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IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMC B细胞刺激因子表达中的作用
[目的]探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)B细胞刺激因子(Blys)基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响.[方法]梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞,分为2组,IL-1O(100 ng/mL)组和培养基组(仅含RPMI1640培养基),分别于培养0、6、12、24、72 h离心收集PBMCs,RT-PCR法检测刺激后0～24 h细胞Blys mRNA表达,流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72 h膜结合型Blys蛋白表达.[结果]①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA和蛋白表达体外高于健康对照(P＜0.001).②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA表达,12 h作用强(0.487±0.058 vs 0.251±0.050,P＜0.001;0.638±0.084 vs 0.392±0.059,P＜0.001).③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达(FACs,4.53±0.71 vs 3.24±0.57,P＜0.001;5.79±0.91 vs 4.55±0.83,P＜0.001).④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示,IL-10刺激后Blys表达增强.[结论]IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达.
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银屑病性关节炎及类风湿性关节炎与B淋巴细胞刺激因子的关系
目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BLyS)在银屑病性关节炎(PsA)、类风湿性关节炎(RA)患者不同体液中的表达差异及其相关性.方法 用ELISA法测定PsA、RA患者及健康对照者血清、关节液、尿液中的BLyS水平,并进行对比研究,将RA患者按照DAS28标准分为缓解期和高度活动期,分析BLyS与RA疾病活动度的相关性.结果 (1)PsA、RA患者血清中BLyS水平均高于健康对照者(P＜0.05),两种疾病患者尿中BLyS水平与健康对照者差异无统计学意义(P>0.05);(2)血清中BLyS水平为RA患者＞PsA患者＞健康对照者;(3)RA患者关节液中BLyS水平＞血清中BLyS水平＞尿液中BLyS水平.(4)RA患者血清中BLyS水平与疾病活动度呈正相关(r=0.372,P=0.007).结论 BLyS在PsA、RA的发病中起到一定作用,BLyS水平可能有助于评估RA疾病活动性.
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B淋巴细胞刺激因子及拮抗剂与系统性红斑狼疮的研究进展
B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)是1999年发现的肿瘤坏死因子超家族的第13位成员,因其显著的B细胞生长刺激作用而得名.此外还称:激发凋亡、核转录因子κB和氨基末端激酶的TNF类似物(TNF homologue that activates apoptosis,nuclear factor-κB,and c-jun NH2-terminal kinase,THANK),白细胞表达的TNF和凋亡相关的配体1 (TNF and apoptosis ligand-related leukocyteexpressed ligand 1,TALL 1),TNF家族的B细胞活化因子(B cell activation factor belonging to the TNF family,BAFF) [1～4].BLyS的主要作用是刺激B淋巴细胞增殖、分化和分泌抗体,其正常表达对维持依赖和不依赖T细胞抗原刺激的B细胞活化和增殖至关重要.BLyS的过度表达与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的发病关系密切.本文就BLyS及其受体的生物学功能、参与SLE的发病机制以及BLyS拮抗剂应用于SLE临床治疗的研究进展综述如下.
