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深圳市SEN病毒D和H亚型感染的检测与分析
目的了解深圳市一种新的单链DNA病毒(SENV)的感染流行状况.方法以SENV读码框架1区(ORF1)核苷酸序列设计引物建立巢式聚合酶链反应(nPCR)方法.采用多重nPCR对601份来自不同人群血标本进行SENV-DNA(D和H亚型)检测,并对所分离的病毒部分基因进行克隆后测序分析.结果在乙型肝炎患者、丙型肝炎患者、血液透析患者和吸毒人群SENV DNA阳性率分别为27.8%、22.2%、26.9%和39.3%;在献血人群中,体检不合格献血者和丙氨酸转氨酶(ALT)异常升高献血者SENV阳性率分别为28.1%和31.3%,均明显高于体检合格的献血者人群(15.1%)的感染率(χ2=8.29,P＜0.01和χ2=6.03,P＜0.01).6例来自不同人群的SENV-D亚型分离株部分核苷酸序列与标准株变异＜6.8%;4例来自不同人群SENV-H亚型分离株部分核苷酸序列与标准株核苷酸大变异为13.5%.结论在深圳市高危人群(献血和吸毒人群及肝炎患者等)中SENV感染均广泛存在.
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中国北方5城市慢性乙型肝炎患者中SEN病毒检测
目的了解SEN病毒D和H(SENV-D/H)在中国慢性乙型肝炎患者(CHB)中的感染情况.方法应用巢式聚合酶链反应法(nPCR),对中国北方5城市595例CHB患者和北京市96名正常人血清检测SENV-D/H DNA,并用PCR产物直接测序法对7株SENV进行了序列分析.结果CHB患者SENV感染率为61.3%,正常人为62.5%,两者差异无显著性(χ2=0.047,P=0.829).但不同城市CHB患者中SENV感染率存在一定差异.从不同城市分离的SENV 的核苷酸序列同源性较高,4株SENV-D同源性为91%～98%,3株SENV-H同源性为95%～98%.结论在5城市CHB患者中存在SENV-D/H感染,其感染率与正常人群相似,提示SENV- D/H可能没有直接致病性.
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SEN病毒中国株流行病学研究及克隆和序列分析
为了解SEN病毒中国株的流行病学及基因序列,采集肝炎患者(甲～戊型)、非甲～非戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿、尿毒症患者、静脉毒瘾者和健康体检人群的血清标本,用巢式PCR检测SEN病毒,结果他们的检出率依次为13.3%、20.5%、4.8%、5.8%、5.7%和0.PCR获得了两种不同长度阳性片段.选取5份阳性PCR产物进行纯化、连接及转化,获取重组克隆,命名为pGCEM-SENVL(1、2、3)、pGEM-SENVS(1、2),进行DNA序列分析.结果与SEN病毒(AX025667)序列同源性分别为87.7%、76.1%、88.2%、72.7%和78.8%.首次发现我国存在SEN病毒散发感染,并存在不同于SEN病毒(AX025667)的中国变异株,而且有同一患者存在两种变异株的复合感染.
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SEN病毒D亚型中国分离株基因克隆及序列分析
SEN病毒是新近发现的一种单链环状DNA病毒,无包膜[1].对SEN病毒进行系统发生分析显示有8个型(A～H).初步研究发现其中SENV-D型和SENV-H型可能与输血相关的非A～E肝炎的发生有某些关联[2].我们实验室首次证实在我国也存在SEN病毒感染[3],并对SENV-D型和SENV-H型部分序列进行了测定.在前期工作的基础上,从1例非A～E肝炎患者血清中克隆得到了1株SENV-D型病毒基因,并进行了序列测定.对SENV-D型中国株基因组的克隆分析有助于其检测方法及致病性的研究,并为研究SEN病毒的进化地位提供方便.
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SEN病毒D亚型中国株流行病学及序列变异
目的了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位. 方法分析已知的基因序列设计引物,建立半套式PCR检测方法,对58份献血者血清样本和25份non-A～E肝炎患者血清样本进行了SENV-D亚型的检测,并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序. 结果无偿献血者中SENV-D亚型感染率为45%,在non-A～E肝炎患者中SENV-D亚型感染率为48%,两者间差异无显著性;但在无偿献血者中SENV-D亚型的阳性检出率大大高于国外报道.测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明,各测序株均与已知的SENV-D株序列有很高的同源性,并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析. 结论建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测;SENV-D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-D株序列之间有变异.与无偿献血者相比,non-A～E肝炎患者血清SENV-D株无进化上的显著倾向性.在测序的部分ORF1序列中存在一个核苷酸高变区.
