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CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
目的 建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响.方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株.用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达.结果 测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍. Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍.CYP3A4高表达肝细胞bcl-2 mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5 mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2 mRNA明显升高(P＜0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P＜0.01),p53表达水平明显下降(P＜0.01).结论 三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素.
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代谢活化在三氯乙烯对小鼠致敏及肝毒性中的作用
目的研究三氯乙烯(TCE)通过什么代谢通路活化后才具有致敏活性.方法以TCE和细胞色素P450(CYP450)诱导剂(乙醇和苯巴比妥)分别及联合给小鼠染毒,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(GPT)和天冬氨酸氨基转移酶(GOT)活性;分离脾细胞体外培养,采用噻唑兰(MTT)法测定TCE所致小鼠脾淋巴细胞特异性增殖反应和细胞毒性,并观察体外培养过程中加入代谢酶抑制剂SKF-525A和氨氧乙酸(AOAA)后对上述效应的影响.结果TCE致敏组小鼠脾淋巴细胞与TCE共孵育后,细胞相对数(79±10)%明显高于溶剂对照组(63±11)%,差异有统计学显著性(P＜0.05),在培养液中加入β-裂合酶抑制剂AOAA后,这种抗原特异性淋巴细胞增殖反应消失;而乙醇诱导+TCE组和苯巴比妥诱导+TCE组小鼠脾淋巴细胞未出现TCE特异性增殖反应.溶剂对照组、TCE致敏组、乙醇诱导+TCE组和苯巴比妥诱导+TCE组小鼠脾淋巴细胞与TCE+SKF共培养后,细胞相对数均明显高于TCE单独培养的淋巴细胞,差异有统计学显著性(P＜0.05).乙醇诱导+TCE组血清GPT活性(49.5±8.4)μmol·min-1·L-1和苯巴比妥诱导+TCE组血清GPT,GOT活性(47.3±9.9)和(170±36)μmol·min-1·L-1均明显高于溶剂对照组(34.7±2.1)和(117±34)μmol·min-1·L-1,差异有统计学显著性(P＜0.05),而TCE致敏组小鼠血清GPT和GOT活性与溶剂对照组相比均无显著性差异(P＞0.05).结论TCE谷胱甘肽结合通路的代谢产物-巯基烯酮类物质具有致敏活性,可能是TCE致敏小鼠的特异性半抗原,而TCE氧化通路的代谢产物是产生细胞毒性和肝损伤的主要物质,乙醇和苯巴比妥能够增加TCE的肝脏毒性.
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深圳市某街道涉三氯乙烯企业分级管理效果评价
目的 对干预措施进行评价.方法 对作业场所进行三氯乙烯的检测和对工人进行三氯乙酸的检测,对所检测的结果进行前后对比.结果 监测涉三氯乙烯的50家企业,监测点为540个,对超标3倍及以上的点进行重复测量的方差分析后,干预组与对照组间对比,P=0.0024,干预组与对照组的三氯乙烯总体平均测量值差异有统计学意义(P＜0.05).说明干预组跟对照组的三氯乙烯测定值有不同.而检测次数之间的G-G调整(P＜0.05),检测结果差异有统计学意义,说明每次检测的结果都有改善.对超标但在3倍限值及以下的点进行重复测量的方差分析后,得出干预组跟对照组间的P=0.0333,且干预组与对照组的三氯乙烯总体平均测量值差异有统计学意义.说明干预组跟对照组的三氯乙烯测定值有不同.而检测次数之间的G-G调整(P＜0.05),检测结果差异有统计学意义,说明每次检测的结果都有改善.对未超标的点进行卡方检验分析,得(P＜0.0001),干预前后三氯乙烯浓度构成差异有统计学意义.说明未超标监测点的浓度经过干预后有所改善.对512名工人进行三氯乙酸的检测,干预前,三氯乙酸检测结果合格人数占总人数39.6％,进行干预后,所占比例上升到77.5％,经mcnemar检验,得P＜0.05,差异有统计学意义,表明进行分级管理后,三氯乙酸检测结果有所改善.结论 说明某街道的分级管理的效果明显.
