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HBsAg阳性孕妇新生儿外周血单个核细胞乙型肝炎病毒感染状况及意义的研究
目的了解乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性孕妇新生儿外周血单个核细胞(PBMC)乙型肝炎病毒(HBV)感染状况及其在HBV宫内感染中的意义.方法用原位杂交(ISH)和原位PCR(IS PCR)法对HBsAg阳性孕妇新生儿PBMC进行HBV DNA检测.用随机引物法进行地高辛-HBVDNA探针的标记和定量.结果ISH及IS PCR检测PBMC HBV DNA,探针浓度以0.6μg/ml、蛋白酶K浓度以10μg/ml、IS PCR以20个循环数为佳.HBsAg阳性孕妇新生儿中,血清HBsAg、HBVDNA均阳性者有72.73%PBMC HBV DNA阳性;HBsAg阴性、HBV DNA阳性者中,有65.91%PBMC HBV DNA阳性;血清HBsAg、HBV DNA均阴性者中,仍有15.79%PBMC中HBV DNA阳性.结论IS PCR检测对低丰度PBMC HBV DNA具有细胞内定性和定位的特点.血清HBV DNA阳性新生儿多数可检出PBMC HBV DNA,而血清HBV DNA阴性新生儿也可呈PBMC HBV DNA阳性.提示PBMC HBV感染应作为HBV宫内感染的诊断指标之一.
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介绍一种半套式原位PCR技术
原位聚合酶链反应(原位PCR)是具有聚合酶链反应(PCR)技术的高敏感性和原位杂交(ISH)的原位检测能力的新方法.但目前常见的间接式原位PCR技术常因PCR反应过程的非特异扩增而伴有假阳性结果出现,对此我们建立了一种高度特异性的半套式原位PCR法,并与ISH方法进行了比较.
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合理运用新技术减少病理诊断误诊率
近年来新技术的发展和应用,使整个医学界产生了革命性的进展.就病理技术来讲已从单纯的组织学、组织化学发展到免疫组织化学、原位杂交、荧光原位杂交、聚合酶链反应、原位聚合酶链反应.现时的光学显微镜、HE染色对诊断具有一定的局限性,而新技术的问世对病理诊断的正确性提供了很大的帮助,为认识疾病提供了大量有用的信息.随着公费医疗制度的改革、医疗费用急剧上涨,患者经济负担渐加重.如何依据社会客观情况,合理应用新技术造福人类是一个需要探讨的问题.
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胃癌组织环氧合酶-2表达与幽门螺杆菌cagA+菌株感染
目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylon)cagA菌株感染及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX2)表达在胃癌发生中的作用及两者的关系.方法:采用原位聚合酶链反应(PCR)技术及免疫组织化学技术检测56例胃癌手术标本cagA基因及COX2蛋白表达情况.结果:胃癌组织H pylori.cagA菌株感染率为55.4%,COX2在胃癌组织中表达率为71.4%.COX2表达水平在Ⅲ-Ⅳ期胃癌组显著高于Ⅰ-Ⅱ期胃癌组(14/30vs5/26,P＜0.05);有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移纽(4/19vs15/37,P＜0.01);H pylori cagA菌株感染与TNM分期及淋巴结转移无关(P＞0.05).COX2表达水平在H pylori cagA阳性组显著高于H pylori cagA阴性组(15/31vs4/25,P＜0.05).结论:H pylori cagA菌株感染与胃癌的恶性进展无关;COX2的表达参与胃癌的发生及恶性进展.H pylori cagA菌株感染能上调胃癌组织COX2的表达.
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HBV感染者胎盘组织HBV ccc DNA检测
目的 建立HBV ccc DNA在胎盘组织中定性及定位检测方法,了解慢性HBV 感染者胎盘组织中HBV ccc DNA的存在状况,进一步探讨其意义及乙型肝炎病毒母婴传播机制.方法 选取首都医科大学北京地坛医院慢性乙型肝炎病毒感染者孕晚期胎盘组织40 例,阳性对照肝组织标本3 例,阴性对照为健康足月妊娠产妇胎盘标本,共5例.所有胎盘标本均分两份,分别于-80 ℃冷冻和福尔马林室温浸泡保存.冷冻标本采用质粒抽提法提取胎盘组织中HBV ccc DNA ,液相PCR 定性检测;福尔马林处理标本作石蜡切片,用于原位PCR 定位检测.结果 40例标本中,液相PCR 检测出HBV ccc DNA 阳性者8例,其相应的血清HBV DNA 均 >105 拷贝/ml .取该8例及另2例乙型肝炎患者孕晚期胎盘石蜡切片经HBV ccc DNA 原位扩增,7 例检测出HBV ccc DNA 阳性,胎盘绒毛毛细血管内皮细胞、绒毛合体滋养层细胞、PBMC 等多种细胞均存在HBV ccc DNA 阳性信号.结论 研究表明,胎盘组织HBV 感染与孕妇血液中HBV DNA 含量显著相关.胎盘组织的HBV ccc DNA 原位PCR 检测显示,HBV 可感染胎盘各层细胞.羊膜上皮细胞中也发现HBV ccc DNA 阳性信号.胎盘组织感染的HBV 及其在这些细胞中的复制是否直接与HBV宫内感染相关尚需进一步研究.
