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金属硫蛋白-3研究进展
金属硫蛋白-3在中枢神经系统尤其是脑中的分布具有特异性,相对于其他金属硫蛋白来说,其主要分布于中枢神经系统,具有区别于其他金属硫蛋白的特异结构和特异生物学功能,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质.本文综述了金属硫蛋白-3在分布、诱导及其结构与功能关系等方面的研究进展.
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视神经横断后生长抑制因子Nogo及其受体NgR mRNA表达的变化及意义
观察大鼠视神经横断后Nogo-A及其受体NgR mRNA表达的变化.将36只正常成年SD大鼠随机分为三组,视神经横断7d组、14d组和正常对照组,每组12只.分别提取视神经组织,使用实时荧光定量聚合酶链式反应法定量分析Nogo-A及NgR mRNA表达量的变化.实验结果显示,在大鼠的视神经组织中存在Nogo-A及其受体NgR基因的表达.与对照组相比,视神经横断7d后Nogo-A表达显著减少(P<0.05);视神经横断14d后,其表达较横断7d组显著增加(P<0.05),但仍明显低于对照组(P<0.05).NgR在视神经横断7d后与对照组相比,表达显著减少(P<0.05),视神经横断14d后,其表达较横断7d组无显著差异(P>0.05).视神经完全横断伤后Nogo-A mRNA表达先下降再升高,NgR mRNA 表达下降并基本保持在同一水平.
关键词： 视神经 轴突横断术 大鼠 生长抑制因子 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
骨髓内皮细胞分泌的抑制CFU-F生长的因子
为探讨骨髓微环境中内皮细胞调节造血的可能机制,本实验研究了骨髓内皮细胞无血清条件培养液(BMEC-CM)及其不同分子量组分对骨髓成纤维祖细胞(CFU-F)生长的作用.在体外培养条件下,收集人和小鼠纯骨髓内皮细胞无血清条件培养液,应用连续超滤技术从其中制备出分子量＞10 kD,3-10 kD和＜3 kD三种组分,进行骨髓CFU-F集落形成实验,检测这些条件培养液及其超滤组分的作用.结果显示,人和小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液和分子量＜3 kD超滤组分都抑制CFU-F的生长,但是分子量＞10kD和3-10 kD组分却不产生这种效应.两种条件培养液及其＜3 kD组分不仅减少CFU-F集落形成数,同时也使集落变小,而且,＜3 kD组分与CFU-F集落数之间有明显的负相关浓度依赖性关系.这些结果提示,骨髓内皮细胞至少能分泌一种分子量小于3 kD的对骨髓CFU-F生长有抑制作用的细胞因子.
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ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响
目的 研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 稳定转染pEGFP-N1-ING5真核表达载体和pEGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株.将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组.采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株.ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05).结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标.
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小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞生长的影响
本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞, 收集无血清条件培养液(mBMEC-CM), 将其作多级串联超滤, 获得分子量大于10、 3～10、 1～3、 0.5～1 kD和小于0.5 kD超滤组分.进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验, 检测了它们的作用.mBMEC-CM 和3～10 kD组分对粒巨噬系祖细胞(CFU-GM)生长未见明显影响, 而分子量大于10 kD和0.5～1 kD组分促进CFU-GM的增殖, 分子量1～3 kD和小于0.5 kD组分则抑制CFU-GM的增殖.这4种超滤组分对CFU-GM生长的效应均有剂量依赖性.这些结果提示, 在体外培养条件下, 小鼠骨髓内皮细胞分泌若干种活性成分, 分别对CFU-GM的生长起促进或抑制作用.
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肝细胞生长抑制因子的分离纯化及其性质分析
目的 从小牛肝脏中分离纯化具有抑制肝癌细胞活性的多肽类物质,并分析其性质.方法 将小牛肝脏细胞的提取液经超滤、透析、加热、乙腈沉淀、离子交换层析等步骤分离、纯化得到几种蛋白并在体外用HepG2细胞检测其抗肿瘤活性.结果 获得了2种对肝癌细胞有显著抑制效应的蛋白,其分子量分别为10.9KD和11.9KD.结论 发现两种对热很稳定的非精氨酸酶类新的肝源性细胞生长抑制因子,有望发展成为新的治疗肝癌的药物.