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三氯乙烯对人体免疫系统和脂质过氧化作用影响的探讨
目的 通过对三组不同人群尿样和血样的分析比较,寻找三氯乙烯对人体免疫系统造成的损伤特异性指标.方法 收集三氯乙烯接触工人、非接触有机溶剂行业工人、三氯乙烯患者的血样和尿样,用顶空- 气相色谱法测定尿样中三氯乙酸,用免疫球蛋白测定试剂盒测定血样中IgG、IgA、IgM、IgE 和外周血T 淋巴细胞亚群,用分光度法测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、血清中丙二醛(MDA)含量、血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力.结果 IgA、IgE和IgG水平无明显改变,但观察组和比例组的IgM 比对照组低,有显著性差异.尿中三氯乙酸观察组及病例组的三氯乙酸比对照组高,有显著性差异.病例组和观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+ 均低于对照组,CD8+ 高于对照组,各组均有显著性差异.观察组及病例组与对照组比较,MDA、SOD和GSH-PX水平明显升高,差异有统计学意义.结论 接触三氯乙烯会改变机体的免疫系统,体内脂质过氧化作用会增强.
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三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡的实验研究
目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡的可能机制.方法 TCE处理NHEK后,分光光度法测细胞上清中半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8和9的活性,膜联蛋白V/碘化丙啶(PI)双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡,Rh123/PI双染后FCM测线粒体膜电位(△Ψm);用Caspase-3抑制剂或Caspase-9抑制剂预处理NHEK 1 h,验证Caspase的活化.结果 不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,Caspase-3和9活性呈剂量和时间依赖的升高,培养12、24 h,各TCE处理组Caspase-3和9活性与溶剂对照比差异均有统计学意义(均P<0.05),而Caspase-8活性变化不明显.0.125、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L TCE处理NHEK 4 h后培养12 h,膜联蛋白V~+/PI~-为(20.1±4.1)%、(30.0±7.5)%、(42.1±8.2)%、(56.0±6.1)%和(79.1±4.3)%,除0.125 mmol/L组外,其余组与溶剂对照组(9.4±3.0)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).膜联蛋白V~+/PI~-与Caspase-3和9活性都呈正相关(r=0.786、0.736,均P<0.05),Caspase-3活性与Caspase~活性也呈正相关(r=0.845,P<0.05),膜联蛋白V~+/PI~-和Caspase-3活性均与Caspase-8活性无相关.100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理使2.0 mmol/L TCE处理的NHEK中Caspase-3活性从(0.963±0.043)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1)下降为(0.349±0.045)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),膜联蛋白V~+/PI~-从(80.0±5.5)%下降为(16.3±3.2)%(P<0.01),Caspase-9活性变化不大(P>0.05).100μmol/L的Z-LEHD-FMK预处理不仅使得2.0 mmol/L TCE处理的NHEK中Caspase-3活性下降为(0.338±0.011)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),膜联蛋白V~+/PI~-下降为(16.1±1.7)%,而且Caspase-9活性也从(0.821±0.031)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1)下降为(0.240±0.043)nmol pNA·min~(-1)·ml~(-1),差异有统计学意义(P<0.01).2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4 h后,Rh123荧光强度在培养4、8、12、24 h时均明显低于0 h(18.7±0.5,均P<0.01);0.125、0.5和2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4 h后培养8 h,Rh123荧光强度为16.1±0.5、12.1±0.6和8.1±0.6,均低于溶剂对照组(18.1±0.5,均P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,包括线粒体膜电位下降和Caspse-9依赖的Caspase-3的激活在内的内部凋亡途径可能发挥重要作用.