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轮状病毒多系统感染二例分析
目的研究轮状病毒(RV)感染肠道外脏器的情况,为临床工作中RV肠道外感染的预防和诊断提供科学基础.方法以间接原位RT-PCR方法检测2例RV感染的婴儿尸解存档石蜡标本,包括脑、心脏、肺、肝脏、脾脏、胰腺、小肠、阑尾、淋巴结、肾脏.标本先经RT-PCR 反应,引物为:PI 5′-GTATGGTATTGAATATACCAC-3′, PII 5′-GATCCTGTTGGCCATCC-3′,循环参数如下: 42℃逆转录1 h,95℃解链5 min,后按94℃1 min,55℃1.5 min,72℃2 min进行PCR循环,共35圈,后72℃10 min结束反应.再与地高辛标记的引物PI作为的探针杂交, 42℃18 h,后DAB显色.结果小肠、肾脏、肝脏、肺呈阳性显色.小肠绒毛、部分肠腺细胞和腺体旁数个淋巴细胞阳性;粘膜下层阴性.肾皮质近曲小管上皮细胞阳性;肾小球、间质及远曲小管、集合管阴性.肺组织内终末细支气管上皮细胞胞浆和部分肺泡上皮细胞阳性,间质细胞阴性.肝脏内部分肝细胞和部分枯否细胞阳性.结论本组2例存在RV多系统感染.RV可侵犯肺、肝脏和肾脏组织,病毒血症是RV的多系统播散的途径.
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原位PCR方法检测国人艾滋病肾组织HIV DNA
目的:探讨HIV与艾滋病肾脏的关系.方法:应用原位PCR方法检测9例国人艾滋病尸体解剖肾组织标本.结果:9例标本HIV均阳性,棕黄色阳性物位于肾小管上皮细胞胞核和胞浆.结论:肾脏可被HIV直接感染.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 HIV 肾/病理学 原位聚合酶链反应 -
原位聚合酶链反应检测肝细胞内乙型肝炎病毒共价闭合环状的DNA表达
目的 探讨乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV-cccDNA)在慢性乙肝患者肝细胞中的表达及意义.方法选取活动性乙型肝炎及乙型肝炎后肝硬化患者肝穿或重症乙肝患者尸检肝组织标本50例,经10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,用0.05%多聚赖氨酸处理后使用.分别设立无引物、无地高辛标记引物、无TaqDNA聚合酶PCR反应体系及非乙肝患者肝组织共10例作为阴性对照.采用原位PCR技术进行HBV-cccDNA检测.结果HBV-cccDNA在乙肝患者肝细胞中阳性表达以核型为主,呈蓝紫色,在肝细胞中总阳性表达率为60%～85%;偶见于细胞浆中,对照组均为阴性.结论原位PCR可以在肝细胞原位检测出HBV-cccDNA,阳性信号以核型为主.提示HBV-cccDNA主要存在于细胞核中,为乙肝病毒持续感染及复制的根源.
关键词： 乙型肝炎 肝硬化 原位聚合酶链反应 乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA -
恶性淋巴瘤病人外周血细胞原位PCR方法
目的探讨、建立外周血间期细胞原位PCR方法.方法用Dig-dUTP标记引物,用外周血淋巴细胞进行直接法原位PCR方法检测15例恶性淋巴瘤患者.结果阳性12例,阴性3例,正常对照无一例阳性.结论细胞悬液直接法原位PCR操作简单、结果可靠、敏感性高.
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地戈辛和生物素标记进行原位PCR方法的比较
由于不同的B细胞克隆可发生不同类型的重链基因重排,因此,通过检测免疫球蛋白重链基因重排可鉴别细胞的来源,也可诊断B系淋巴细胞性肿瘤.本文介绍应用免疫球蛋白重链第三互补决定区引物,分别用生物素和地戈辛标记进行原位PCR,检测了15例恶性淋巴瘤患者的外周血淋巴细胞,结果如下.
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原位PCR检测幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(Helicobacter pylori cytotoxin associated geneA,Hp-cagA)与胃部疾病关系的研究已成为当前热点.
