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人类疱疹病毒8型致病机制的研究进展
人类疱疹病毒8型(human herpus virus 8,HHV-8)又名Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi'ssarcoma-associated herpus virus,KSHV),是所有卡波西肉瘤(Kaposi'sarcoma,KS)类型(包括经典型KS、地方型KS、医源性/移植后KS、流行型/AIDS相关性KS)重要的病原体.
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人疱疹病毒8型在某些皮肤病的研究进展
人类疱疹病毒8型和EB病毒同属于γ疱疹病毒,是一种人类致瘤病毒.已明确HHV-8是Kaposi肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)、原发性渗透性淋巴瘤(Primary effusion lymphoma,PEL)和巨大淋巴结增生症(Castleman's disease,McD)发生的病因.近年来,随着对HHV-8致病机制研究的深入,HHV-8与某些皮肤病的相关性受到较多学者关注.本文现综述HHV-8在血管性肿瘤、化脓性肉芽肿、结节病和其他皮肤病的新研究进展.
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人类疱疹病毒8型亚型的研究进展
人类疱疹病毒8型(Human herpesvirus 8,HHV-8)的发现在HHV-8相关疾病的研究方面开辟了一个新领域,HHV-8亚型具有明显的地理分布特点,并且其临床意义已逐渐引起众多学者的关注.
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人类疱疹病毒8型基因亚型与Kaposi肉瘤相关性的研究进展
Kaposi肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)是一种罕见的特发性多灶性血管内皮肿瘤,本病分为经典型KS、艾滋病(AIDS)相关性KS、地方性KS、医源性或移植后KS四种类型.虽然其发病机制尚未明确,但研究已经证实人类疱疹病毒8型(HHV-8)与KS之间的关系密切,认为HHV-8对KS可能不仅是机会感染,而是KS的可能病因之一.目前国内外有关HHV-8与KS之间密切关系的相关研究提示:HHV-8是KS主要的致病因子.2μg的HHV-8便可以感染人群,并作为KS病原学诊断的因素之一[1],同时HHV-8亚型与不同KS临床类型及损害之间的相关性也越来越引起各国学者的重视.现对HHV-8型基因亚型与KS关系的研究作如下综述.
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人类疱疹病毒8型传播途径的研究进展
人类疱疹病毒8型(HHV-8)的传播途径包括唾液传播、精液传播、器官移植传播和血液传播,其中是否通过输血传播始终有争议.在低流行率的北美地区,多个研究小组的研究结果显示,在HHV-8血清学阳性的献血者中未发现HHV-8 DNA;而来自高流行率地区的乌干达的研究却表明HHV-8可通过输血传播给受血者,甚至引起死亡.本文在介绍HHV-8的基本特点、流行特征和传播途径的基础上,对HHV-8通过输血传播的可能性进行分析.在目前情况下,延长血液冷藏时间、白细胞去除和病毒灭活等技术,在一定程度上降低了HHV-8输血传播的风险,保证输血安全.
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HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型
目的研究HIV-1感染中相关细胞因子IFN-γ对人类疱疹病毒8型(HHV-8)Rta基因启动子活性影响;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性.方法将已构建的HHV-8 Rta启动子+虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV-1 Tat基因重组表达质粒转染多种细胞,转染后24 h加入IFN-γ和/或重组HIV-1 gp120刺激,刺激后24 h收集细胞,进行虫荧光素酶活性检测.试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照,进行佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较. 结果① HHV-8 Rta启动子启动活性在TPA刺激后的24 h达到高峰;② HHV-8 Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV-8和/或EBV基因组的存在,且在血管内皮细胞(HUVECs)中启动活性佳;③ IFN-γ可以诱导Rta启动子活性;但HIV-1 Tat和gp120蛋白与IFN-γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱. 结论 HIV-1感染中相关细胞因子IFN-γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV-8的复制.