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新型等离子体与光催化复合空气净化技术研究
目的 研究一种新型的等离子体-光催化复合空气净化技术.方法 采用三氯乙烯气体作为空气污染物对等离子体单元和光催化单元进行复合试验,选择等离子体加光催化或光催化加等离子体两种复合方式、改变两者之间的距离以及在其间放置网状物,检测其对三氯乙烯的净化效率.结果 等离子体加光催化复合方式具有明显协同效应,而且在两者的单独净化效率较低时更明显;两者间距在32.5 cm时净化效率可以达到90%以上;放置网状物对其净化效率都具有影响,放置不锈钢网时降解率为76.3%,放置无纺布时降解率为79.2%.结论 采用等离子体加光催化的复合方式、保持合适的间距,并放置适当材料的网,具有较显著的协同促进效应,可提高净化技术的复合效应.
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甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠骨髓细胞DNA的损伤效应
目的 探究甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠骨髓细胞DNA的损伤作用.方法 108只健康清洁级昆明小鼠按3×3析因设计随机分为9组,每组12只,雌雄各半,即对照组(清洁空气)、甲醛低剂量组(1 mg/m3)、甲醛高剂量组(5mg/m3)、三氯乙烯低剂量组(1 000 mg/m3)、三氯乙烯高剂量组(5 000 mg/m3)、低甲醛+低三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+1 000 mg/m3)、低甲醛+高三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+5 000mg/m3)、高甲醛+低三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+1 000 mg/m3)、高甲醛+高三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+5 000 mg/m3).采用静式吸入染毒,每天2h,连续14d.通过骨髓嗜多染红细胞微核试验和彗星试验检测骨髓细胞DNA的损伤.结果 随着甲醛和三氯乙烯染毒剂量的增加,各染毒组小鼠骨髓细胞微核率升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),二者对雌性小鼠微核率的影响存在交互作用(P＜0.05).彗星试验结果显示,除三氯乙烯低剂量组小鼠骨髓细胞拖尾率外,其他各染毒组拖尾率、尾部DNA含量和尾矩均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);除雌性小鼠尾矩外,甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠骨髓细胞拖尾率、彗星细胞尾部DNA含量和尾矩的影响均存在一定的交互作用(P＜0.05).结论 甲醛和三氯乙烯对小鼠骨髓细胞具有DNA损伤作用,二者联合吸入对DNA的损伤可能具有一定的协同作用.
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甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠免疫系统的影响
目的 探讨甲醛、三氯乙烯单独及联合染毒对小鼠免疫系统的影响.方法 选择健康清洁级昆明小鼠108只(雌雄各半),按3×3析因设计分为9组,即对照组(清洁空气)、甲醛低剂量组(1 mg/m3)、甲醛高剂量组(5 mg/m3)、三氯乙烯低剂量组(1 000 mg/m3)、三氯乙烯高剂量组(5 000 mg/m3)、低甲醛+低三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+1 000 mg/m3)、低甲醛+高三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+5000 mg/m3)、高甲醛+低三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+1 000 mg/m3)、高甲醛+高三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+5000 mg/m3).采用静式吸入染毒法,连续染毒14d,每天2h.染毒结束后处死小鼠,通过测定小鼠脾脏、胸腺脏器系数及迟发超敏反应强度、血清免疫球蛋白IgE和IgG水平的变化来观察二者单独及联合染毒对小鼠免疫系统的影响.结果 甲醛单独染毒可降低小鼠脾脏、胸腺的脏器系数(P＜0.05),三氯乙烯单独染毒可降低雌性小鼠胸腺脏器系数(P＜0.05),未见二者联合染毒对小鼠脾脏、胸腺脏器系数的变化存在交互作用(P＞0.05).甲醛、三氯乙烯单独染毒使雌性小鼠迟发超敏反应强度降低(P＜0.05),二者联合染毒对雌性小鼠足垫肿胀度的影响存在拮抗效应(P＜0.05).甲醛、三氯乙烯单独染毒使小鼠血清IgE水平升高(P＜0.05),未见二者联合染毒对小鼠血清IgE水平的变化存在交互作用(P＞0.05);甲醛和三氯乙烯单独及联合染毒对各染毒组小鼠血清IgG水平的影响无统计学意义(P＞0.05).结论 甲醛、三氯乙烯单独及联合染毒对小鼠免疫系统均有一定的抑制作用.
