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消退素D1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
目的：评价消退素D1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法成年雄性SD大鼠120只，体重260～280 g，7周龄，采用随机数字表法，将其分为5组（ n＝24）：假手术组（ S组）、脑缺血再灌注组（ I∕R组）、低剂量、中剂量和高剂量消退素D1组（ LRD组、MRD组和HRD组）。采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。 LRD组、MRD组和HRD组于再灌注即刻经侧脑室分别注射0．03、0．10、0．30 nmol消退素D15μl。于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分（ NDS），然后处死大鼠，取脑组织，确定脑梗死体积，测定脑组织含水量、血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶?9（ MMP?9）表达。结果与S组比较，其它4组NDS评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量和血脑屏障通透性升高，脑组织MMP?9表达上调（ P＜0．05）；与I∕R组比较，MRD组和HRD组NDS评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量和血脑屏障通透性降低，脑组织MMP?9表达下调（ P＜0．05），LRD组上述指标差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论消退素D1可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤，其机制与下调MMP?9表达从而降低血脑屏障通透性有关。
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二十二碳六烯酸对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响
目的 评价二十二碳六烯酸对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠15只,体重250～ 300 g,8～10周龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=5):假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(I/R组)和二十二碳六烯酸组(DHA组).采用阻断肝左叶及中叶肝蒂60 min行再灌注的方法建立肝缺血再灌注损伤模型.DHA组于缺血前30 min和再灌注10 min时分别静脉注射二十二碳六烯酸4 mg/kg,S组及I/R组给予等容量溶媒1 ml.于再灌注24 h时,采集下腔静脉血样,测定血清ALT、AST活性和消退素D1浓度;取血后处死大鼠,取肝组织,采用分光光度法测定髓过氧化物酶(MPO)活性,采用实时定量PCR法测定IL-6和TNF-α的mRNA表达;HE染色,光镜下观察肝组织病理学结果.结果 与S组比较,I/R组和DHA组血清AST、ALT和消退素D1的水平升高,肝组织MPO活性、IL-6 mRNA和TNF-α mRNA的表达水平升高(P＜0.05);与I/R组比较,DHA组血清消退素D1浓度升高,肝组织MPO活性和TNF-α mRNA表达水平降低(P＜0.05),血清AST和ALT的活性差异无统计学意义(P＞0.05).I/R组和DHA组肝组织病理学结果无明显差异.结论 二十二碳六烯酸可减轻大鼠肝缺血再灌注时炎性反应,但是不足以减轻肝损伤.
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DHA调节人脑血管周细胞氧糖剥夺-复氧复糖时血管生成素表达的机制:与SSeCKS的关系
目的 评价二十二碳六烯酸(DHA)调节人脑血管周细胞(HBVPs)氧糖剥夺-复氧复糖时血管生成素(Ang)表达的机制与Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeC KS)的关系.方法 HBVPs以密度2×105个/ml分别接种于96孑板或6孔板,采用随机数字表法分为5组(n=18):正常对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、DHA组(D组)、SSeCKS基因沉默(S组)、SSeCKS基因沉默+DHA组(SD组).氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型制备方法:采用无糖-无血清培养液,置于94％N2-5％CO2-1％O2条件下缺氧缺糖24 h,再置于高糖DMEM培养基常氧环境中复氧复糖6h.D组于缺氧前lh加入DHA,终浓度40 μmol/L.S组和SD组采用siRNA进行SSeCKS基因沉默,随后SD组于缺氧前1h加入DHA,终浓度40 μmol/L.于复氧6h时,采用CCK-8法确定细胞存活率,采用ELISA法检测LDH漏出量,采用Western blot法检测SSeCKS、Ang-1和Ang-2的表达.结果 与C组比较,OGD/R组细胞存活率降低,LDH漏出量增加,SSeCKS和Ang-1表达下调,Ang-2表达上调,Ang-1/Ang-2比值降低,S组SSeCKS表达下调(P＜0.05).与OGD/R组比较,D组细胞存活率升高,LDH漏出量降低,SSeCKS和Ang-1表达上调,Ang-2表达下调,Ang-1/Ang-2比值升高(P＜0.05),SD组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与D组比较,SD组细胞存活率降低,LDH漏出量升高,SSeCKS和Ang-1表达下调,Ang-2表达上调,Ang-1/Ang-2比值降低(P＜0.05).结论 DHA增加HBVPs氧糖剥夺-复氧复糖时Ang-1/Ang-2比值的机制可能完全与上调SSeCKS表达有关.
