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猪劈离式实验原位肝脏移植模型的建立及探讨
目的 制作猪肝脏劈离式原位肝脏移植模型,为临床肝脏移植提供稳定的模型基础.方法 采用改良的原位肝脏移植20例,对供肝沿Taira线劈离,对断面修整后,分别行原位移植,观察血流动力学及血液生化和温度的变化.结果 手术时间(220±31)min及无肝期(35±6)min动物术后肝功能恢复顺利,手术成功率50%,10例动物存活时间均超过48 h.结论 采用猪同种异体原位劈离式肝脏移植模型(沿Taira线)具有操作简便,标准化程度及手术成功率高,重复性和稳定性好的优点,是大动物肝移植系列研究的较理想动物模型,为充分利用有限的器官资源提供理论支持.
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回盲肠间置幽门替代术动物模型的初步探讨
目的探讨回盲肠间置幽门替代术应用于动物胃肠道重建的可行性.方法将21头成年健康小型猪分为3组:假手术对照组(正常组)、B-I式胃大部切除组和远端胃大部切除带蒂回盲肠间置幽门替代手术组(回盲肠间置组).术后观察对照动物的生存情况.结果手术后4个月,回盲肠间置组几乎未见呕吐、厌食及食量下降等现象;营养、精神状态及体力与正常组无甚差别;体重与术前无明显变化.而上述现象在B-I式组可见,且精神体力较差,体重较术前降低明显(P<0.05).结论回盲肠间置替代幽门重建消化道的动物模型可以借鉴.
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小肠浆肌膜腔内自体脾组织移植动物模型的建立与意义
目的探讨增加自体脾组织移植量的方法,提高自体移植脾组织的功能.方法贵州小型香猪3头,经肌注麻醉后剖腹切除脾脏,取脾脏的1/2约150 g,切成1 mm×1 mm×1 mm小块备用.在距Treitz韧带50 cm处,切取保留肠系膜血管的空肠30 cm旷置,再吻合肠管恢复肠腔通道,缝闭肠系膜裂口.旷置空肠等分2段,去除肠粘膜,缝闭一端,将约50 g脾组织块分别植于2段肠浆肌膜腔内,缝闭另一端口,妥善固定于肠系膜上.大网膜内移植30 g脾组织作为对照观察.结果 4个月饲养期间内无肠梗阻发.3段肠浆肌膜腔内脾组织再生良好,组织结构与大网膜内移植脾组织无明显差别,2段再生较差,1段形成脓肿.结论肠浆肌膜腔内移植脾组织的量较大,可作为自体脾组织的移植术式.
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皮肤伸展术对猪创周皮瓣成活的影响
目的观察皮肤伸展术对猪创周皮肤所形成皮瓣成活的影响.方法在4只猪的胸背部制成6cm×10cm矩形创口, 采用皮肤伸展术于伤后5～6天用4号丝线缝合关闭创口.分别于缝合后2周和3周在距愈合线两侧4cm和10cm处分别形成4cm×10cm的矩形皮瓣,蒂部在背侧.靠近愈合线者为实验组,远者为对照组,同时以另1头猪的正常皮肤处作正常对照.结果正常组、实验组和对照组三者之间皮瓣成活长度无明显差异.结论皮肤伸展术虽然能增加局部的血液循环,但在伴有皮肤创口的情况下,并不能使伸展后的皮肤组织所形成皮瓣的成活面积增加.
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高速撞击下猪右侧胸腔内压力分布特点研究
目的观察猪胸部撞击伤,胸腔内不同部位压力响应特点及其与肺损伤的关系.方法健康小型猪6只,经外科手术在右侧胸腔不同部位放置生物压力传感器,待动物情况稳定后,利用BIM-Ⅱ型水平撞击机对右侧胸壁进行撞击致伤,撞击头接触面积20cm2,撞击速度为19m/s,撞击压缩比为8%和15%,分别记录和分析胸腔不同位置的压力响应曲线,伤后6小时解剖观察肺损伤情况.结果 7、8肋间靠近脊椎处正压峰值和正压积分值显著高于其他部位(P<0.01),15%压缩比组分别达到(67.6±7.7)kPa和(140.4±20.2)kPa·ms,肺门近心包处压力峰值和其积分值次之;15%压缩比组中5、6肋间隙中线处、膈肌中线处与肺门近心包处的正压峰值与正压积分显著高于8%压缩比组(P<0.01).大体解剖发现8%压缩比组未见明显肺损伤,15%压缩比组右肺下叶背侧面有弥漫性出血区,背侧第7肋附近出现条状肺出血.结论 19m/s撞击时,猪右侧胸腔内不同部位的压力响应有显著差异;高压缩比撞击下,右肺下叶背侧面与肺门近心包处压力峰值和压力积分值高且肺损伤较重;5、6肋间隙中线、膈肌中线和肺门近心包等部位的压力响应与撞击压缩比显著相关.