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B淋巴细胞刺激因子及其受体与系统性红斑狼疮的相关性研究
目的：探讨B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其特异性受体（BAFF-R）与系统性红斑狼疮（SLE）的相关性。方法 SLE患者33例，根据SLE疾病活动指数（ SLEDAI）评分，分为活动组20例和缓解组13例。同期体检健康者30例为对照组。应用酶联免疫吸附试验法检测3组研究对象血清BLyS 、BAFF-R水平，观察SLE患者血清BLyS、BAFF-R水平与抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（ds-DNA）、白细胞（WBC）、补体C3、C4和SLEDAI评分的相关性。结果活动组患者血清BLyS、BAFF-R水平均明显高于缓解组及对照组（ P＜0．05），缓解组患者血清BLyS水平明显高于对照组（P＜0．05），但缓解组与对照组血清BAFF-R水平比较，差异无统计学意义（P＞0．05）；SLE患者血清BLyS、BAFF-R水平均与SLEDAI呈正相关关系（P＜0．05）；BLyS水平与ANA呈正相关关系（P＜0．05）；BAFF-R与ANA无明显相关关系（P＞0．05）；SLE患者血清BLyS、BAFF-R水平与ds-DNA无明显相关关系（ P ＞0．05）；SLE 患者血清 BLyS、BAFF-R 水平与 WBC、C3、C4水平均呈负相关关系（ P＜0．05）。结论 SLE患者血清BLyS、BAFF-R水平与SLE病情密切相关，对SLE病情的评价有重要价值，且BLyS可能比BAFF-R更有效。
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系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞刺激因子的水平研究
目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)蛋白水平,并探讨其与尿蛋白的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿蛋白阳性组(17例)和尿蛋白阴性SLE患者组(20例)血清Blys水平,以健康志愿者(30例)作为对照.结果 SLE患者血清Blys水平明显高于健康对照组(P＜0.05),但尿蛋白阳性组血清Blys水平与尿蛋白阴性组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLE患者Blys水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关.
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B淋巴细胞刺激因子参与类风湿性关节炎的发病机制及其靶向治疗药物研究进展
目的:为研究B淋巴细胞刺激因子(BLyS)参与类风湿性关节炎(RA)的发病机制及其靶向治疗药物提供文献支持.方法:综述了BLyS的生物学特性、参与RA的发病机制以及靶向于BLyS治疗RA的新药研究等方面的内容.结果:BLyS是一种Ⅱ型跨膜蛋白,由285个氨基酸组成,其作为肿瘤坏死因子家族的新成员,对B淋巴细胞的增殖活化起重要调节作用；BLyS的过表达与RA等自身免疫病的发病机制和疾病进程关系密切；以BLyS为靶点的治疗RA的药物(Belimumab、BR3-Fc、TACI-Ig)经临床试验证实取得了良好的治疗效果.结论:BLyS参与了RA等自身免疫病的发病机制,是具有高度特异性的新靶点,故研制BLyS拮抗药将成为RA等自身免疫病高效且安全的免疫治疗方法.
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左旋棉酚通过细胞自噬下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子的表达
目的 探讨左旋棉酚[ (-)-gossypol]下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)的可能机制.方法 采用CCK8、台盼蓝活细胞染色检测左旋棉酚在体外对Namalwa细胞的生长抑制作用,吖啶橙( acridine orange,AO)染色观察经左旋棉酚处理后细胞自噬的形态特征,Western blot检测细胞中BLyS和自噬蛋白微管蛋白轻链3(LC3)的表达情况.结果 左旋棉酚对Namalwa细胞有明显的增殖抑制作用,并且具有时间和剂量依赖性；AO染色后细胞内可观察到明显的细胞自噬小体；Western blot结果显示,左旋棉酚可下调Namalwa细胞中BLyS的表达,并上调LC3Ⅱ蛋白的表达；自噬特异性抑制剂3-methyladenine(3-MA)可显著抑制左旋棉酚对BLyS的下调与LC3Ⅱ的上调作用.结论 左旋棉酚可能通过诱导细胞自噬来下调B淋巴细胞中BLyS的表达,从而抑制细胞生长.
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GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响
目的 探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10 μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为加入GW3965共孵育后24 h.用LXR的特异性激动剂GW3965刺激人B细胞淋巴瘤株Raji细胞,经 RT-PCR 检测 LXR特异性靶基因三磷酸腺苷结合盒A1 (ATP-binding cassette,ABCA1) mRNA的表达;经 RT-PCR和 Western blot 检测BLyS的表达.结果 对照组1 ‰DMSO D(492)为(0.632±0.055),0 5、5 μmol/L和10 μmol/L的GW3965 D(492)为(0.609±0.073)、(0.612±0.052)和(0.628±0.055).LXR的特异性配体GW3965对细胞活性无影响(P>0.05).GW3965作用于Raji细胞后,ABCA1 mRNA 表达剂量依赖性上调,LXR活化后可在转录和翻译水平剂量依赖性下调抑制BLyS的表达.结论 LXR在Raji细胞中可抑制BLyS的表达.
