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ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响
目的 研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 稳定转染pEGFP-N1-ING5真核表达载体和pEGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株.将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组.采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株.ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05).结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标.
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纳米氧化铈对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用
目的 探讨纳米氧化铈(nm-CeO2)对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 建立人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为阴性对照组(等体积双蒸水)、阳性药组[九州虫草2 000 mg/(kg·次)]、nm-CeO2高、中、低剂量组[300、100、33.33 mg/(kg·次)],共5组,各组荷瘤裸鼠均经口灌胃给药,每天1次,共17d,观察各组裸鼠移植瘤生长情况,计算肿瘤体积(VT)、肿瘤生长抑制率,称量肿瘤重量,观察移植瘤组织病理变化,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end la beling,TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率.结果 与阴性对照组比较,nm-CeO2各剂量组均具有抑制人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用,并能促进瘤细胞的变性、坏死和凋亡(P＜0.05).nm-CeO2高剂量组的肿瘤生长抑制作用低于阳性药组(P＜0.05),但nm-CeO2高、中剂量组促进肿瘤细胞凋亡的作用高于阳性药组(P＜0.05).结论 nm-CeO2对人乳腺癌Beap-37细胞裸鼠皮下移植瘤具有显著的生长抑制作用.
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苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与自噬相关蛋白mTOR相关性研究
目的：探讨苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路，诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。方法苦参碱（终浓度为0、1、2mg/mL）±氯喹（chloroquine）（自噬抑制剂）处理乳腺癌Bcap-37细胞24h，运用免疫印迹（Western-blot）法检测PI3K/Akt信号通路自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、eIF4E表达。苦参碱（终浓度为0、1、2mg/mL）±BafilomycinA1（自噬抑制剂）/Rapamcin（自噬诱导剂）处理乳腺癌Bcap-37细胞24h，Western-blot法检测eIF4E蛋白的表达。结果苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k磷酸化，同时降低eIF4E蛋白表达；当苦参碱联合氯喹（CQ）作用于乳腺癌Bcap-37细胞时，则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合BafilomycinA1作用于Bcap-37细胞时，eIF4E蛋白表达同样无明显改变；苦参碱联合Rapamcin时，eIF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。结论苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路，从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。
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冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡影响的研究
目的 通过体外无菌培养乳腺癌Bcap-37细胞,观察冬凌草甲素对Bcap-37细胞的活性以及凋亡的影响,探索冬凌草甲素的抗肿瘤机制.方法 无菌培养Bcap-37细胞,冬凌草甲素浓度为0、1、2、4、8、16、32、64μg/ml,作用12、24、36、48h时,采用MMT法检测冬凌草甲素抑制Bcap-37细胞活性;冬凌草甲素浓度为8μg/ml、32μg/ml,作用24h,流式细胞术检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞凋亡的影响.结果 冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞有增殖抑制以及诱导凋亡的作用.结论 冬凌草甲素可抑制乳腺癌Bcap-37细胞的增殖以及诱导细胞凋亡,为临床治疗乳腺癌提供了新的依据.
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苦参碱促进三苯氧胺诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的机制研究
[目的]研究三苯氧胺(TAM)联合低剂量苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制及作用机制.[方法]用MTT法检测各组细胞的抑制率,克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.[结果]TAM对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,与低剂量苦参碱联合,其抑制作用明显增强.药物作用24、48、72h后,与对照组相比,TAM组的凋亡率均明显增高(P＜0.01);与TAM组相比,联合组的凋亡率均明显增高(P＜0.01).Western blot检测发现,与对照组相比,TAM组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;与TAM组相比,联合组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低.[结论]低剂量苦参碱能促进TAM对Bcap-37细胞增殖抑制作用,其作用机制与增加p53、Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关.
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金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞TLR2和IL-1β、TNF-α以及NF-kB表达的影响
目的 观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞Toll样受体2(TLR2)的表达以及对促炎性细胞因子、核因子κB (NF-κB)的影响.方法 用金黄色葡萄球菌处理Bcap-37细胞,采用RT-PCR检测TLR2 mRNA的表达,流式细胞术检测TLR2蛋白的表达,ELISA分别检测IL-1 β和TNF-α的分泌,Western blot检测NF-κB的表达变化.结果 金黄色葡萄球菌作用于Bcap-37细胞后,TLR2 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰,之后又逐渐下降(P＜0.05).IL-1β、TNF-α的表达呈现明显的时间依赖性增高(P＜0.05),IL-1β在12 h到达峰值后下降,TNF-α在16 h表达仍然很高.NF-κB的表达随着刺激时间的延长也呈现时间依赖性增高,在12 h时表达量高,14 h开始下降.结论 金黄色葡萄球菌能上调Bcap-37细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,激活Bcap-37细胞NF-κB的表达,促进IL-1β和TNF-α的分泌.
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金黄色葡萄球菌黏附到Bcap-37上皮细胞促进TLR4的表达
目的:研究金黄色葡萄球菌对乳腺上皮细胞的黏附及Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:用不同浓度的金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞,用平板活菌计数观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞的黏附作用;RT-PCR法检测金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞后TLR4 mRNA的表达变化;流式细胞术分析Bcap-37细胞表面TLR4的表达变化.结果:金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞具有显著的时间和剂量依赖性(P＜0.01),作用60 min达到饱和黏附后不再增加.金黄色葡萄球菌作用Bcap-37细胞后,TLR 4 mRNA和蛋白表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰之后又逐渐下降(P＜0.05).结论:金黄色葡萄球菌能够黏附乳腺上皮细胞,并且可以上调Bcap-37细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达.