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Kaposi肉瘤组织人类疱疹病毒8型免疫组化检测
目的探讨免疫组化检测Kaposi肉瘤（KS）组织人类疱疹病毒8型(HHV-8)的可行性及其诊断意义。方法采用免疫组化方法分别检测58例KS组织和40例化脓性肉芽肿组织中HHV-8的表达。结果①HHV-8在KS真皮瘤体中的表达阳性率为94.83%(55/58)，在化脓性肉芽肿表达均阴性，在KS组织和血管瘤组织瘤体中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。②HHV-8在KS组织表皮中表达阳性率为6.90%（4/58），血管内皮细胞中的表达阳性率为91.38%(53/58)，真皮梭形细胞中表达阳性率为94.83%(55/58)。③结节期KS组织中表达HHV-8阳性的细胞所占比例较斑片期及斑块期明显增多，其差异有统计学意义（P＜0.05）。结论免疫组化方法检测HHV-8在KS的诊断中具有重要意义。
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302例新疆梅毒患者人类疱疹病毒8型感染状况
卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma associated herpesvirus,KSHV),即人类疱疹病毒8型(Human herpes virus type-8,HHV-8),是卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma,KS)关键的致瘤因素.目前HHV-8确切的传播方式尚不明确,异性间是否存在HHV-8性传播有广泛争议.选择不安全性行为或性乱人群中感染梅毒这类主要性传播疾病患者,进行HHV-8感染流行病学调查及危险因素分析.
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Kaposi肉瘤患者病情进展与HHV-8病毒载量相关性的研究进展
Kaposi肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)、部分多中心血管滤泡淋巴增生症(multi-centric castle-man's disease,MCD)和原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)等和AIDS相关恶性肿瘤的发生与人类疱疹病毒8型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)密切相关[1].HHV-8是一种重要的具有高度致癌性的人类肿瘤病毒,在HHV-8相关的疾病中,KS为多见.研究表明,在Kaposi肉瘤患者的瘤组织中,HHV-8DNA检出率为80％～100％[2].随着实时荧光定量PCR技术的发展,从定量角度分析和探讨HHV-8病毒载量在Kaposi肉瘤患者病程即斑片-斑块-结节等顺序演进变化过程中的作用已有不少研究.
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人类疱疹病毒8型感染与卡波西肉瘤中TLR4、Notch1通路功能的相关性研究
目的 分析人类疱疹病毒8型(HHV8)感染与卡波西肉瘤中Toll样受体4(TLR4)、Notch1通路功能的相关性.方法 选择2015年8月—2017年10月新疆维吾尔自治区人民医院消化科内镜下获得并经病理学确诊的消化道卡波西肉瘤组织及瘤旁组织作为研究对象,测定组织中HHV8的感染情况以及TLR4通路分子、Notch1通路分子的表达量.结果 卡波西肉瘤组织中HHV8阳性率以及Notch1、JAG1、HES1、PTEN、CyclinD1的mRNA表达量与瘤旁组织比较显著升高(χ2=14.072,P=0.000;t=15.035、17.998、16.879、14.241、19.946,P均=0.000),TLR4、ICAM1、TNF-α、IL-1β 的mRNA表达量与瘤旁组织比较均明显降低(t=13.240、20.509、17.393、14.864,P均=0.000);HHV8感染的卡波西肉瘤组织中TLR4、ICAM1、TNF-α、IL-1β 的mRNA表达量与HHV8未感染的卡波西肉瘤组织比较均明显降低(t=17.063、11.671、14.491、15.048,P=0.000),Notch1、JAG1、HES1、PTEN、CyclinD1的mRNA表达量与HHV8未感染的卡波西肉瘤组织比较均明显升高(t=6.173、7.189、7.306、15.215、8.284,P均=0.000).结论 消化道卡波西肉瘤中HHV8感染率增加且与TLR4通路的抑制、Notch1通路的激活有关.
