加味补血汤对缺铁性贫血患儿转铁蛋白受体的影响

缺铁性贫血是一种很常见的小细胞低色素性贫血,在发展中国家中患病率较高,对它的研究也日益深入.近10年来,对机体铁代谢调节及铁状况评价方法的研究取得了很大进展,诊断缺铁性贫血有许多标准,如:血清铁蛋白、转铁蛋白饱和度、血清铁等,但这些标准受急性时相反应影响,在诊断缺铁性贫血时不够理想,而骨髓铁染色因为是创伤性取样,更给患者增加痛苦.近年来的研究表明,血清转铁蛋白受体(sTfR)是诊断缺铁性贫血的一项新指标.血清或血浆中的sTfR是红细胞成熟过程中脱落下来的游离片段,主要作用是介导幼红细胞的铁摄取.sTfR水平与细胞内铁营养状况明显相关[1].

转铁蛋白标记磁性脂质体的制备及体外成像

背景:利用转铁蛋白受体表达的特异性和转铁蛋白-转铁蛋白受体结合的亲和性,转铁蛋白修饰药物载体可以明显提高药物的特异结合能力和疗效.转铁蛋白也可修饰影像对比剂,针对肿瘤组织的转铁蛋白受体,实现肿瘤的特异性靶向成像.目的:评价转铁蛋白-磁性纳米粒的理化特性,并对其细胞结合特性进行体外实验研究.方法:采用旋转蒸发法制备磁性脂质体,共价结合法制备转铁蛋白-磁性纳米粒.对转铁蛋白-磁性纳米粒的粒径、电位、形态、转铁蛋白结合效率、r2弛豫率、细胞结合特性及细胞毒性等指标进行分析评价.转铁蛋白-磁性纳米粒与转铁蛋白受体高表达HepG2肝癌细胞特异性结合后进行体外MR成像.结果与结论:①转铁蛋白-磁性纳米粒平均粒径为95.1 nm,多分散系数为0.21,Zeta电位为-1.25 mV,r2弛豫率为94.62 mmol-1?s-1,每个磁性脂质体约结合27个转铁蛋白分子;②荧光共聚焦电镜显示转铁蛋白-磁性纳米粒与转铁蛋白受体高表达HepG2肝癌细胞发生特异结合,荧光胞浆出现罗丹明红染;普鲁士蓝铁染色显示HepG2细胞内和细胞表面有铁染色颗粒;③体外细胞MR T2WI成像显示,转铁蛋白-磁性纳米粒与HepG2细胞标记后,离心管信号强度下降;而空白磁性纳米粒与细胞不发生结合,故无明显信号强度下降;④细胞毒性实验显示细胞生长曲线良好;⑤以上结果表明,转铁蛋白-磁性纳米粒满足MR分子探针的所需要求,可用于MR分子成像.

血锌原卟啉和血清转铁蛋白受体测定对合并感染的缺铁性贫血患儿的诊断价值

目的研究血锌原卟啉(ZPP)和血清转铁蛋白受体(sTfR)测定在合并感染的缺铁性贫血患儿中的诊断价值.方法 1999～2002年华中科技大学同济医学院附属同济医院采用血液荧光测定仪测定ZPP,酶联免疫吸附试验法测定血清转铁蛋白受体,检测了60例合并常见感染性疾病的缺铁性贫血(IDA)患儿,设为感染合并IDA组,Hb(70.4±21.7)g/L.同时检测了20例患同类感染性疾病的血红蛋白正常患儿,设为对照组,Hb(123.1±10.2)g/L.结果 ZPP:对照组为(0.54±0.18)μmol/L,而感染合并IDA组为(2.55±1.72)μmol/L,明显高于对照组(t=8.71,P<0.001).血清转铁蛋白受体:对照组为(7.09±2.32)mg/L,感染合并IDA组为(24.40±17.84)mg/L,亦显著高于对照组(t=7.33,P<0.001).结论两种诊断IDA的新指标ZPP和sTfR受感染因素的影响较小,在合并常见感染性疾病的IDA患儿中,仍可作为诊断铁缺乏的良好指标.