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甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠脑组织脂质过氧化的影响
目的 研究甲醛和三氯乙烯联合染毒对小鼠脑组织脂质过氧化的影响,并探讨其联合染毒的毒性效应.方法 将108只健康清洁级昆明小鼠(雌雄各半)按照3×3析因的要求,按性别分别随机分为9组,每组6只,分别为对照组(清洁空气)、甲醛低剂量组(1 mg/m3)、甲醛高剂量组(5 mg/m3)、三氯乙烯低剂量组(1 000 mg/m3)、三氯乙烯高剂量组(5 000mg/m3)、低甲醛+低三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+1 000 mg/m3)、低甲醛+高三氯乙烯剂量组(1 mg/m3+5 000 mg/m3)、高甲醛+低三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+1 000 mg/m3)、高甲醛+高三氯乙烯剂量组(5 mg/m3+5 000 mg/m3).采用静式吸人染毒方法,每天2h,连续染毒14d.染毒结束后测定小鼠脑组织中的谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力.结果 与阴性对照组相比,除三氯乙烯低剂量组雌、雄小鼠NOS活力无明显差异外,其余各染毒组雌、雄小鼠脑组织MDA含量和NOS活力升高,SOD活力和GSH含量下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与雄鼠相比,除甲醛低剂量组、三氯乙烯低剂量组、低甲醛低三氯乙烯组、高甲醛高三氯乙烯组雌鼠NOS活力和三氯乙烯低剂量组、高甲醛低三氯乙烯组、高甲醛高三氯乙烯组雌鼠SOD活力无明显差异外,其余各染毒组雌鼠脑组织MDA含量和NOS活力升高,SOD活力和GSH含量下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).甲醛和三氯乙烯联合染毒对雌、雄小鼠脑组织NOS、SOD活力和GSH、MDA含量的影响均为交互作用(P＜0.05),且表现为协同效应.结论 甲醛和三氯乙烯吸入染毒可致小鼠脑组织氧化损伤,二者联合染毒具有一定的协同作用;毒物对雌鼠脑组织氧化损伤影响更为明显.
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三氯乙烯所致职业危害的临床研究进展
近年来,职业性三氯乙烯中毒在我国东南沿海地区屡有发生,天津地区也曾发生过职业接触三氯乙烯中毒致人死亡的事件.随着三氯乙烯在工业生产中的广泛应用,其带给职业人群的健康威胁将越来越大,职业性三氯乙烯中毒在职业卫生领域也将越来越引起人们的重视.其中毒临床表现已经不再局限于药疹样皮炎、肝肾损害等常见症状,其与噪声联合作用对听力的损害、对眼部的损害已逐渐被发现.本文试图通过对近几年在医学刊物发表的有关三氯乙烯(TCE)职业中毒健康影响的学术资料和文献的汇总分析,从临床研究方面对职业性三氯乙烯中毒进行综述,概括职业性三氯乙烯中毒的临床表现,新特征,为职业性三氯乙烯中毒的早期发现、早期诊断、早期治疗提供更加科学的依据.
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三氯乙烯药疹样皮炎患者免疫相关基因的表达水平
目的 探讨三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA表达.方法 选取TCE药疹样皮炎患者8例为病例组,8例健康人为对照组,抽取两组对象的外周血,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,病例组Foxp3、GATA3、CT-LA4基因mRNA表达水平分别升高115％、97％和241％,差异有统计学意义(P＜0.01)；与对照组比较,病例组T-bet基因mRNA表达水平下降47％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TCE药疹样皮炎的部分免疫相关基因表达水平发生明显改变,这些基因可能在TCE引起的变态反应中发挥重要作用.