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常温和干热环境下腹部肠管火器伤动物模型的建立
目的 建立常温环境和沙漠戈壁干热环境下的腹部肠管火器伤动物模型.方法 30头猪随机分为常温环境组(N组)、干热组Ⅰ(HⅠ组)、干热组Ⅱ(HⅡ组)3组.麻醉后将各组猪以行走位悬挂于靶场门廊上,以54式手枪弹射击猪下腹部,比较各组动物伤情和伤后24小时存活率,对死亡动物及伤后24小时仍存活动物进行剖腹探查并进行病理学检查.结果 各组动物之间肠穿孔数差异无统计学意义(P＞0.05),伤后24小时N、HⅠ、HⅡ组的存活率分别为90%、80%、0;N组和HⅠ组存活率无统计学差异(P＞0.05),N、HⅠ组存活率明显高于HⅡ组(P＜0.01);剖腹探查见N、HⅠ组死亡动物和HⅡ组动物腹腔渗出相对较多,腹压较高,恶臭明显,腹膜炎较重.结论 本实验成功建立了7.62mm枪弹腹部肠管火器伤模型,同时提示戈壁干热环境能明显降低动物存活率,伤后应立即转运后送.
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猪肺挫伤数码断层图像与CT诊断的比较
目的比较分析病理数码断层图像(pathological digitized sectional image,PDSI)与CT扫描在猪肺挫伤诊断中的差异.方法采用BIM-Ⅱ型生物撞击机制作小香猪肺挫伤模型,并于伤后6小时行CT断层摄影(层厚5 mm),吸气末结扎气管后,行肺动脉冲洗及灌注.截取猪胸部并冰冻后,在-25℃低温实验室中用TK26350型数控铣床(铣切精度为1mm)逐层铣切,并逐层摄取猪胸部的连续断层图像数据,运用3D-doctor软件分割数码断层图像并与对应层面CT扫描结果进行对比分析.结果 CT扫描25层,采集PDSI 167幅,对应的PDSI层面与CT图像基本吻合.PDSI上出血呈褐色改变.CT第14～18层提示肺中叶局限性挫伤出血,大小约为2.5cm×1.8cm×2.0cm,PDSI上相应部位出血区大小约为2.0cm×0.7cm×1.9cm.CT提示右肺中叶及下叶后外侧基底段为可疑的损伤区域,而在PDSI上,该区域呈形状不规则的大片深褐色出血改变,范围从第52层至114层.结论首次获得猪肺挫伤的数码断层图像集,CT表现与实际肺损伤之间存在差异,实际伤情较CT提示的重.PDSI的采集和研究对促进CT诊断水平有意义.
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汽车侧面碰撞交通伤的伤情特点实验研究
目的探讨猪轿车实车侧面90°碰撞交通伤的发生情况和伤情特点.方法分别以坐姿将大白猪固定于轿车驾驶员及前排乘员座椅上,在计算机控制下,牵引系统以50km/h的速度驱动台车碰撞正前方横停的轿车,以90°角撞击轿车左侧车体.观察现场至伤后24小时动物存活情况,采用解剖学、病理学方法观察形态改变,评判撞击伤发生和伤情特点.结果汽车侧撞致伤后,驾驶员座位猪的伤情重于前排乘员座位猪,24小时内死亡率75%.前排乘员座位猪伤后全部存活24小时以上.主要死亡原因为呼吸衰竭、失血性休克及多脏器损伤.结论车辆侧面90°高速碰撞,车内驾驶员位置乘员更易致伤,而且伤情较前排乘员严重且死亡率高.