转铁蛋白受体和铁蛋白在缺铁性贫血诊断中的意义

目的:探讨可溶性转铁蛋白受体(sTfR)、血清中铁蛋白(SF)在缺铁性贫血诊断中的意义.方法:分别应用免疫比浊法和化学发光法测定缺铁性贫血、隐性缺铁患者和正常对照组的转铁蛋白受体和铁蛋白.结果:缺铁性贫血组sTfR的值为7.23±4.52 mg/L,明显高于隐性缺铁组(2.43±0.77 mg/L,P＜0.01)和正常对照组(1.34±0.35 mg/L,P ＜0.01).缺铁性贫血组和隐性缺铁组的SF分别为:4.3±1.8 μg/L,7.2±3.7 μg/ L, 两组均明显低于对照组(46.5±18.2 μg/L).结论:sTfR是诊断缺铁性贫血的较敏感的指标,SF是诊断隐性缺铁可靠指标.联合检测sTfR和SF,尤其是计算sTfR/SF对于早期诊断缺铁性贫血具有重要意义.

电针双侧足三里、三阴交穴治疗脾气虚证大鼠和对机体铁代谢影响实验研究

目的:该实验通过电针针刺脾气虚大鼠的“三阴交”和“足三里”穴,观测实验后大鼠的血清铁(SI)、铁蛋白(Fe)、总铁结合力(TIBC)、转铁蛋白(Tf)和转铁蛋白受体(TfR)的变化,探讨脾气虚对血液的分子生物学的病理影响,同时尝试研究针刺治疗脾气虚方法和作用机制.方法:应用随机分组的方法,将SD大鼠40只,平均分为4组,依次为正常组、模型组、经穴组、非经非穴组,以饮食不节、过度疲劳为造模因素进行脾气虚造模.造模成功后,除正常组进行正常喂养外,模型组每日上午继续造模,下午不给予针刺,每日捆绑20 min.经穴组和非经穴组进行针刺治疗.试验结束后,各组大鼠取血清用ELISA方法检测大鼠血清中血清铁含量、铁蛋白含量、总铁结合力.采用荧光定量PCR方法检测肝细胞转铁蛋白mRNA和转铁蛋白受体mRNA的表达,采用spss 19.0统计软件对实验数据进行分析.结果:(1)正常组大鼠血清铁含量与模型组相比显著降低(P＜0.01),经穴组血清铁含量与模型组相比显著降低(P＜0.01),经穴组与正常组相比无统计学意义(P＞0.05),模型组与非经非穴组比较无统计学意义(P＞0.05).(2)正常组大鼠铁蛋白含量、总铁结合力与模型组相比显著升高(P＜0.01),经穴组铁蛋白含量与模型组相比显著升高(P＜0.01),经穴组与正常组相比无统计学意义(P＞0.05),模型组与非经非穴组比较无统计学意义(P＞0.05).(3)电针双侧“足三里”“三阴交”穴对脾气虚大鼠转铁蛋白mRNA的表达量影响模型组大鼠转铁蛋白mRNA的表达量、转铁蛋白受体mRNA与正常组相比显著降低(P＜0.01),经穴组血清转铁蛋白mRNA的表达量与模型组相比显著升高(P＜0.01),经穴组与正常组相比无统计学意义(P＞0.05),模型组与非经穴组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:(1)脾气虚时大鼠体内的铁代谢出现异常.(2)针刺“足三里”和“三阴交”可以调节脾气虚大鼠体内的铁代谢,起到益气健脾的作用并治疗脾气虚.(3)转铁蛋白-转铁蛋白受体系统很可能是脾主升清和主统血功能在物质层面的一种表现.(4)铁代谢异常可能与脾气虚的病理本质有关.

转铁蛋白及其受体作为药物载体的研究进展

目的 介绍转铁蛋白及其受体在药学中的应用和新的研究方向.方法 通过查阅近年来国内外有关转铁蛋白和转铁蛋白受体特点及其应用的文献,综述了转铁蛋白和转铁蛋白受体的特点和分类;转铁蛋白转运金属离子的能力;利用转铁蛋白受体的抗体向脑部转运药物的应用;转铁蛋白和转铁蛋白受体的抗体与药物的结合方法及应用.结果 转铁蛋白具有多态性,主要被划分为血清转铁蛋白、卵(清)转铁蛋白和乳(清)转铁蛋白;转铁蛋白受体主要有转铁蛋白受体1和转铁蛋白受体2;转铁蛋白既能转运金属离子又能转运化学药物及基因药物,并在利用转铁蛋白受体的抗体向脑部转运药物方面显示出巨大的应用前景;转铁蛋白可与药物通过静电引力直接吸附,也可以与药物通过共价键结合.结论 转铁蛋白及转铁蛋白受体在靶向药物转运中得到了有效的应用,并将受到更为广泛的关注.