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三氯乙烯致细胞免疫和体液免疫参与的混合型变态反应研究
目的 探讨三氯乙烯(TCE)致变态反应是否存在细胞免疫和体液免疫共同参与,为研究其发病机制提供科学依据.方法 应用豚鼠和大鼠进行实验,分别设立阴性对照组、阳性对照组、TCE实验组,用皮内注射方式分别注射橄榄油、2,4-二硝基氯苯(DNCB)和TCE.实验结束后收集大鼠外周血液,用流式细胞仪检测淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+比例;收集豚鼠外周血液测定IgG、IgA、IgM、C3、C4水平;收集豚鼠脾淋巴细胞,用荧光定量PCR检测免疫相关基因GATA3、T-bet、CTLA4和Foxp3的mRNA表达水平.此外,选取TCE药疹样皮炎患者作为病例组,采用荧光定量PCR检测外周血Foxp3、GATA3、CTLA4、T-bet的mRNA表达水平.结果 (1)TCE对豚鼠皮肤有明显致敏作用,致敏率为83.3％;TCE实验组和阳性对照组IgG水平比阴性对照组显著升高(P＜0.01);TCE实验组和阳性对照组GATA3、T-bet、CTLA4 mRNA表达水平显著高于阴性对照组,Foxp3 mRNA表达水平低于阴性对照组.(2)TCE实验组和阳性对照组大鼠外周血淋巴细胞CD3+比例高于阴性对照组,TCE实验组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与阴性对照组比较无统计学差异.(3)TCE病例组Foxp3、GATA3、CTLA4 mRNA表达水平比对照组分别升高115％、97％和241％(P＜0.01),T-bet mRNA表达水平下降47％(P＜0.01).结论 TCE可引起细胞免疫和体液免疫发生明显改变,说明TCE导致的免疫损伤属于细胞免疫和体液免疫共同参与的混合型变态反应,可能是Ⅳ型和Ⅱ型变态反应.
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三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究
目的检测三氯乙烯(TCE)对人表皮角质形成细胞(NHEK)的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶.方法采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR5o值),确定TCE染毒剂量;测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数(PI).结果TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92～5.13)mmol/L;TCE处理NHEK 4 h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系(r=0.98,r=0.93,P＜0.01);TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高(空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%),而PI则明显降低(空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmoL/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%).结论在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖.
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三氯乙烯致敏小鼠肾损伤中补体C3a和C5a水平
目的 检测三氯乙烯(TCE)致敏小鼠不同时期肾脏中补体C3a和C5a水平,探讨在TCE致敏引起的肾损伤中补体的作用.方法 小鼠经皮内注射和腹部涂抹TCE 2次致敏后激发.在末次激发后的24 h、48 h、72 h和7d4个时间点采血、取肾脏,用全自动生化分析仪检测血清中尿索氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,免疫组织化学法检测肾脏中C3a和C5a沉积水平.结果 TCE处理组的小鼠致敏率达到42.0％.与溶剂对照组比较,致敏48 h和72 h组小鼠肾脏系数、血清BUN和Cr水平均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与同时点末致敏组比较,48 h和72 h致敏组小鼠肾脏系数明显增大,差异有统计学意义(P＜0.05).与溶剂对照组比较,7d致敏组肾脏系数、血清BUN、Cr水平差异无统计学意义(P＞0.05).与溶剂对照组比较,致敏48 h组小鼠肾脏补体C3a(3.80±0.84)、C5a (4.00± 1.00)水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);致敏72 h组小鼠肾脏中补体C3a(4.40±1.14)、C5a(4.40±1.14)水平明显高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).7d致敏组小鼠肾脏中补体C3a(1.80±0.45)、C5a (2.00±0.71)水平与溶剂对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TCE致敏可引起小鼠肾功能损伤,补体C3a和C5a在致敏小鼠肾脏中的水平升高,提示补体C3a和C5a可能参与TCE致敏引起的肾脏损伤.