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BLys和TLR-4在系统性红斑狼疮转基因小鼠模型中的作用及可能机制
目的 研究Toll样受体-4(Toll-like receptors-4,TLR-4)与B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLys)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)转基因小鼠模型中的作用及可能机制,为SLE的治疗提供新靶点.方法 选择SPF级EB病毒膜抗原BLLF1转基因雌性小鼠共30只,随机分成空白对照组、BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组各10只,选择SPF级野生型小鼠为野生对照组.BLys阻断剂组应用抗BR3单克隆抗体500 mg/d,腹腔注射连续10d,TLR-4阻断剂组应用抗人TLR-4抗体250 mg/d,腹腔注射连续10d,野生对照组和空白对照组腹腔注射等量生理盐水.继续喂养10d后无菌取尾静脉血,RT-PCR法检测TLR-4 mRNA水平,ELISA法检测白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和IL-2水平,金标免疫斑点法检测抗dsDNA抗体滴度,常规生化法检测补体C3 (complement 3)、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)水平,对小鼠肾脏进行HE和Masson染色.结果 野生对照组和BLys阻断剂组,空白对照组和TLR-4阻断剂组外周血中单个核细胞(PBMC)的BLys无统计学差异(P＞0.05);与野生对照组和BLys阻断剂组比,空白对照组和TLR-4阻断剂组PBMC的BLys明显增高(P＜0.05).提示EB病毒膜抗原BLLF1转基因小鼠为SLE模型,BLys阻断剂可阻断PBMC的BLys的表达.野生对照组和空白对照组干预前后的TLR-4 mRNA、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-2、抗dsDNA抗体、C3、ESR和CRP表达无明显差异(P＞0.05);空白对照组、BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组干预前外周血TLR-4 mRNA、IL-6、IL-17、TNF-α、抗dsDNA抗体、C3、ESR和CRP表达无明显差异(P＞0.05).干预后,BLys阻断剂组和TLR-4阻断剂组的TLR-4 mRNA、IL-6、IL-17、TNF-α、抗dsDNA抗体、C3、ESR和CRP较干预前明显降低(P＜0.05),IL-2较干预前明显增高(P＜0.05).与野生对照组比,其余组别的TLR-4 mRNA、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-2、C3、ESR和CRP表达干预前后均存在差异(P＜0.05).与空白对照组比,BLys阻断剂和TLR-4阻断剂组HE和Masson染色均有明显改善.结论 BLys和TLR-4可能是参与SLE的发生发展,机理可能与调节免疫炎症反应有关.
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人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化
目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子.方法经PCR方法构建msBLyS cDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性.结果 DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致.HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达.经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上.活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖.结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础.
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重组人B淋巴细胞刺激因子纯化及其生物活性鉴定
目的获得高纯度和高活性的B淋巴细胞刺激因子.方法重组原核表达载体pQE-80L-BLyS112-285在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBLyS112-285,超声碎菌,提取包涵体,经Ni2+-NTA亲和层析和Sephare S-200凝胶过滤层析纯化后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性.结果得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBLyS112-285蛋白.结论优化了BLyS蛋白的纯化和复性的参数,所获结果为进一步研究创造了条件.
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B淋巴细胞刺激因子与多发性骨髓瘤关系的研究
B淋巴细胞刺激因子(BLyS)通过和隶属与肿瘤坏死因子受体超家族成员的BCMA,TACI和BLyS-R的结合,在调节外周成熟B淋巴细胞的发育过程中起着重要的作用.由于在多种自身免疫性疾病及肿瘤性疾病中的异常表达,BLyS和其受体也被认为是治疗自身免疫性疾病及肿瘤性疾病的重要治疗靶点.