孕妇检测可溶性血清转铁蛋白受体的临床应用价值

目的:探讨可溶性血清转铁蛋白受体检测对孕妇贫血的早期诊断和营养保健的临床应用价值.方法:随机采样,采用免疫比浊法测定血清转铁蛋白受体,同时检测MCV、MCH、MCHC、RDW.结果:RDW健康组与轻度贫血组比较,无显著性差异(P>0.05);健康组与中度贫血组比较,差异有显著性意义(P<0.05).MCV、MCH、MCHC健康组与两贫血组比较均无显著性差异(P>0.05);健康组与两贫血组妇女STfR、SF的结果比较,有显著性差异(P<0.05);STfR测定缺铁性贫血的灵敏度为68.2%,特异性81.5%.结论:孕妇检测血清转铁蛋白受体,有利于孕妇贫血的早期诊断和营养保健,对孕妇和胎儿的健康大有益处.

孕母铁缺乏对新生儿铁水平的影响

目的:通过对孕母及新生儿铁相关指标的追踪调查探讨孕母铁缺乏对新生儿铁水平的影响.方法:全程追踪81例孕母,分别于孕早、中、晚期及分娩时测定血液中血红蛋白(Hb)、网织红细胞(Ret)、网织红细胞成熟指数(RMI)、血清铁(SI)、血清铁蛋白(SF)和血清转铁蛋白受体(sTfR).结果:孕母孕早期各组间SF和SI的差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).孕中期及孕晚期各组间SF的差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).全程缺铁性贫血(IDA)组、中晚孕期IDA组与全程正常组组间比较及孕中晚期不同铁水平组间比较SI及SF的差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论:孕母不同孕期、不同程度铁缺乏对新生儿脐血铁水平有影响,孕母轻度铁缺乏会影响新生儿铁贮备,孕母缺铁越早对新生儿铁贮备的影响越大.

抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达

目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达.方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性.结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合.结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性.

抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定

目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定.方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4s)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性.结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高.结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合.

抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定

目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白.方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因.以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfR scFv-SLC融合蛋白的表达.SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性.FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性.结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350 bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfR scFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功.IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41 kD的条带,符合scFv-SLC理论值.FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfR scFv有所提高.结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合.

老年慢性阻塞性肺疾病稳定期合并贫血患者铁调节素、血清转铁蛋白受体和降钙素原水平

改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者营养状况,可以降低呼吸道疾病的危险[1].传统观念认为COPD患者可引起继发性红细胞增多,但临床观察却发现有一部分COPD患者存在慢性贫血,长期出现营养不良表现,尤其是老年COPD患者[2],而导致贫血的确切机制目前尚不清楚.本文拟观察COPD稳定期患者铁调节素(hepcidin)、血清转铁蛋白受体(TfR)及降钙素原(PCT)水平,以探讨老年COPD稳定期并贫血的发病机制.

大鼠脑出血后三价铁沉积及其相关铁转运体的实验研究

目的 本实验通过观察实验性大鼠脑出血后不同时间段三价铁的沉积颗粒与转铁蛋白(Tf)、转铁蛋白受体(TfR)及铜蓝蛋白(CP)之间的动态变化及相关性,旨在探索三价铁及其内源性的铁转运体在脑出血后继发性脑损害中的影响及作用机制.方法 采用大鼠Ⅳ型胶原酶定位注射制造脑出血模型,应用摩罗利(Mallory)铁染色法观察不同组别及时间段的三价铁沉积,免疫组化法分别观察不同时间段Tf、TfR及CP的表达变化.结果 脑出血3、7、14d组较同期假手术组三价铁沉积显著增多,且以第14天多；脑出血各组Tf免疫阳性细胞数显著增多,且以第3～7天组多；脑出血第1、3、7天组TfR及CP免疫阳性细胞数显著增多,以第3～7天表达多；相关分析显示三价铁沉积颗粒与Tf、TfR免疫阳性细胞呈显著正相关,CP免疫阳性细胞与Tf、TfR免疫阳性细胞呈显著正相关.结论 脑出血后三价铁沉积可诱导Tf及TfR的表达,Tf/TfR表达上调可能参与脑组织内铁的转运及清除；脑组织内三价铁的沉积可能不直接诱导CP的表达,但CP可能协助Tf/TfR共同完成脑组织内铁的转运.