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检测病毒性肝炎患者血清中SEN病毒及其临床意义
目的检测病毒性肝炎患者血清中SEN病毒D和H(SENV-D、SENV-H),并探讨其临床意义. 方法采用巢式聚合酶链反应法(nPCR)检测甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲～戊型肝炎患者血清中SENV-D和 SENV-H DNA. 结果在180例病毒性肝炎患者血清中,SENV-D和SENV-H 检出率分别为17.2%(31/180)和5.6%(10/180),总检出率为18.3%(33/180).甲、乙、丙、戊型肝炎患者的SENV-D/H检出率高于非甲～戊型肝炎患者.从甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲～戊型肝炎患者中分离的SENV-D/H核苷酸序列,与SENV-D/H原型株比较,其同源性在94%以上.甲、乙、丙和戊型肝炎患者有无SENV-D/H合并感染,其血清生化学指标无明显差异. 结论 SENV-D/H可能不是非甲～戊型肝炎的病原,甲、乙、丙和戊型肝炎患者合并感染SENV-D/H并不加重病情.
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聚合酶链反应检测SEN病毒D亚型方法的建立
目的研究建立SEN病毒D亚型(SENV-D) 聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法选择SENV-D亚型开放读码框1 (ORF1)高度保守序列设计合成2对特异性引物,建立检测SENV-D感染的套式聚合酶链反应(nPCR)方法,在进行特异性和灵敏度试验条件下,对327份无偿献血和职业献血人群进行SENV感染的检测和部分PCR阳性产物进行克隆测序.结果该方法特异性和灵敏度均较高;对献血人群检测显示无偿献血人群SENV-D感染率为5.5%,职业献血人群为6.7%,两者无统计学差异.结论我国广东部分地区无偿献血和职业献血人群中存在SENV-D亚型感染;我们建立的PCR方法适用于对SENV感染的检测.
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武汉地区SEN病毒感染的血清流行病学调查
目的研究武汉地区SEN病毒(SENV)感染状况. 方法采用套式聚合酶链反应(n-PCR) 对191例、6种不同人群血清中SENV-DNA 进行D亚型和H亚型分析. 结果 SENV的感染率为14.7%,6种人群中SENV感染率的高低依次为血浆置换患者(36.7%)、静脉吸毒者(33.3%)、慢性乙型肝炎患者(11.1%)、非甲～非戊型肝炎患者(9.4%)、重症肝炎患者(8.3%)、正常人群(5.6%). 结论输血和静脉吸毒是SENV感染的重要途径,慢性病毒性肝炎合并SENV感染不是病情加重的原因.
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慢性乙型肝炎与肝硬化患者 SEN 病毒感染危险因素分析
目的：分析和探讨慢性乙型肝炎与肝硬化患者感染SEN病毒的危险因素及采取的护理措施。方法选取医院2011年3月-2013年6月收治的慢性乙型肝炎与肝硬化患者为研究对象，使用SEN-V PCR引物探讨SEN病毒和慢性肝炎的关系，比较在病毒感染因素的作用下患者感染SEN病毒的概率；采用SPSS12．0软件进行统计分析。结果 SEN病毒主要有输血传播、静脉吸毒、母婴垂直传播以及性传播等传播途径，临床上常表现为SEN病毒单独感染和HBV等病毒合并感染；接受输血、有吸毒史、经母婴传播和性病慢性乙型肝炎与肝硬化患者的感染率分别为31．58％、36．84％、40．00％、34．38％，而未接受输血、无吸毒史、未经母婴传播和非性病患者的感染率为3．53％、3．73％、4．24％、5．41％，各组间比较差异均有统计学意义（ P＜0．01）。结论输血治疗和接触血制品、静脉吸毒、母婴以及性交等途径是慢性乙型肝炎与肝硬化患者感染SEN病毒的主要危险因素，患者应加强预防和防范，采取必要的安全护理措施，降低感染SEN病毒的概率。
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SEN病毒H亚型中国株流行病学及进化研究
目的:了解SEN病毒H亚型中国株的流行病学特点及其进化地位.方法:结合已知的基因序列设计引物,建立了半套式PCR检测方法,对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-H亚型的检测,并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序.结果:检测结果显示无偿献血者中SENV-H亚型感染率为34%,在non-A-E肝炎患者中SENV-H亚型感染率为24%,两者间无显著差异;但在无偿献血者中的阳性检出率大大高于国外报道.测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明,各测序株均与已知的SENV-H株序列有较高的同源性,并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析.结论:建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒H亚型检测;SENV-H亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-H株序列之间都有较大的变异.与无偿献血者相比,non-A-E肝炎患者血清SENV-H株无进化上的显著倾向性.