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人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白编码基因K8.1的分离、克隆及在大肠杆菌中的表达
目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1编码基因,并置于大肠杆菌中作融合表达.方法:设计一对PCR引物,在引物的5｀端分别引入BamH I、Xho I酶切位点,以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增出K8.1编码基因,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含K8.1基因重组质粒.重组质粒转化大肠杆菌(E coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.结果:分离、克隆的411bp序列与基因数据库中所登记的HHV-8 K8.1序列呈现100%同源性.IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个41 ku的融合表达蛋白产生.结论:HHV-8 K8.1编码基因在E. coli中初步获得正确表达.
关键词： 人类疱疹病毒8型 包膜糖蛋白K8.1基因 原核表达 -
HHV-8 ORF50启动子区序列分离、鉴定及在293细胞中启动活性分析
目的:分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50基因上游启动子区序列,评价其在293细胞中启动活性.方法:以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8 ORF50启动子区序列,克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因上游多克隆位点,分别构建含正反双向ORF50启动子重组报告质粒,并分别转染293细胞,作Lu-ciferase活性检测,计算相对Luciferase活性单位(RLU).结果:①克隆的HHV-8 ORF50启动子区序列长655碱基(bp),含多个潜在推测AP1、SP1和ERE等转录因子结合序列;②ORF50启动子与正常pGL-3基本载体相比,其RLU增加了26.3倍;③TPA刺激后ORF50启动子与刺激前相比启动活性增加了4.1倍.结论:HHV-8 ORF50启动子区序列在293细胞中具有较强的启动活性;TPA可以作为一有效的阳性对照刺激物用于进一步鉴定ORF50启动子特性.
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人类疱疹病毒8型肿瘤转化基因K12的分离及在昆虫细胞中的表达
目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达.方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8肿瘤转化基因K12.将经序列测定后的PCR产物克隆进杆状病毒转移载体pVL1393中,构建成重组K12杆状病毒转移载体pVL-K12,并与线性BaculoGold病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组病毒.RT-PCR检测K12 mRNA转录水平;间接免疫荧光染色(IFA)检测K12编码蛋白在Sf9细胞中的表达状况.结果:含HHV-8 K12基因重组杆状病毒在昆虫细胞Sf9中获得表达,经IFA证实该重组蛋白为HHV-8特异性蛋白.结论:杆状病毒载体能够介导HHV-8肿瘤转化基因K12编码的蛋白在昆虫细胞中表达.
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人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆、表达及表达产物的纯化
目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达.并纯化融合表达的vIL-6.方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和peD-NA3.1+vIL-6为模板,PCR扩增目的基冈片段,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含HHV-8 ORF50截短基因的重组原核表达质粒pORF50-C1,pORF50-C2,pORF50-C3和含vIL-6伞长基因的重组原核表达质粒pvIL-6.重组质粒经酶切鉴定和核酸序列测定正确后转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.用glutathione Sepharese 4B亲和层析柱纯化vIL-6表达产物.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot检测GST融合蛋白的表达和纯化情况.结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的序列与基因数据库中已登记的HHV-8相应序列呈现100%同源:IPTG诱导后的菌体.经SDS-PAGE,显示有相应大小的融合表达蛋白产生.Western blot亦在预期的位置检测到特异性条带.结论:在E.coli中获得了正确表达的HHV-8 ORF50基因3个截短片段和vIL-6全长基因,并成功纯化vIL-6融合蛋白.
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HIV-1 Rev基因编码蛋白在PEL细胞系中的表达及其表达蛋白抑制HHV-8溶解性周期复制
目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression, Rev)编码基因的重组真核表达质粒并初步探索Rev基因编码蛋白对人类疱疹病毒8型(HHV-8)溶解性周期复制的影响.方法:构建pRev-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pRev-Flag重组质粒瞬时转染原发性渗出性淋巴瘤细胞系(PEL)BCBL-1细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Rev基因的表达情况;提取瞬时转染pRev-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测HHV-8次要衣壳蛋白编码基因ORF26 mRNA转录水平.结果:核酸序列分析结果表明,克隆的Rev基因序列与GenBank中已登记的Rev序列100%同源.RT-PCR和Western blot都在Rev预期位置检测到特异性条带.RT-PCR检测显示,Rev基因对编码蛋白能够降低HHV-8 ORF26 mRNA转录水平.结论:成功构建含Rev基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达;初步探索表明Rev蛋白能够抑制HHV-8溶解性周期复制.