去铁酮对大鼠脑出血后三价铁转运体及神经功能的影响

目的 观察去铁酮(Dfp)对大鼠脑出血后铁超载情况下铁蛋白(Ft)、转铁蛋白(Tf)、转铁蛋白受体(TfR)及神经功能的影响.方法 采用大鼠Ⅳ型胶原酶定位注射制造脑出血模型,应用免疫组化方法观察不同组别、时间段Ft、Tf、TfR的表达变化,同时观察神经功能评分.结果 与假手术对照组相比,脑出血组Ft免疫阳性细胞数3d、7d、14 d显著增多,7d多；Tf免疫阳性细胞数各时间点均显著增高,以3d、7d多;TfR免疫阳性细胞数1d、3d、7d显著增多,以3d、7d多；去铁酮干预组与脑出血组有相同变化趋势,但升高程度明显低于脑出血组；脑出血组、去铁酮干预组各时间点神经功能评分均显著增高,以1d～3d高,之后逐渐下降,差异无统计学意义.结论 去铁酮可降低脑出血后Ft、Tf、TfR表达上调的程度,不能改善大鼠脑出血后神经功能障碍；脑出血后自身Ft、Tf、TfR的表达上调可能起神经保护作用.

键合靶向纳米胶束对脑胶质瘤细胞的组织相容性和靶向性

目的：探讨转铁蛋白受体的单克隆抗体（OX26）与聚乳酸聚乙二醇（PEG-PLA）键合靶向纳米胶束（copolymer／OX26）的生物相容性和安全性，阐明其作为脑胶质瘤靶向治疗载体的可行性。方法：体外培养C6胶质瘤细胞，用不同浓度（10.0、20.0、40.0和80.0 mg·L－1）纳米胶束作为实验组，不含胶束的培养液作为对照组；台盼蓝染色法检测靶向纳米胶束对胶质瘤 C6细胞的增殖抑制作用；流式细胞术检测靶向纳米胶束作用后 C6胶质瘤细胞凋亡和细胞周期变化；激光共聚焦显微镜观察肿瘤细胞对靶向胶束的摄入情况。结果：与对照组比较，OX26靶向纳米胶束作用后 C6细胞数无明显改变（P ＞0.05），各组细胞凋亡率和细胞周期细胞比例差异亦无统计学意义（P ＞0.05）；靶向纳米胶束组细胞内的荧光强度明显高于空白胶束组和空白对照组（P ＜0.05），并且这种作用随药物作用时间和浓度的增加而增加。结论：OX26靶向纳米胶束对 C6细胞增殖和凋亡无影响，键合 OX26提高了 C6细胞对胶束的摄入量。

青蒿琥酯抑制白血病耐药细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达

目的:观察青蒿琥酯对于白血病多药耐药细胞细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达的影响.方法:将K562/ADM(耐阿霉素)细胞分别经浓度为12.5、25、50μg/mL的青蒿琥酯处理48 h,同时25 μg/mL实验组在12h、24 h、36 h分别收集足量细胞.采用流式细胞术检测青蒿琥酯对细胞转铁蛋白受体(TfR)密度的调控作用,Western blot检测青蒿琥酯对细胞TfR蛋白表达的调控作用.CCK-8法分析青蒿琥酯对K562/ADM细胞生长增殖的影响.结果:K562/ADM细胞TfR密度和TfR蛋白表达水平分别经12.5、25、50 μg/mL青蒿琥酯处理后均下降,呈浓度依赖性.25 μg/mL青蒿琥酯处理K562/ADM细胞不同时间段后转铁蛋白受体蛋白表达水平随着Art作用时间延长而逐渐降低,表明呈时间依赖性.K562/ADM细胞经青蒿琥酯处理后其耐药性减弱:与对照组相比,12.5、25、50 μg/mL实验组细胞耐药逆转倍数分别为1.38、2.12和2.95倍,从而抑制K562/ADM细胞增殖.IC50值为19.7μmol/L.结论:青蒿琥酯能降低细胞TfR密度和下调TfR蛋白的表达,逆转K562/ADM细胞的耐药性,从而起到抗肿瘤作用.

