活载体疫苗、以及DNA疫苗均能够显著提高结核疫苗对结核病的防治效果,值得临床人员展开深入研究.