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小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子真核表达载体pSecTag2B-msBlyS的构建
目的克隆BAL B/c小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子(msBlyS)的cDNA片段并测序分析,为研究msBlyS诱导的抗肿瘤作用提供目的基因.方法采用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法从BAL B/c小鼠脾脏组织总RNA中获得566 bp的msBlyS基因cDNA.通过TA克隆测序无误,再将其定向连接到pSecTag2B真核表达载体上,转化E.coli XL1-blue.限制性内切酶筛选出阳性克隆pSecTag2B-msBlyS,末端终止法完成msBlyS cDNA的序列测定.结果测得的msBlyS cDNA序列与基因文库中报道序列完全相同,插入相位正确,未改变目的基因的阅读框架.结论成功克隆了小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子基因,为研究其诱导的抗肿瘤作用奠定了基础.
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B淋巴细胞刺激因子与干燥综合征的研究进展
B淋巴细胞刺激因子是B细胞生长、发育和分化中重要的免疫调控因子,其过度表达可能参与干燥综合征发病机制中自身反应性B细胞的产生和自身免疫耐受的失衡.鉴于BlyS具有明显的B细胞趋向性,针对BlyS靶目标研制特异性抗体,拮抗其诱导的B细胞的高度活化和病理性自身抗体的产生,有望开辟一条治疗SS等自身免疫性疾病的新途径.
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人B淋巴细胞刺激因子融合蛋白的表达与功能鉴定
目的:构建人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)的真核表达质粒,表达具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白.方法:PCR扩增hbaff胞外区编码基因,加入HA信号肽与hIgG1 Fc后,连入pTT3真核表达载体,采用磷酸钙法转染293T细胞.培养上清经蛋白G纯化后,SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达.流式细胞术检测Fc-hBAFF对人B细胞的增殖情况.结果:成功构建pTT3-HA-hIgG1 Fc-hBAFF 融合表达质粒,体外大量表达纯化的Fc-hBAFF蛋白经SDSPAGE与Western blot鉴定正确,并发现Fc-hBAFF蛋白对人外周血B细胞有明显促增殖作用.同时通过尾静脉高压注射的方式证实该质粒能在体内持续表达7d.结论:体外表达并获得了具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白.
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多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平
目的 探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR),对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白(β2M)的相关性.结果 MM患者血清BLyS含量(6.99±3.28 g/L)明显高于健康对照组(2.70±1.09 g/L,P<0.01),并与β2M浓度呈正相关性(r=0.954,P=0.000);77.42%(24/31),93.55%(29/31),90.32%(28/31)的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS,B细胞成熟抗原(BCMA) mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与β2M的含量呈正相关;而64.52%(20/31)患者穿膜蛋白活化物(TACI) mRNA表达水平降低.结论 MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.
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血清B淋巴细胞刺激因子与SLE关联性的初步研究
目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)水平,并探讨其与其它临床指标的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测正常对照组(30例)和SLE患者组(37例)血清BLyS水平.结果 SLE患者血清BLyS水平明显高于健康对照组(P＜0.05).结论 SLE患者BLyS水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关.
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过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的检测
目的 了解TRANCE和BLys在过敏性紫癜发病中的作用.方法 通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平.结果 过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平(2.83±0.96,90.48±2.64)与正常对照组(0.85±0.35,82.02±4.04)相比均升高(P＜0.01),伴有肾脏损害患者血清中TRANCE,BLys的表达水平(4.09±0.45,93.92±2.07)与单纯型患者(2.44±0.70,89.42±1.75)相比显著增高(P＜0.01).患者血清中TRANCE与BLys的表达水平呈显著正相关(r =0.515,P＜0.01).结论 过敏性紫癜患者血清中TRANCE,BLys的表达异常增高,可能与其发病有关.