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反义猪α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低
研究体内α(1，3)半乳糖转移酶α(1，3)GT反义抑制降低Galα(1，3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法：原核显微注射法产生转基因小鼠，PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合，RT-PCR检测小鼠α(1，3)GT的表达，组织学染色检查脾脏形态，免疫荧光检测Gal表位，流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果：猪反义α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常，但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比，转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％，对补体的结合降低40％-50％。结论：通过反义基因抑制α(1，3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。
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QD-piggy-1猪肝脏血管实体与数字模型建立及意义
目的 利用海信双子3D医学影像与计算机手术辅助系统建立猪肝脏血管数字模型,应用管道铸型技术建立猪肝脏血管与胆管系统塑化实体模型,对比分析两者的影像符合度,为研发小儿肝脏计算机手术辅助系统奠定基础.方法 采集猪的CT检查原始数据,应用计算机辅助系统建立猪肝脏血管数字模型,应用管道铸型技术建立猪肝脏血管与胆管系统塑化实体模型.结果 制作的猪肝脏血管实体模型及数字图像均可清楚地显示肝动脉、门静脉和肝静脉位置、管径及主要分支、次要分支和细小血管的分布以及胆管系统.结论 研发的计算机手术辅助系统软件的准确性及可行性较高,可以为临床小儿肝脏疾病的个体化评估及治疗提供精准的信息及指导.
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rHu-EPO联合自体外周血干细胞移植对猪急性心肌梗死后病理变化及细胞凋亡影响
目的 观察重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)联合自体外周血干细胞移植对猪急性心肌梗死(AMI)后心肌病理学和细胞凋亡的影响.方法 中华小型猪30只,均采用经皮穿刺球囊封堵冠状动脉左前降支制备猪AMI模型,造模过程中死亡2只,建模成功后随机分为3组.移植组(n=10)建模后1h给予粒细胞集落刺激因子(G-CSF),连用7d,建模第8天采用血细胞分离机单采外周血单个核细胞(PBMC)悬液,经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记,通过经皮经腔导管技术建立的梗死相关动脉通道回输PBMC.实验组(n=9)建模后1h给予G-CSF,连用7d,rHu-EPO连用5d,并于建模后第8天以相同方法采集、标记、回输PBMC.对照组(n=9)建模后仅给予等量生理盐水.移植3周后处死动物,制作心肌组织苏木精-伊红染色切片行病理学检查；原位末端标记法染色计算心肌细胞凋亡指数；Western blot法检测各组心肌组织中Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达.结果 苏木精-伊红染色显示,对照组梗死区心肌细胞坏死崩解、细胞核消失；移植组大量炎性细胞及成纤维细胞浸润,其间有部分存活心肌细胞；实验组可见大量存活心肌细胞.实验组心肌细胞凋亡指数显著低于移植组和对照组(F=6.491,P＜0.05).与对照组相比,实验组、移植组Bcl-2蛋白表达显著增高,Bax及Caspase-3蛋白表达显著降低；与移植组相比,实验组Bcl-2及Bax蛋白表达显著增高(F=6.513～8.267,P＜0.05).结论 rHu-EPO联合自体外周血干细胞移植治疗AMI可减轻心肌病理学改变,抑制心肌细胞凋亡,其作用可能是通过下调凋亡蛋白、上调抗凋亡蛋白的表达实现的.
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猪食管肌间神经节内PACAP免疫阳性神经末梢来源的初步探讨
目的 探讨猪食管肌间神经节内垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)免疫阳性神经末梢的来源.方法 采用荧光免疫组织化学技术及逆向神经元示踪技术.结果 猪食管肌间神经节内含有叶片状、PACAP免疫阳性的神经纤维网;经食管下括约肌腹侧壁行荧光素快蓝(FB)神经元逆向示踪研究显示,节神经节(NG)内含有许多FB示踪神经元,其中约有48%呈PACAP免疫阳性.结论 猪食管肌间神经节内的PACAP免疫阳性神经末梢网很可能来源于迷走神经,为猪食管壁内的肌间神经节内板层样神经末梢.NG神经元顺向示踪研究结合免疫组织化学技术,将有助于确定此结构的形态特点并揭示其神经化学特征.
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自体心包作为主动脉瓣替代材料的可行性研究
目的 探讨自体心包组织作为主动脉瓣膜替代材料的可行性及可靠性,为临床实验提供基础.方法 静脉全麻、腹主动脉阻断下行心包瓣膜材料腹主动脉内移植.进行预试验,筛选实验动物.然后监测实验中动物基本生命、生理指标;采用血管超声和 CTA方法评价其血流动力学指标;通过观察动物存活情况,判断是否有栓塞事件等,以评价其生物相容性.结果 猪是理想的实验动物,手术死亡率6.25%.实验动物无栓塞事件发生,肉眼观察可见心包瓣内有血栓形成.结论 腹主动脉阻断下心包瓣膜移植,手术安全易行,心包瓣膜模型较为可靠.建议术后应常规抗凝.
