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导致急性胃肠炎暴发的诺如病毒基因亚型鉴定
2008年10月,河北省承德市某中学暴发急性肠胃炎疫情,经ELISA检测证实为诺如病毒感染所致,为进一步确定导致此次急性肠胃炎暴发的诺如病毒亚型,笔者进行了如下检测.一、材料与方法1.材料:收集河北省承德市腹泻暴发时患者粪便标本,共21份,其中6份诺如病毒抗体阳性,取其中2份粪便标本,进一步确定病毒亚型.2.试剂与仪器:QIAamp Viral RNA Kit试剂盒购自德国Qiagen公司;反转录试剂盒、DNA片段回收试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司;K4575-01 TOPO克隆试剂盒购自美国Invitrogen公司:9700 PCR扩增仪购自美国AB公司.
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实时荧光PCR影响因素分析
实时荧光PCR检测仪一般都是采用从Eppendorf(EP)管管盖上射入激发光和检测荧光,因此EP管管盖透光性的好坏对检测荧光有很大的影响,从而影响检测结果.对于特定的荧光PCR试剂,在特定的实时荧光PCR检测仪上检测,变性时间和退出时间的改变,将会影响到扩增的效率,从而影响检测结果.
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补肾益精方对ODF、OPG、RANK mRNA表达水平的影响
以往研究表明,补肾益精方可抑制体外培养破骨细胞的骨吸收功能[1],本研究进一步探讨这一作用可能的分子机制.一、材料和方法1.主要试剂与仪器:Medium 199培养基、胎牛血清、TRIzol、逆转录酶为Gibco BRL产品,Taq DNA聚合酶为PE公司产品.9600型PCR扩增仪,MTDS-B显微影像分析系统.2.含药血清和象牙薄片制备:方法同文献[1].3.细胞分离与培养:取4周龄C57BL/6J小鼠,18只,雌雄各半.细胞分离与培养方法同文献[1].于第4天换为含不同组别含药血清的培养液,每组4孔,24h后终止培养.
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应用双重式聚合酶链反应技术检测鼠疫菌的探讨
聚合酶链反应(PCR)是20世纪80年代发展起来的分子生物学技术.随着Taq酶的应用和自动化扩增仪的发展,PCR技术迅速渗透到生命科学的各个领域.
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试用扩增仪裂解血清标本
HBV-DNA的PCR检测中一般厂家的试剂盒说明书上标本的裂解处理都是在沸水中煮沸15 min后高速离心,但是无专门配置的煮沸装置,在煮沸过程中离心管盖子容易冲开而进水,经常返工,操作很不方便.笔者试用PCR扩增仪裂解血清标本,结果令人满意,现报告如下.
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改良人脱细胞真皮基质对成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响
主要试剂和仪器:hoechst 33258购自美国Sigma公司,鼠抗人波形蛋白抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购自大连宝生物工程有限公司,β肌动蛋白、Ⅰ型前胶原引物购自上海博亚生物技术有限公司.IX71型荧光显微镜购自日本Olympus公司,PCR扩增仪购自德国Eppendorf公司.
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全自动化学发光分析仪及核酸扩增仪检测乙肝标志物的应用
目的：探讨全自动化学发光分析仪及核酸扩增仪检测乙肝标志物的临床应用。方法：选择2235例住院及门诊收治的肝功能异常病例，分别用化学发光方法检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)，用实时荧光聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测乙肝病毒基因(HBV-DNA)含量，并对结果进行分析。每位患者检测HBsAg与HBV-DNA均采用同一份标本。结果：全部受检标本中，化学发光方法检测HBsAg阳性率为61.34%，显著高于FQ-PCR方法检测阳性率(48.59%)，差异有统计学意义(x2=73.41，P＜0.01)。将化学发光检测HBsAg的结果分成强阳性、弱阳性和阴性3组，不同组间FQ-PCR检测HBV-DNA的阳性率显著不同，差异有统计学意义(x2=1863.60，P＜0.01)，强阳性组HBV-DNA阳性率为97.31%，显著高于弱阳性组，差异有统计学意义(x2=966.90，P＜0.01)。结论：全自动化学发光分析仪所采用的化学发光方法对筛查乙肝病毒感染效果较好，而扩增仪所采用的FQ-PCR方法对检测乙肝病毒复制及疗效的监测效果更好，二者联合检测可提高乙肝患者的检出率并可对乙肝患者的病情及疗效作出准确判断。
关键词： 全自动化学发光仪 聚合酶链式反应 扩增仪 乙肝表面抗原 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
云南汉族人群11个Y-STR基因座单倍型分布频率
本文选用Powerpolex(R)Y系统(Promega公司)包含的DYS391、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ、DYS438、DYS437、DYS19、DYS392、DYS393、DYS390和DYS385共11个Y-STR基因座,采用9700型扩增仪(ABI公司)对201名云南汉族无关男性个体进行群体调查,获取该群体Y-STR单倍型分布频率,现报道如下.
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两种扩增仪对联合毛细管电泳技术的聚合酶链式反应的影响
目的 使用两种扩增仪进行常规扩增和毛细管电泳,观察两种扩增仪对结果的影响以及有何不同.方法 运用PowerPlex试剂盒对DNA在Applied Biosystems 9700和Hema 9700两种扩增仪上进行扩增,扩增包括对血卡进行直接扩增和对提取后的DNA进行扩增,然后在Applied Biosystems 3130XL上进行毛细管电泳检测;使用同一DNA进行5次重复试验进行扩增仪的稳定性检测;使用7种非人样本DNA进行种属特异性检测;运用不同稀释度的2800阳性标准品进行灵敏度检测;对使用两种扩增仪扩增检测后的所有结果进行分析、讨论和评价.结果 使用两种扩增仪进行扩增检测后,其分型结果在两种扩增仪之间没有明显差别,其分型结果均稳定准确且在两种扩增仪上呈现一致性,种属特异性检测结果一致,灵敏度检测结果一致.结论两种扩增仪在进行常规扩增检测时,其结果在两种扩增仪之间没有明显差别,其结果呈现出一致性,两种扩增仪均可应用于常规扩增.