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深圳市某区1992至2006年皮炎住院病例的调查
目的 了解近年来深圳市某区皮炎住院患者的流行病学分布特点,为研究三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎和预防提供依据.方法 对1992至2006年该区及其各街道医院的住院皮炎患者临床资料进行描述性分析.结果该区住院皮炎患者共645例,1998至2005年患者总人数呈上升趋势,主要年龄段为16～岁,其次为26～岁,工人占多数.过敏性皮炎(34.1%)、药物性皮炎(30.8%)、TCE药疹样皮炎(9.3%),依次为住院皮炎病例的前3位.60例TCE药疹样皮炎病例中有过敏史者2例(3.3%),与其他皮炎病例(144例,22.6%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);TCE药疹样皮炎患者肝功能异常的比例(71.7%)较高,与其他皮炎(13.8%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);患者主要分布于电子、五金、电镀行业.结论 TCE药疹样皮炎危害严重,加强工人的自我保护意识,重视重点行业、重点工种工人的工初观察和健康监护,减少职业接触机会,可以有效地减少TCE所致皮炎的发生.
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SET缺陷对三氯乙烯诱导L-02细胞增殖和凋亡及组蛋白去乙酰化酶的影响
目的 比较三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)和SET基因缺陷L-02细胞(SET缺陷细胞)中细胞增殖、凋亡、组蛋白去乙酰化酶活力及表达水平的变化,探讨TCE染毒对组蛋白修饰的影响及SET在表观遗传调控中的作用.方法 选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,以未经TCE处理的L-02细胞和SET缺陷细胞作为各自的对照组,用2.00和8.00 mmol/LTCE染毒两种细胞24 h,用CCK-8法和Hoechst 33342染色法检测细胞的增殖水平和凋亡率.用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mmol/L TCE染毒两种细胞,检测细胞的组蛋白去乙酰化酶活力和蛋白去乙酰化酶的蛋白表达水平.结果 TCE 8.00 mmol/L染毒组SET缺陷细胞与L-02肝细胞比较,增殖水平呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势,且差异均有统计学意义(t值分别为-4.362和23.950,P＜0.05).TCE处理L-02肝细胞和SET缺陷细胞后均引起细胞增殖水平的下降和凋亡率的升高,当TCE浓度达到8.00 mmol/L时,两组细胞间的增殖水平和凋亡率的差异有统计学意义(t值分别为-4.362,和23.950,P值均小于0.05).使用0,0.25,0.50,1.00,2.00,4.00和8.00 mmol/L TCE处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的组蛋白去乙酰化酶活力水平均呈现上升趋势.其中,当TCE染毒浓度到达0.50 mmol/L时,与L-02细胞对照组比较,L-02细胞组组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义(F值为403.26,P＜0.01);TCE为1.00 mmol/L时酶活力高.与SET缺陷细胞对照组比较,当TCE达到1.00 mmol/L时,SET缺陷细胞组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义(F值为44.01,P＜0.01).与同染毒剂量的L-02细胞比较,当TCE染毒剂量到达0.50 mmol/L时,SET缺陷细胞的组蛋白去乙酰化酶活力均低于L-02细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).与L-02细胞对照组比较,TCE染毒的L-02细胞HDAC2的蛋白表达水平明显上调,差异有统计学意义(F值为79.99,P＜0.01);TCE染毒的SET缺陷细胞HDAC2蛋白表达水平变化无明显规律.结论 TCE染毒可以诱发L-02细胞细胞增殖水平、凋亡率、组蛋白去乙酰化酶活力及相关蛋白表达水平的改变,SET缺陷可以明显抑制TCE染毒引起的细胞增殖、凋亡以及组蛋白修饰的异常.
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三氯乙烯致敏小鼠肝脏中C3aR和C5aR的表达水平
目的 研究三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肝损伤过程中C3aR和C5aR蛋白及mRNA表达水平,探讨职业性三氯乙烯药疹样皮炎(DMLT)的发病机制.方法 将6～8周雌性BALB/c小鼠随机分成空白对照组(5只)、溶剂对照组(6只)和TCE处理组(65只),于第1、4、7、10天进行致敏,第17、19天进行激发,激发后24、48、72 h和7d处死动物,并记录体重和肝脏重量,无菌取出肝脏,用于病理观察组织结构,采用免疫荧光和实时荧光定量PCR检测C3aR和C5aR蛋白和mRNA表达水平.结果 未致敏组小鼠肝脏组织未见明显异常,TCE致敏组小鼠肝脏HE染色下观察可见明显的细胞排列疏松、细胞坏死和大量炎细胞浸润.24、48、72 h和7d致敏组中C3aR和C5aR蛋白和mRNA,表达水平明显高于空白对照组、溶剂对照组和相应时点的未致敏组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TCE致敏小鼠肝损伤过程中有补体激活的参与,C3aR和C5aR可能发挥重要作用.