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乙型肝炎病毒胎盘垂直传播的机制
目的 研究胎盘组织中HBV感染与胎儿宫内感染的关系.方法 携带HBshg的孕妇,血清HBV DNA阴性12例:血清HBV DNA阳性19例;血清HBV DNA阳性,孕晚期拉米夫定治疗16例;血清HBV DNA阳性,孕晚期免疫球蛋白(HBIG)治疗19例.使用免疫组化与原位聚合酶链反应(In situ polvmerase chain reaction,IS PCR),检测胎盘组织中的HBcAg与乙型肝炎共价环状DNA(HBV covalently closed circular DNA,HBV cccDNA).结果 胎盘绒毛炎发生率与婴儿发生宫内感染率具有明显相关性(P＞0.05);胎盘HBcAg的感染率与婴儿发生宫内感染率之间具有明显的相关性(P＞0.05);治疗后,胎盘HBVccc DNA感染与婴儿发生宫内感染没有显著差异性(P＞0.05).结论 胎盘组织发生炎症,使部分绒毛发生纤维素样坏死,胎盘屏障受损,通透性增加,HBV易通过胎盘屏障感染胎儿;HBcAg在胎盘中的表达,表明HBV感染与复制,是导致宫内感染的危险因素;阻断治疗可能抑制了感染胎盘组织cccDNA复制,使宫内感染的危险性降低.
关键词： 乙型肝炎共价环状DNA 原位聚合酶链反应 垂直传播 免疫组织化学 -
原位聚合酶链反应检测在B细胞系非霍奇金病中的作用
目的探讨用原位聚合酶链反应(PCR)检测 B细胞系非霍奇金病的意义.方法用免疫球蛋白重链(IgH)第三互补决定区引物,生物素标记扩增产物直接原位 PCR扩增 15例非霍奇金病患儿外周血淋巴细胞.结果 15例非霍奇金病中,12例检测到特异性基因重排, 4例呈现淋巴瘤性白血病,治疗后骨髓完全缓解, 2例间期细胞原位 PCR仍显示有IgH基因重排, 分别于3个月及6个月复发.结论原位聚合酶链反应检测非霍奇金病不失为一种简单、快速、灵敏的方法,并能帮助预测复发.
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正常角膜上皮细胞单纯疱疹I型病毒潜伏的研究
目的检测近视眼患者角膜上皮细胞单纯疱疹I型病毒(HSV-I),探讨其在正常角膜潜伏的可能性.方法取行准分子激光屈光性角膜切削术(PRK)的近视眼角膜上皮细胞138份(138眼),每份均匀分为三部分,两份分别行HSV-I的原位聚合酶链反应(ISPCR)检测和间接免疫荧光法(IFA)检测,阳性者取其相对应的第3份角膜上皮进行病毒分离培养和电镜观察.结果138份近视眼角膜上皮中,ISPCR阳性者8眼(5.8%),IFA阳性者4眼(2.9%),两种检测均阳性者3眼(2.2%),取此9眼的第3份角膜上皮进行病毒分离培养,电镜扫描未发现病毒颗粒.结论正常角膜上皮细胞内存有HSV-I功能基因,提示可能有HSV-I的潜伏.
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豫医无毛小鼠中期染色体标本中无毛基因的原位PCR检测
目的确立豫医无毛小鼠无毛基因的原位PCR荧光检测方法.方法应用原位PCR的方法对豫医无毛小鼠中期染色体标本的无毛基因进行检测,并设立PCR反应液中无Taq DNA聚合酶、无引物、无bio-11-dUTP等进行多组对照.结果染色体标本上出现1～2个黄绿色的扩增信号,而对照组则无.结论本实验为以后进行该基因的精确染色体定位打下了良好基础.
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原位PCR在检测肝组织TTV中的应用
目的探索用原位PCR检测肝组织中的输血传播病毒(TTV).方法用原位PCR与原位杂交检测32例肝组织中的TTV,并比较两种方法的检测结果.结果32例标本中,经原位PCR检测,TTV阳性23例,经原位杂交检测,TTV阳性17例.原位PCR检测的阳性率(71.9%)明显高于原位杂交(53.1%),P＜0.05.原位PCR在肝细胞核、内皮细胞核与肝细胞浆内检测到TTV,而原位杂交只在肝细胞核与肝细胞浆内检测到TTV.结论本实验结果表明原位PCR是一种新的检测TTV的有效方法.
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幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A与胃癌发生的临床研究
目的:研究幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(HpcagA)在胃粘膜恶变过程中的作用,以探讨在胃癌发生过程中的分子学机制.方法:163例Hp阳性患者(慢性浅表性胃炎和萎缩性胃炎各30例,肠上皮化生33例,不典型增生31例、胃癌39例),用原位聚合酶链反应(PCR)、常规PCR和原位杂交等方法检测胃粘膜HpcagA.结果:163例标本中,原位PCR HpcagA阳性率为56.4%,显著高于原位杂交(44.8%),但与常规PCR 52.1%的阳性率相比二者无明显差异.原位PCR检出HpcagA阳性率从浅表性胃炎、癌前病变到胃癌逐渐升高.HpcagA阳性信号可出现在胃癌及癌前病变组织和胃粘膜上皮与腺上皮中,部分病例阳性信号甚至出现于上皮细胞核内.结论:HpcagA可能有助于胃粘膜组织的恶性转化,并可通过刺激胃粘膜细胞增殖、使癌基因激活和抑癌基因失活而促进胃癌的发生.
关键词： 幽门螺杆菌细胞毒素相基因A 原位聚合酶链反应 胃粘膜癌变