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消退素D1对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响
目的 探讨消退素D1对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠48只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、肺缺血再灌注组(I/R组)、生理盐水组(NS组)、消退素D1组(RV组).采用夹闭左肺门45 min再灌注150 min的方法制备大鼠肺缺血再灌注损伤模型.NS组和RV组于再灌注10 min时分别注射生理盐水2 ml/kg和消退素D1 100 μg/kg.于开胸前和再灌注150 min时取股静脉血样,采用ELISA法测定血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度.再灌注150 min时取左心室动脉血样,行血气分析,计算氧合指数(OI);取血结束后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行白细胞(WBC)计数,计算中性粒细胞(PMN)比率和肺通透性指数(PPI),采用ELISA法测定BALF IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度.取肺组织,计算湿重/干重(W/D)比值,观察病理学结果,计算肺泡损伤率(IAR),采用ELISA法检测肺组织肺表面活性物质相关蛋白(SP-A)、中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)、膜联蛋白A1(ANXA1)的含量;分别采用邻连茴香胺法、DTNB显色法、黄嘌呤氧化酶法及硫代巴比妥酸法测定髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平.结果 与Sham组比较,I/R组和NS组OI降低,W/D比值、PPI、IAR、BALF WBC计数和PMN比率、血清和BALF IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10浓度、肺组织CINC-1、ANXA1、MPO和MDA水平升高,SP-A、GSH-PX和SOD水平降低(P＜0.01);与I/R组比较,RV组OI、血清和BALF IL-1O浓度、肺组织SP-A、ANXA1、GSH-PX和SOD水平升高,W/D比值、PPI、IAR、BALF WBC计数和PMN比率、血清和BALFIL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺组织CINC-1、MPO和MDA水平降低(P＜0.01),肺组织病理学损伤减轻,PMN浸润减少.结论 消退素D1可减轻大鼠肺缺血再灌注损伤.
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外源性消退素D2对大鼠非压迫性腰椎间盘突出症根性神经痛的影响
目的 评价外源性消退素D2对大鼠非压迫性腰椎间盘突出症根性神经痛的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠36只,8周龄,体重230～ 270 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(S组)、非压迫性腰椎间盘突出症根性神经痛组(P组)和外源性消退素D2组(R组).鞘内置管后3d,S组仅暴露相应手术部位;P组和R组取自体髓核组织覆盖于右侧L5背根神经节制作非压迫性腰椎间盘突出症根性神经痛模型.造模后3d内每天鞘内注射相应药物,P组注射10μl PBS溶液,R组注射10μl 1 ng/μl消退素D2溶液,给药后3组均以10μl生理盐水冲管.造模前1d和造模后1～7d每天测定术侧机械缩足反应阈(MWT).造模后第7天取术侧腰膨大段脊髓背角,用Western blot法测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光双标法检测G蛋白偶联受体18与GFAP共表达情况.结果 与S组比较,P组造模后1～7 d MWT降低,GFAP表达上调(P＜0.05);与P组比较,R组造模后3～7 d MWT升高,GFAP表达下调(P＜0.05).G蛋白偶联受体18与GFAP存在共表达.结论 外源性消退素D2可减轻大鼠非压迫性腰椎间盘突出症根性神经痛,其机制与抑制脊髓背角星形胶质细胞活化有关.
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大鼠海马神经元脂肪酸构成中长链多不饱和脂肪酸的功能及其机制
目的:观察长链多不饱和脂肪酸花生四烯酸( AA)和 /或二十二碳六烯酸( DHA)对体外培养新生大鼠海马神经元脂肪酸构成的影响. 方法:采用无血清培养液培养新生大鼠海马神经元,实验组分别在对照组的无血清培养液中添加 4 μ mol/L AA,4 μ mol/L DHA或总浓度为 4 μ mol/L、比例为 1: 2～ 16: 1的 AA和 DHA.采用毛细管气相色谱法分析神经元中脂肪酸的构成. 结果:培养液中 AA和 DHA总浓度为 4 μ mol/L、比例为 1: 2～ 16: 1,海马神经元中 AA百分含量、 AA/DHA比值与培养液中 AA和 DHA比例均呈正相关 (P均 < 0.001). 结论:培养液中海马神经元中 AA百分含量、AA/DHA比值与培养液中 AA和 DHA比例均呈正相关.