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玻璃体腔内高氧含量对视网膜与脉络膜血流量的影响
①目的探讨玻璃体腔内高氧含量对视网膜、脉络膜血流量的影响.②方法以2月龄猪为实验对象,采用放射微球标记法分别测定玻璃体切割术中气液交换及氧液交换后10 min,视网膜及脉络膜血流量.③结果高氧组视网膜血流量急剧减少,由未注氧前(空白对照)的(1.885±0.476)mL/(min*g)降为(0.245±0.022)mL/(min*g),常规空气交换组降为(1.343±0.166)mL/(min*g),高氧组与空白对照组比较,差异有极显著性(t= 5.961,P<0.01),与常规空气交换组比较,差异有极显著性(t=11.257,P<0.001 );高氧组脉络膜血流量由未注氧前的(4.645±0.520)mL/(min*g),降为(2.617±0.269 )mL/(min*g),与空白对照组比较差异有显著性(t=5.999,P<0.01),与常规空气交换组的(3.899±0.288)mL/(min*g)比较,差异有显著性(t=5.275,P<0.01). ④结论玻璃体腔内提高氧含量,可以使视网膜、脉络膜血流量明显降低,视网膜血管收缩.
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简易静脉转流装置用于猪原位肝移植的效果
①目的观察自行设计的简易静脉转流装置对猪原位肝移植实验动物血流动力学及血生化指标的影响.②方法施行猪原位异体肝移植术3例,体外静脉转流均采用自行设计的双三通简易静脉转流装置.对移植前后的猪血流动力学及血生化部分指标进行了检测.③结果体外转流时间为(88±20)min,灌流量400～600 mL/min,门静脉转流前后平均动脉压、中心静脉压等血流动力学及生化指标均无明显改变.3例移植肝脏均成活.④结论在大动物实验中,双三通简易转流装置可代替体外转流泵行门静脉转流.
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湖北地区人源与猪源戊型肝炎病毒部分基因序列的分析
目的 调查湖北地区戊型肝炎病毒(HEV)人源与猪源基因型的流行情况.方法 用套式RT-PCR方法对湖北地区25例急性戊型肝炎患者血清和33份用实时荧光RT-PCR检测为HEV核酸阳性的猪血清进行HEV RNA检测.HEV核酸使用QIAamp Viral RNA Mini Kit (QIAGEN)提取,用AMV Reverse Transcriptase (Promega)进行逆转录合成cDNA,所用扩增引物为基于HEV ORF2区域的简并引物,并对阳性产物进行克隆测序,对所得序列进行同源性比较和进化树分析.结果 用RT PCR从25份急性戊型肝炎患者血清和33份猪血清中分别检出HEV RNA阳性者9份和8份.序列分析显示17株戊型肝炎病毒株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为82％～100％,氨基酸同源性为87％～100％.该17株戊型肝炎病毒序列与HEV 4型代表株的核苷酸序列的同源性为82％～94％,均为HEV 4型,而且人源和猪源HEV均分为相同的4个亚型.进化树分析显示该17株戊型肝炎病毒株分属于4个不同的亚型分支.结论 湖北地区人与猪群中流行的HEV基因型以及亚型相同.
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临时血液导流管在离断肢体损伤中的实验研究和临床应用
目的 探讨血液导流管在离断肢体损伤中快速救治的应用,研究血液导流管制备材料以及短时间内血液导流管维持通血效果的评价.方法 40只实验幼猪随机分为A,B两组,制成后肢完全离断模型.采用内径为2.0 mm、外径2.5 mm、长度18.0 cm,A组肝素化聚乙烯管和B组医用硅胶管桥接于血管断端.术后定期观察血液导流管通畅性,观察终点为血液导流管完全堵塞,血管超声探测仪无血流信号,远端血管搏动消失,离断肢体以远皮下毛细血管网无渗血.比较两组到达观察终点的时间有无差异.临床应用:用肝素化聚乙烯为材料的临时血液导流管(规格2.0 mm×2.5 mm)为2例前臂完全离断的患者桥接离断的桡动脉及头静脉断端,形成临时血管通路,观察血液导流管的临床使用效果.结果 实验用猪肢体离断模型,建立临时血管通路后,离断肢体远端股动脉的远端有搏动,血管超声探测仪可检测到血液导流管内有血流信号,随着时间的延长,血液导流管动脉段逐渐由鲜红色变为暗红色,导流管段逐渐形成附壁血栓,远端血管搏动及皮下毛细管网渗血逐渐减弱直至消失,血流信号消失,AB两组到达观测终点的时间分别为(370.0±52.5)min和(192.0±54.0)min,两者比较其差异有统计学意义(P<0.05),说明用肝素化聚乙烯管作为临时血液导流管优于医用硅胶管.临床行桡动静脉临时血管桥接2例,术前准备阶段先进行血液导流管的临时桥接,从通血到开始显微技术吻合血管的总计通血时间平均为3.5 h.建立血管临时桥接通血后,肢端血供恢复,取出血液导流管时,血液导流管仍保持通畅,术后远端肢体成活.结论 临时血液导流管能够用于离断肢体损伤血管的临时桥接,维持通血时间可达(370.0±52.5)min,有效通血时间长,实验数据说明其血液相容性、物理特性及抗凝性均适合于离断肢体损伤中的紧急救治.离断损伤中采用血液导流管能够紧急重建远端血供,缩短肢体缺血时间,大程度减少缺血再灌注损伤,为后期保肢手术的成功提供先决条件,特别是在战场环境下尤为重要.