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三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养皮肤KC细胞氧化损伤及维生素E的保护作用
目的 探讨三氯乙烯(TCE)、四氯乙烯(PCE)对体外培养人皮肤角质形成细胞(KC)氧化损伤作用及维生素E的保护作用.方法 将来源于3个或3个以上不同健康个体的皮肤KC细胞混合培养于K-SFM培养基中,利用中性红吸附实验确定其半数抑制浓度(IC50),并据此确定TCE、PCE染毒浓度.染毒4 h后,测定细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)水平;维生素E保护组使用不同浓度维生素E预作用2 h后,再分别换入0.5 mmol/L TCE或0.2 mmol/L PCE与不同浓度维生素E混合物作用4 h后,测定细胞内MDA、SOD、ROS水平.结果 TCE、PCE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤,且具有浓度-反应关系.而维生素E对其具有保护作用,能下调其氧化损伤,且具有浓度-反应关系.结论 TCE、PCE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤,而维生素E对其具有保护作用.
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三氯乙烯致敏豚鼠体液免疫变化
目的 探讨三氯乙烯(TCE)致敏豚鼠血清中补体(C)和免疫球蛋白(Ig)的变化.方法 选用体重250～300 g的雌性豚鼠36只,随机分成空白对照组(5只),溶剂(橄榄油)对照组(5只),TCE实验组(26只).根据豚鼠大值试验(GPMT)方法对豚鼠进行染毒.激发接触后24 h观察和记录豚鼠背部受试区的皮肤反应情况,进行评分.按皮肤致敏反应积分将TCE处理组豚鼠分为致敏组(积分≥1)和未致敏组(积分为0).分别在实验结束后24、72 h采血,检测血清中C3、C4、IgA、IgG、IgM浓度.结果 TCE处理组豚鼠致敏率为65.38％(17/26).TCE致敏24、72 h组C3含量[24 h:(99.75±1.45)μg/ml,72 h:(93.28±3.61) μg/ml]均明显低于溶剂对照组[(112.30±9.10)μg/ml],差异均有统计学意义(P＜0.05)；与溶剂对照组比较,致敏24、72 h组C4含量[24 h:(34.63±2.53) μg/ml,72 h:(33.82±2.76) μg/ml]均明显低于溶剂对照组[(43.87±3.65) μg/ml],差异均有统计学意义(P＜0.05).TCE致敏24、72 h组、TCE未致敏24、72 h组IgA、IgM含量均明显低于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与TCE未致敏组比较,TCE致敏24、72 h组血清中IgA水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).各组血清中IgG的含量无明显改变.结论 TCE致敏豚鼠皮肤后,血清中C3、C4含量降低,体液免疫功能发生紊乱.
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三氯乙烯致肝细胞毒性中SET启动子区甲基化水平的改变
目的 研究三氯乙烯(Trichlorethylene,TCE)致肝细胞毒性中SET基因启动子区甲基化水平的改变.方法 培养L-02肝细胞,使用0、1、2、4、8 mmol/L浓度的TCE处理24 h,提取细胞基因组DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,用PCR扩增目标序列,重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析TCE作用下肝细胞中SET基因启动子区甲基化状态.结果 与对照组比较,TCE处理后L-02肝细胞中SET基因启动子区甲基化水平下降,且随着TCE染毒浓度的增加,SET基因启动子区甲基化水平递减.对SET启动子区甲基化差异位点进行分析发现,差异有统计学意义的甲基化位点有73个,已知转录因子结合位点9个.结论 TCE致L-02肝细胞毒性中SET基因启动子区甲基化水平下降,影响转录因子的结合,继而使SET蛋白表达升高.