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DHA复合物对鼠移植瘤细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响
目的研究DHA复合物的抗癌机理.方法用流式细胞术研究了DHA复合物对荷瘤鼠H22细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响.结果 (1)与阴性对照组相比,DHA复合物中、高剂量组G0-G1期H22癌细胞百分比明显增加(P<0.01);DHA复合物低、中、高剂量组G0-G1期T细胞百分比明显减小(P<0.01).(2)与阴性对照组相比, HA复合物低、中、高剂量组S期H22癌细胞百分比明显减小(P<0.01),S期T细胞百分比明显增加(P<0.01).(3)与阴性对照组相比, HA复合物中剂量组G2-M期H22癌细胞百分比显著减少(P<0.01),DHA复合物低、高剂量组G2-M期H22癌细胞以及DHA复合物低、中、高剂量组G2-M期T细胞百分比均显著升高(P<0.01).(4)与阴性对照组相比,DHA复合物低、中、高剂量组H22癌细胞增殖指数(PI)明显下降(P<0.01),T细胞增殖指数明显升高(P<0.01).(5)与阴性对照组相比,DHA复合物低、中、高剂量组H22癌细胞及DHA复合物中、高剂量组T细胞凋亡率明显升高(P<0.01).结论 DHA复合物可抑制H22癌细胞的增殖,促进T淋巴细胞增殖,同时DHA复合物还可促进H22细胞、T淋巴细胞凋亡.
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注意缺陷多动障碍儿童补充DHA效果评价
目的 评价注意缺陷多动障碍(ADHD)儿童补充二十二碳-6烯酸(DHA)后的临床行为及情绪变化情况,为ADHD的防治提供依据.方法 对确诊的487例ADHD儿童补充DHA,观察补充前后儿童行为及情绪的改变.结果 治疗后儿童行为问题检出率为12.5%,远低于治疗前的37.9%(P＜0.01).6～16岁ADHD男童CBCL行为得分在补充DHA后有所改善(P＜0.05或P＜0.01).焦虑性情绪障碍筛查量表得分比较,躯体比/惊恐、分离性焦虑、广泛性焦虑在补危DHA后有改善(P值均＜0.05);而抑郁障碍自评量表得分中,仅有"对自己有信心"较补充前改善.结论 补充DHA对ADHD儿童临床症状及情绪障碍状况的改善有一定疗效.
关键词： 注意力缺陷障碍伴多动 二十二碳六烯酸类 抑郁 焦虑 儿童 -
DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究
目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制.方法:用不同浓度的DHA(0,25,50,100,200 μmol/L)分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用Bel-7402细胞48h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性.结果:不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性(均p＜0.05)；细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性(均P＜0.05),但无明显时间依赖性(均P＞0.05).不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性(均P＜0.05).结论:DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关.
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二十二碳六烯酸对人外周血树突状细胞成熟的影响
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)在体外对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟状态及免疫学功能的影响.方法 经淋巴细胞分离液(Ficoll)密度梯度离心法分离出单个核细胞,用含rhGM-CSF和rhIL-4培养液诱导5 d,获得未成熟DCs,并分为4组:未成熟组、成熟组、DHA组和饱和脂肪酸(SA)组.经DHA孵育24 h,内毒素脂多糖(LPS)作用48 h,于第8天,Wright-Giemsa染色观察各组DCs形态;流式细胞仪检测表型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DCs共刺激分子CD80、CD86及HLA-DR mRNA的表达;ELISA检测各组细胞上清液中IL-12及TNF-α的含量.结果 DHA组细胞上清液IL-12和TNF-α的含量比成熟组低(P＜0.01),而SA组与成熟组比较差异无统计学意义(P>0.05).DHA干预下平均荧光强度呈明显下调.成熟组CD80、CD86及HLA-DR mRNA相对表达量比未成熟组高(P＜0.01);DHA组比成熟组低(P＜0.01);而SA组与成熟组相比无差异(P>0.05).结论 DHA可下调DCs共刺激分子CD80、CD86及HLA-DR的表达,降低IL-12及TNF-α的释放,减弱DCs的抗原提呈能力,且可抑制DCs体外成熟.
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二十二碳六烯酸对视网膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道的激活作用
目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对视网膜动脉平滑肌细胞(RASMCs)大电导钙激活钾离子(BK)通道的激活作用.方法 传代培养RASMCs,取第6～8代细胞用于膜片钳实验.采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术,分别记录DHA浓度0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0μmol/L作用下RASMCs的BK通道开放概率(NP0).以0.0、1.0、5.0μmol/L不同浓度的DHA干预RASMCs,并以此分为对照组、低剂量组及高剂量组.采用蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测RAMSCs的BK通道中β1亚基的相对蛋白表达量.结果 DHA浓度为0.0、1 0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L时,RASMCs的BK通道NP0分别为0.044 4±0.001 2、0.081 2±0.004 2、0.209 0±0.006 1、0.310 5±0.005 3、0.4650±0.007 8、0.497 7±0.014 5.随DHA浓度的升高,BK通道NP0增加.不同DHA浓度作用下RASMCs的BK通道NP0比较,差异有统计学意义(F=2.621,P＜0.05).Western blot检测结果显示,对照组、低剂量组、高剂量组RASMCs的BK通道中β1亚基的相对蛋白表达量比较,差异无统计学意义(F=11.657,P＞0.05).结论 DHA可直接激活RASMCs的BK通道.