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猪与人去细胞神经结构与成分的对比研究
目的 研究猪与人的周围神经脱细胞处理后其结构与成分的差别,为以猪去细胞神经替代人去细胞神经用于修复神经缺损作前期探索.方法 取健康成年猪和下肢截肢患者的胫神经,用化学去垢剂按一定程序进行脱细胞处理.通过大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色和透射电镜检查,比较猪与人的周围神经去细胞处理前后其结构、许旺细胞与轴突标志蛋白以及细胞外基质的变化.结果 经脱细胞处理后,猪与人的神经结构均略变疏松,仍保留较好的弹性和伸展性.显微镜下观察,两者均未见细胞或其碎屑残留,髓鞘消失,纤维性支架结构保持良好,S-100蛋白和神经丝蛋白(neurofilament,NF)的表达较处理前显著减弱,而层粘蛋白(laminin,LN)的表达无显著变化,神经基底膜管和神经组织的支持结构保留完好.与人去细胞神经比较,猪去细胞神经结构更疏松,神经束间细胞间质更丰富,但成分差异无显著性.结论 猪去细胞神经与人去细胞神经的结构和成分相近,可能取代人去细胞神经用于修复神经缺损.
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原代猪肝细胞及主动脉内皮细胞的提取和培养
目的 建立有效高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞提取和培养的方法.为异种移植排斥反应的靶细胞——血管内皮细胞和肝细胞的研究提供基础.方法 从野生巴马猪分离肝脏和主动脉血管,通过蠕动泵灌注Ⅱ型胶原酶消化的方法提取猪肝细胞,低速离心和差速贴壁法纯化肝细胞,过碘酸雪夫(PAS)染色、白蛋白与肝细胞核因子4α免疫荧光染色对原代肝细胞进行鉴定;利用Ⅰ型胶原酶血管管腔灌注消化法提取猪主动脉内皮细胞,并通过检测因子Ⅷ相关抗原vWF及内皮细胞吞噬乙酰化低密度脂蛋白的方法进行鉴定.结果 通过本文方法提取到了大量高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞,猪肝细胞可以连续培养一周,内皮细胞可进行传代培养和冻存.两种细胞分别表达肝细胞和内皮细胞标志性蛋白.结论 本研究提供的原代猪内皮细胞和肝细胞提取方法是制备大量高活力的原代内皮细胞及肝细胞的可靠方案.
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新型常温机械灌注装置保存猪DCD供肾的实验研究
目的 构建新型常温机械灌注(normothermic machine perfusion,NMP)系统,利用猪自体肾移植模型,探讨NMP改善猪心脏死亡器官捐献(donation after cardiac death,DCD)供肾保存质量及相关机制.方法 选用健康巴马小型猪10只,随机分为两组,在原位夹闭右肾动脉30分钟后,UW液低温灌注,A组(n=5)以NMP保存8小时,B组(n=5)以UW液4℃低温保存8小时,然后两组均行自体肾移植术,比较术后血清生化指标、肾组织病理变化、细胞因子的表达情况等指标.结果 两组均成功在经过30分钟热缺血和8小时保存后,进行自体肾移植.血流开放1小时后,A组肾组织免疫组化肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、内毒素(endotoxin-1,ET-1)水平明显低于B组,TUNEL法测定凋亡细胞比例也明显低于B组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);血流开放6小时后,A组血清肌酐(serum creatinine,SCr)、TNF-α、Caspase-3水平明显低于B组,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);开放后肾脏活检常规病理检查提示,A组肾脏损伤程度明显减轻.结论 NMP保存可明显减轻猪DCD供肾的缺血/再灌注损伤;其保护机制与NMP可模拟器官的生理环境,维持充足能量与氧气供应,减少保存期间和再灌注后炎性细胞因子释放等有关.