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p33ING1在胃癌中的表达及其临床意义
目的:检测人胃癌组织中生长抑制因子p33ING1的表达情况,并探讨其与胃癌病人临床病理参数之间的关系.方法:采用免疫组织化学(ElivisionTM plus法)检测胃癌组织91例、正常胃黏膜30例和不典型增生胃黏膜组织35例中p33ING1蛋白的表达情况.结果:在胃癌组织中,p33ING1蛋白表达的阳性率均明显低于正常胃黏膜和不典型增生胃黏膜(P＜0.01).胃癌组织中p33ING1蛋白的表达情况在不同肿瘤的浸润深度、分化程度、临床分期和淋巴结有无转移间差异均有统计学意义(P＜0.05).应用生存曲线的Log-rank单因素分析显示:浸润深度和淋巴结转移与胃癌的预后均有一定相关性,而p33ING1与胃癌的预后可能无相关性.结论:p33ING1在胃癌组织中表达异常,可能与胃癌的发展有关,有望为胃癌提供新的治疗靶点.
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肝细胞癌中微小RNA-650的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA (miR)-650与肝细胞癌(HCC)发生发展的关系.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测并比较肝癌及其癌旁组织、正常肝组织中miR-650的表达水平,分析其与临床病理特征的关系;正常肝细胞株THLE-2分别转染miR-650双链体、miR-650反义序列,Real-time PCR、Western blot、噻唑蓝(MTT)分别用于检测转染效率、生长抑制因子-4(ING4)蛋白表达及细胞增殖活力.结果 miR-650的表达水平在HCC组织中高于癌旁组织(3.02±1.11比1.25±0.63,P＜0.05),并与患者的年龄(P＜0.01)、肿瘤分化程度(p＜0.05)和肿瘤分期(P＜0.01)明显相关.miR-650与ING4的表达明显负相关(rs=-0.2011,P＜0.05).肝细胞增殖活力在转染后72、96、120、144 h较对照组明显活跃(1.53 ±0.15比0.88±0.11,2.62 ±0.26比1.44±0.18,3.82±0.29比2.53±0.24,4.06±0.24比3.06±0.35,p＜0.05).结论 miR-650与HCC的临床病理学特征有关,它可能通过抑制ING4的表达而促进了HCC的肿瘤发生发展.
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口腔癌缺失基因(doc-1)的结构与功能研究
DOC-1是一个进化上高度保守,显示杂合性缺失和在恶性角化细胞表达明显消失的基因.p12(DOC-1)是DOC-1基因编码的生长抑制因子蛋白,它在口腔鳞癌的发生中起着重要作用,它不仅能抑制肿瘤的生长,其表达水平还与口腔肿瘤患者的预后紧密相关.进一步的研究有利于理解口腔肿瘤的发病机理,为诊断、治疗和预防口腔肿瘤,提供新的作用靶点.
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家兔主动脉平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞增殖
为探讨血管平滑肌细胞自分泌和旁分泌对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞,并制备平滑肌细胞条件培养基. 采用孔径100 kDa和10 kDa的Millipore滤膜,将平滑肌细胞条件培养基分部.平滑肌细胞增殖测定采用宝灵曼试剂盒XTT法.结果提示,家兔血管平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖,浓度50%的平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖率高达45%,且该生长抑制活性物质具有剂量依赖、加热56℃ 30 min稳定和分子质量小于10 kDa的特点.
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生长抑制因子4表达水平与肝癌肝移植术后复发转移及预后的关系
目的 探讨生长抑制因子4 (ING4)表达水平与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后复发转移及预后的关系.方法 选取2003年5月至2007年12月在江西省人民医院器官移植科实施肝癌肝移植手术的30例患者作为研究对象.组织标本取自手术切除的肝癌组织和相应癌旁1 cm外的癌旁肝组织(PCLT).采用免疫组织化学(免疫组化)方法对肝癌组织和PCLT中ING4蛋白的表达进行定性检测,比较两者ING4蛋白的阳性表达率及表达强度的差异.采用蛋白质印迹法检测上述两组织ING4蛋白的表达水平.根据蛋白质印迹法结果,计算肝癌组织和PCLT的ING4蛋白表达量之比,以比值0.48为界,将30例患者分为ING4低表达组(15例)和ING4高表达组(15例),分析两组患者临床病理特征、肝癌肝移植术后复发转移和预后情况.结果 免疫组化结果显示肝癌组织的ING4阳性表达率为63％ (19/30),PCLT为93％ (28/30),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).肝癌组织的ING4强阳性表达率为27％ (8/30),PCLT为63％ (19/30),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).蛋白质印迹法结果显示肝癌组织的ING4蛋白阳性率为70％ (21/30),PCLT为97％(29/30),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).PCLT的ING4蛋白表达水平高于肝癌组织(197±31比109±24,P＜0.05).30对标本中有25对ING4表达水平在肝癌组织中下调,下调率为83％.在临床病理学特征方面,ING4低表达组和ING4高表达组在肿瘤结节数目(P =0.025)、静脉浸润(P=0.035)、肝外转移(P =0.017)和分化程度(P =0.025)的差异具有统计学意义.ING4高表达组的累计术后复发转移率低于ING4低表达组,生存率高于ING4低表达组(均为P＜0.05),ING4高表达组中位生存时间长于ING4低表达组(720 d比540 d P＜0.05).结论 ING4蛋白水平在肝癌组织中表达下调,且与肝癌肝移植术后复发转移有关,影响肝癌肝移植患者预后.