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二十二碳六烯酸对严重烫伤大鼠血液与肺组织炎症相关因子的影响
目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对严重烫伤大鼠血清TNF-α、IL-6、白三烯B4(LTB4)和肺组织NF-κB表达的影响. 方法 取160只SD大鼠,按随机数字表法分为假伤组、假伤+DHA组、烫伤组、烫伤+DHA组,每组40只.前2组大鼠模拟致伤,后2组大鼠背部制成30％ TBSAⅢ度烫伤.伤后5 min,假伤+DHA组和烫伤+DHA组大鼠经尾静脉注射0.5 mg/mL DHA溶液1 mL/kg,假伤组和烫伤组大鼠注射生理盐水1 mL/kg.伤后3、6、12、24、48 h,各组分别取8只大鼠收集腹主动脉血及肺组织,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、LTB4含量,蛋白质印迹法检测肺组织NF-κB p65蛋白表达.对数据行析因设计方差分析、LSD-t检验. 结果 (1)假伤组大鼠伤后各时相点血清TNF-α、IL-6含量与假伤+DHA组相近(tTNF-α值为0.223 ～0.947、tIL.值为0.767～2.084,P值均大于0.05),烫伤组与烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点血清TNF-α、IL-6含量明显高于假伤组(tTNFα值为11.800～40.357、tIL-6值为10.334～ 39.321,P值均小于0.01),烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点血清TNF-α、IL-6含量明显低于烫伤组(tTNF-α值为-17.643～-8.331、tIL-6值为-21.596～-6.332,P值均小于0.01).烫伤组、烫伤+DHA组大鼠血清TNF-α、IL-6含量均呈现先增高后降低的趋势,于伤后12 h达峰值,前组峰值分别为(360.4 ±13.2)、(306.8±7.2) pg/mL,后组峰值则分别为(265.4 ±12.3)、(230.5±2.2) pg/mL.(2)假伤组大鼠伤后各时相点血清LTB4含量与假伤+DHA组相近(t值为0.787 ～1.096,P值均大于0.05),烫伤组与烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点血清LTB4含量明显高于假伤组(t值为7.501 ～ 38.962,P值均小于0.01),烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点血清LTB4含量显著低于烫伤组(t值为-19.244～-2.532,P值均小于0.01).烫伤组、烫伤+DHA组大鼠血清LTB4含量均呈现先增高后降低的趋势,于伤后12h达峰值,分别为(4.59 ±0.29)、(2.85±0.32) ng/mL.(3)假伤组大鼠伤后各时相点肺组织NF-κB p65蛋白表达量与假伤+DHA组相近(t值为0.847 ～ 1.256,P值均大于0.05),烫伤组与烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点肺组织NF-κBp65蛋白表达量明显高于假伤组(t值为15.167～ 98.074,P值均小于0.01),烫伤+DHA组大鼠伤后各时相点肺组织NF-κB p65蛋白表达量明显低于烫伤组(t值为-37.190 ～-14.415,P值均小于0.01).烫伤组、烫伤+DHA组大鼠NF-κB p65蛋白表达量均呈现先增高后降低的趋势,于伤后12h达峰值,分别为4.46 ±0.12、2.94 ±0.21. 结论 对严重烫伤大鼠肠外补给DHA,可以降低其血清TNF-α、IL-6、LTB4含量以及肺组织NF-κB表达量,从而减轻机体炎症反应.
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二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸与小鼠攻击行为的相关性
目的 研究小鼠脑内二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid,DHA)含量对小鼠攻击行为的影响.方法 将雄性昆明小鼠72只随机分为对照组、鱼油组、辛伐他汀组和攻击参照组,每组18只.前3组严格隔离饲养,分别灌服生理盐水、深海鱼油和辛伐他汀3个月.在干预前及干预后对小鼠的攻击潜伏期、摇尾次数、攻击次数、攻击时间进行观测.在干预结束后利用气相色谱-质谱联用法定量检测小鼠脑组织中EPA和DHA的含量.攻击参照组仅作攻击性评估.结果 (1)干预前,各组小鼠的4项指标组间差异没有统计学意义,而干预后,各观测指标组间差异具有统计学意义(P＜0.05).(2)干预后,EPA和DHA的含量在鱼油组小鼠脑中均高,在辛伐他汀组均低.(3)小鼠EPA的含量与干预前、后4项指标的改变均呈负相关(P＜0.05),DHA含量与干预前、后摇尾次数和攻击次数的改变呈负相关(P＜0.05).结论 EPA和DHA含量与小鼠由应激所产生的攻击行为具有一定的因果关系.