旋转恒定磁场对类风湿关节炎大鼠血清铁的影响

目的:以类风湿关节炎SD大鼠为模型,观察旋转恒定磁场对类风湿关节(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠的治疗效果及时血清铁的影响.方法:用乳化剂天然牛胶原蛋白Ⅱ加完全弗氏佐剂法建立RA大鼠模型.将RA大鼠随机分为对照组、磁场强度是0.4 T,频率分别为6.72 Hz和8.97 Hz的曝磁组,每天曝磁两次,每次2 h,曝磁过程中每天观察大鼠关节肿胀程度,30 d后测定血清铁状态及转铁蛋白和转铁蛋白受体含量.结果:曝磁组RA大鼠关节的肿胀程度显著减小,由严重肿胀且不能负重变为中度肿胀或轻度肿胀,且血清中转铁蛋白和转铁蛋白受体含量有显著的增加.血清铁升高.结论:磁场对类风湿关节炎大鼠有治疗作用,对RA大鼠铁吸收有促进作用.

转铁蛋白受体指数对儿童贮存铁减少的诊断价值

目的 探讨转铁蛋白受体指数[血清转铁蛋白受体(sTiR)/Log血清铁蛋白(sF)]对儿童贫血早期贮存铁减少(IDS)诊断的有效性.方法 检测568例武汉地区来我院的就诊儿童和96名健康儿童的锌原卟啉(ZPP)、血红蛋白(Hb)、血清铁蛋白(SF)、血清转铁蛋白受体(sTIR)水平.依评价标准,分为铁正常、IDS、红细胞生成缺铁(IDE)与缺铁性贫血(IDA)4组.统计IDS儿童数量,并计算其sTfR/LogSF.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析sTIR、sTfR/LogSF诊断儿童IPS的效率.结果 筛查出的102例IDS儿童与健康儿童相比,血清sTIR和sTfR/LogSF均显著增加(P<0.05).但对贫血早期儿童IDS的诊断而言,sTIR/LogSF的灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值均高于sTIR.经ROC曲线分析,sTIR诊断IDS的效率为0.79,而sTfR/LogSF诊断IDS的效率达0.93.结论 sTfR/LogSF能有效反映儿童早期贮存铁的情况,可作为筛查儿童IDS的可靠指标.

048 急性疟疾对血浆转铁蛋白受体浓度的影响

99mTc-转铁蛋白-DTPA-Gd核素/磁性双模态分子影像探针基于转铁蛋白受体表达水平的肿瘤成像

背景与目的:转铁蛋白(Holo-Transferrin,Tf)受体(transferrin receptor,TfR)广泛存在于恶性肿瘤细胞膜表面,并被认为是抗肿瘤治疗的靶点.本研究旨在探讨99mTc-Tf-DTPA-Gd在体、无创性检测多种人源性肿瘤TfR表达情况的可行性.方法:制作10种人肿瘤细胞的BALB/c裸小鼠移植瘤模型;经荷瘤鼠尾静脉注射99mTc-Tf-DTPA-Gd或Tf-DTPA-Gd 4 h后行单光子发射计算机断层摄影术(single-photon emission computed tomography,SPECT)/计算机断层摄影术(computed tomography,CT)或磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检查,勾画感兴趣区(region of interest,ROI),计算靶本比值即靶区/肌肉组织(target-to-muscle ratios,T/M)或相对信号增强值(relative signal enhancement,rSE);显像结束后取肿瘤组织行H-E染色及免疫组织化学染色,采用H-score法评估10种肿瘤表达TfR水平.选用两样本t检验及Spearman分析数据.结果:10种移植瘤模型均可用于成像.注射双模态探针4 h后,有9种肿瘤摄取99mTc-Tf-DTPA-Gd,其中胶质瘤细胞U87的T/M值高,乳腺癌细胞MDA-MB-468也有较高的T/M值;而前列腺癌细胞PC-3肿瘤几乎不摄取,T/M值接近1,与MDA-MB-468 T/M值相比差异有统计学意义(t=6.919,P=0.002).MRI显示,MDA-MB-468肿瘤强化明显,rSE达(154.88±8.71)％,而PC-3肿瘤为(111.31±3.46)％,差异有统计学意义(t=8.441,P=0.001).PC-3肿瘤几乎不表达TfR,其余9种肿瘤均不同程度地表达TfR.TfR免疫组织化学检测结果与探针的T/M值呈明显的正相关(相关系数为r=0.915,P<0.001).结论:99mTc-Tf-DTPA-Gd可在体、无创性反映肿瘤表达TfR受体情况.