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散发性结直肠癌组织中抑癌基因ING1的突变、杂合性缺失及表达
背景与目的:ING1(inhibitor of growth-1)基因被认为是一个新的抑癌基因,其过度表达使细胞生长受抑制,并诱导细胞凋亡.本研究旨在探讨ING1基因在散发性结直肠癌发生、发展中的作用和意义.方法:ING1基因的表达、突变和杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、单链构象多态性(PCR-single strain conformation polymorphism,PCR-SSCP)和微卫星标记进行检测和分析.结果:(1)p33/ING1 mRNA在癌组织和正常粘膜组织中的平均光密度比值分别为0.52和1.28,而p47/ING1 mRNA分别为0.51和1.21;在同一种组织中这两种剪接体的平均光密度比值无显著性差异(P＞0.05),但在癌组织与正常粘膜组织中均有显著性差异(P＜0.01);(2)Dukes'A、B期病例的癌组织中p33/ING1 mRNA和p47/ING1 mRNA的平均光密度比值分别为0.65和0.63,而在Dukes'C、D期者癌组织中分别为0.38和0.40,两者比较均有显著性差异(P＜0.01);(3)46例中均未发现ING1基因突变,仅有5例(10.9%)出现LOH.结论:在散发性结直肠癌中ING1基因的异常改变少见,它的表达降低可能发生在转录水平或转录后水平;ING1基因低表达可能与散发性结直肠癌的发生、进展有密切关系.
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抑癌基因ING1的研究进展
肿瘤的发生发展是由体内外多因素相互作用、多阶段和多步骤发生的一系列复杂过程,抑癌基因的功能失活和癌基因的激活是其主要原因之一[1].生长抑制因子1 (inhibitor of growth 1,ING1)基因是近年被克隆出来的一个新的抑癌基因[2].研究发现,ING1基因及其表达产物参与细胞周期的调节,它的过表达可抑制细胞生长和繁殖,促进细胞凋亡;它的低表达与肿瘤的发生、发展有关.现就其研究进展作一综述.
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生长抑制因子与乙肝表面抗原融合基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达
构建SS/HBsAg重组蛋白基因工程疫苗,为其临床医学诊断与治疗多种肿瘤和畜牧业生产中促进动物生长等应用打下基础.根据SS基因和HBsAg基因序列,分别设计引物.其基因片段经PCR扩增、克隆及序列测定证实后,分别将其插入pBluescript质粒中,再构建SS/HBsAg嵌合基因,被克隆到pPICZaA质粒中,用电击方法转入巴斯德毕赤酵母,并获得高效表达.经SDS-PAGE和Western印迹证明表达蛋白具有良好特异性,分子量约为22KD.
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GFs、INGs在植入前胚胎发育中的作用
植入前胚胎发育到4细胞阶段前,其基因主要受来源于母源的基因组调控,发育到8细胞阶段后,才开始受到胚胎源基因组转录的调控.胚胎源基因组的启动标志着早期胚胎自身转录调控的开始,该生物学过程受到许多因子的调控.该文就生长因子(GFs)、生长抑制因子(INGs)的表达及其对植入前胚胎发育的作用等研究进展作以综述.
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腺病毒介导的ING4基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖迁移的机制研究
目的:观察ING4对人脑胶质瘤细胞株U251增殖及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以Ad-INC4及腺病毒空载体转染U251细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达.用MTT试验检测ING4对于U251细胞增殖的影响,通过Boyden Chamber试验检测其对U251细胞侵袭能力的影响.并用免疫印迹方法检测NGF、TrkA的表达变化,通过pull-down试验检测活性RhoA表达.结果:U251细胞感染Ad-ING4 48 h后,RT-PCR结果显示ING4在U251中过表达,且U251细胞的增殖及迁移能力受到明显抑制.免疫印迹方法显示感染AdING4的U251细胞中TrkA和NGF的表达降低,pull-down试验结果显示活性RhoA表达降低.结论:Ad-ING4可以抑制胶质瘤细胞株U251的增殖和迁移,这一作用可能是通过抑制NGF、TrkA和活性RhoA的表达实现的.