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SEN病毒中国分离株基因克隆及序列分析
目的:测定SENV-D亚型中国分离株的基因组序列,并对其进行初步分析.方法:根据国外已发表的SEN病毒基因序列设计特异性引物,应用套式PCR方法从一份非甲-非戊型(non-A-E)肝炎患者血清中,分段扩增了包括SENV-D型所有编码区(ORFs)长3175bp的DNA片段,将其克隆到T载体后测序.结果:测序结果经BLAST软件分析,与国外发表的3株D型SEN病毒SENV-D(AX025730),SENV-D(AB059352),TTV(AB028668)的核苷酸序列同源性分别为90%,88%和91%;与2株D型SEN病毒SENV-D(AX025730),TTV(AB028668)ORF1所编码蛋白的氨基酸同源性分别为93%和92%.ORF1蛋白中含有Rep蛋白(在病毒复制中起作用的一种蛋白)的两个保守基序,此外还有一个保守的ATP/GTP结合基序(P-loop)以及若干个高度保守的蛋白激酶磷酸化位点.结论:测定得到了SENV-D亚型中国分离株的基因组序列,有助于其检测方法及致病性的研究,并为研究SEN病毒的进化地位提供方便.
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SEN病毒研究
SEN病毒是从1例人类免疫缺陷病毒患者血清中分离出的一种无包膜、单链、环状DNA病毒,属圆环病毒科,基因组全长约为3900个核苷酸,共有SENV A～H 8种亚型,至少有3个开放读码框架.研究显示该病毒与输血相关性非甲～非戊型肝炎有强相关性,该病毒可单独感染,也可与乙型肝炎、丙型肝炎、肝细胞癌等混合感染.目前,SEN病毒作为不明原因肝炎的致病因子尚缺乏有力的证据.
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SEN病毒的研究进展
在美国,约有10%的输血相关肝炎和20%的社区获得性肝炎没有明确的病因,还有接近30%的慢性肝炎和肝硬化,以及大部分暴发性肝衰竭找不到病原体,提示存在着不明致病微生物[1].
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急性病毒性肝炎的合理用药
目前已证实甲、乙、丙、丁、戊五型肝炎病毒是病毒性肝炎的致病因子.庚型肝炎病毒(HGV)、输血传播病毒(TTV)、Sen病毒等是否引起病毒性肝炎尚无定论.
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河北省辖区SEN病毒D和H亚型感染的分子流行病学调查
目的了解河北省辖区健康人群中SEN病毒(SENV)感染状况与急、慢性肝病之间的关系.方法以SENV读码框架1区(ORFI)核苷酸序列设计引物,建立巢式聚合酶链反应(nPCR)方法.对348例9种不同人群血清中进行SENVD和H亚个检测.结果SENV-DNA总感染率为27.0%(94/348),D和N型混合感染占总感染病例的30.8%(29/94).9种人群中SENV DNA感染率的高低依次为丙型肝炎(47.6%)、非甲-非戊型肝炎(40.0%)、慢性乙地肝炎(31.5%)、单纯乙肝抗体阳性者(28.6%)、急性甲型肝炎(25.8%)、健康人群(22.9%)、急性乙型肝炎(21.2%)、乙肝病毒健康携带者(20.0%)和肝硬化患者(1.7%).丙型肝炎组和正常人群之间存在显著差异(P＜0.01),与急性乙型肝炎、乙肝病毒健康携带者和肝硬化患者也有差异(P＜0.05).非甲-非戊型肝炎与正常人群及各组之间均无统计学差异.结论在河北省辖区SENV感染广泛存在,而且同一患者存在两种亚型的复合感染.丙型肝炎感染率较高,SENV和HCV可能有相似的传播途径.