关键词： 人类免疫缺陷病毒1型 病毒颗粒蛋白表达调节因子 人类疱疹病毒8型 复制 -
人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达
目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virus interferon regulatory factor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达.方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5'端分别引入Hind Ⅲ和BamH Ⅰ酶切位点.以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pK9.为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5'端引入了Flag序列.以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1(+)中,得到重组质粒pK9F.重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况.结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1 380 bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中已经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在K9预期位置检测到特异性条带.结论:HHV-8 K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达.
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人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的融合蛋白进行变性、复性、复性后的Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化.以纯化的GST/K8.1融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备单克隆抗体.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌K8.1单抗的杂交瘤细胞株.免疫组化染色(IHC)和Western blot法鉴定单抗的特异性.结果:建立了一株稳定分泌抗K8.1单抗的杂交瘤细胞株,命名为3G10;IHC和Western blot法显示,3G10株单抗能特异地识别HHV-8 K8.1蛋白.结论:成功制备出抗HHV-8包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体.
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无偿献血者人类疱疹病毒8型和人类巨细胞病毒感染调查
目的：调查温州地区无偿献血者人类疱疹病毒8型（HHV－8）和人类巨细胞病毒（HCMV）感染情况，为制定预防策略提供依据。方法采用 ELISA法检测无偿献血者血浆 HHV －8 IgG和 HCMV －IgG抗体，并分析HHV－8IgG和HCMV－IgG阳性率与人口学特征的关系。结果273名无偿献血者的HHV－8 IgG抗体阳性率为14.65％，465名无偿献血者的HCMV－IgG抗体阳性率为24.09％。不同年龄、文化程度和职业献血者的HHV－8 IgG阳性率差异无统计学意义（P＞0.05），HCMV －IgG阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）。44～55岁、初中及以下文化、工人／农民 HCMV －IgG阳性率相对较高。结论温州地区无偿献血者中存在一定比例的HHV－8和HCMV感染，建议增加相关筛查，特别是高龄、低文化程度和工人／农民职业人群。
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宫颈病变女性人类疱疹病毒8型DNA检测结果分析
目的 了解宫颈病变女性人类疱疹病毒B型(human herpes virus 8,HHV-8)感染状况,探讨HHV-8感染与宫颈病变的关系.方法 随机选择组织学确诊为宫颈上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)和宫颈癌的患者310例作为观察组,同区域、同期参加健康体检并排除有宫颈病变的女性310例为对照组,采集血液标本,提取DNA,巢式PCR检测HHV - 8 ORF26,核酸电泳观察结果.结果 观察组血液样品HHV -8检出率11.8％( 33/280),对照组检出率6.9％(20/288),两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 宫颈病变女性HHV-8 检出率高于正常女性,应加强监测.
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人类疱疹病毒8型基因甲基化的研究进展
DNA甲基化是目前明确的肿瘤表观遗传学机制,近年来研究发现基因启动子区CpG岛甲基化异常,是许多恶性肿瘤发生发展的重要原因.甲基化通常与转录抑制有关.甲基化的CpG岛可产生阳性信号导致相关基因沉默.即基因高甲基化状态则抑制基因的表达,低甲基化状态则促进基因的表达.近年研究表明,人类疱疹病毒8型(HHV-8)的ORF50基因及ORF73基因甲基化与病毒由潜伏期至裂解期的转换密切关联.另外,甲基化过程是可逆的,可受药物及组蛋白甲基化的影响,为HHV-8致病机制提供了新的研究线索.