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同时检测SEN病毒D和H聚合酶链反应法的建立
目的建立同时检测SEN病毒D和H(SENV-D和H)巢式聚合酶链反应法(nPCR).方法第一轮PCR外引物为SENV-D和H开放读码框架(ORF)1区的共同序列,第二轮PCR内引物分别为SENV-D和H ORF1区型特异性引物.应用双脱氧链末端终止法对SENV-D和H的PCR产物进行克隆测序.结果应用同时检测SENV-D和H的nPCR法终检出SENV-D和H的血清稀释度为10\+3.序列分析表明,用本法检出的SENV-D(DTd株)和SENV-H(DTh株)与GenBank收录的SENV-D和H株核苷酸序列同源性均为92%.检测173例慢性乙型肝炎(轻、中度)患者,SENV-D和H的总感染率为58.4%.结论本法可用于SENV-D和H感染的临床诊断和流行病学调查.
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山东地区不同人群中SEN病毒感染状况
目的了解山东地区不同人群中 SEN病毒(SENV)感染的状况与其致病性.方法应用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测了254份不同人群和肝病患者血清中SENVDNA,并对17例不明原因 ALT增高,单独SENVDNA阳性的非甲-戊型肝炎患者行肝活检.结果SENVDNA总阳性检出率为20.9%(53/254),其中非甲-戊型肝炎血清检出率高为59.6%(28/47),明显高于健康献血员3.2%(1/31)、非肝病患者5.5%(3/55)、输血后丙型肝炎42.9%(12/28)、血液透析患者15.8%(2/13)和慢性乙肝患者检出率8.8%(7/80),SENV在各种人群中存在着显著性差异(P＜0.01).SENV感染其主要病理学改变为汇管区炎症,淋巴细胞集聚,碎小坏死,小叶内病变较轻,呈散在和点状坏死,而桥样坏死,脂肪性变较少.结论本研究表明山东地区不同人群及肝病患者中存在着较高SENV感染率;SENV感染可能具有嗜肝性;而且可能与肝功损害有关,是引起非甲-戊型肝炎重要病原,输血后丙肝和有血液透析史患者SENV感染率较高,提示对献血员还应严格筛选.
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SEN病毒D亚型部分基因的克隆、表达和鉴定
目的获得序列正确的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因,并进行表达.方法用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-D ORF1 C-端基因,测序验证后,构建pQE30-SD重组表达质粒,并转化E.coli M15,进行IPTG诱导表达及Western blot分析.结果获得的SENV-D亚型ORF1 C-端蛋白基因序列正确,表达蛋白相对分子质量约为38000.经Western blot证实能与阳性血清发生抗原抗体反应.结论已成功获得了SENV-D ORF1 C-端蛋白,为今后进一步研究奠定了基础.
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重型肝炎患者血浆置换后SEN病毒感染及临床意义
目的 了解重型肝炎患者血浆置换前、后SEN病毒(SENV)感染情况及对肝功能的影响.方法 采用套式PCR对40例重型肝炎患者血浆置换前、后血清中SENVD亚型和H亚型进行检测,并检测血浆置换前、后血液生化改变,数据行t检验和配对X2检验.结果 40例重型肝炎患者血浆置换前、后SENV D亚型的检出率分别为27.5%(11/40)和42.5%(17/40),SENVH亚型为27.5%(11/40)和50.0%(20/40),差异均有统计学意义(X24.17,X27.11;均P<0.05).血浆置换后,SENV阳性患者的ALT为(164±75)U/L,明显高于阴性患者的(48±12)U/L,差异有统计学意义(t=3.13,P<0.05);但肝功能其他各项指标比较,差异无统计学意义.结论 SENV可经血浆置换方式传播,且重叠SENV感染可能会影响重型肝炎患者血浆置换后肝功能的恢复.
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SEN病毒的研究进展
发现和鉴定新型肝炎病毒一直是肝炎研究的热点之一.在2000年发现的SEN病毒被认为是一种新的肝炎病毒,初的文献推测其可能与输血后非甲非戊型肝炎密切相关;但通过近两年的研究表明,其作为肝炎致病因子的地位有待进一步证实.本文从SEN病毒的基因组结构、检测方法、与肝炎的相关性和流行病学等方面重点介绍了其研究现状和所面临的问题.
