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塞来昔布对人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用
目的 观察塞来昔布对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用,初步阐释塞来昔布治疗骨关节炎的分子作用机制.方法 通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养.倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响.塞来昔布混悬液干预共培养体系,采用Western blot方法检测塞来昔布对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测塞来昔布对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响.结果 β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养.随着培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低.塞来昔布干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P＜0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达与正常对照相比明显升高(P＜0.01).结论 滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制.塞来昔布可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关.塞来昔布可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达.塞来昔布可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎.
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黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用
目的 观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制.方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养.倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响.黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7 、CTX-Ⅱ 、COMP表达的影响.结果 β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养.随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低.黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P＜ 0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7 、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P＜0.01).结论 滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制.黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关.黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达.黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎.
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大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养
目的 评价脱细胞脊髓支架在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养中的作用,探索佳接种浓度.方法 分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs,诱导BMSCs向神经元样细胞分化.制备脱细胞脊髓支架,将第3代BMSCs同脱细胞脊髓支架共培养,MTT法检测细胞增殖活性,比较与普通培养的差异；取第3代BMSCs以不同浓度[(0.5、1、2、3、4)×106/mL]接种于支架(脊髓支架修整0.5 cm小段),检测细胞在支架上的粘附率及上架细胞数,建立接种浓度与细胞粘附率、上架细胞数的关系回归方程；扫描电镜观察脱细胞脊髓支架形态以及细胞与支架的粘附情况.结果 成功实现BMSCs的分离及培养,BMSCs流式鉴定CD29、CD90阳性表达,向神经元诱导胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)呈阳性表达；与普通培养相比,BMSCs在支架上细胞增殖活力显著提高(P＜0.05)；细胞与支架的粘附率在接种浓度为2×106/mL高,达到(79.6±2.7)％,单位体积上架细胞数达到(1.364±0.047)×106/cm3；扫描电镜观察支架空间结构良好,细胞与支架粘附良好,共培养第3天较第1天细胞数量明显增加.结论 脱细胞脊髓支架具有多通道的空间结构,适合BMSCs粘附、存活、增殖,该支架是良好的天然脊髓组织工程材料.当粘附率及细胞上架数基本达到大时的佳接种浓度为2×106/mL.
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急性白血病骨髓基质对残留白血病形成作用的实验研究
微小残留病是缓解后白血病复发的根源,极大地制约了白血病的终疗效.本研究采用Dexter型骨髓培养体系形成骨髓基质细胞贴壁层,接种HL-60细胞共培养,用去甲氧基柔红霉素(IDA)处理后,动态观察白血病骨髓基质细胞体外生长特点,检测基质细胞Fn、VCAM-1及培养上清中IL-6、TNF-α表达水平,探讨急性白血病骨髓基质对残留白血病形成的作用机制.
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骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养在组织工程化软骨中的研究进展
关节软骨几乎不能自我修复,而组织工程的发展为关节软骨的修复提供了可能,但目前没有任何种子细胞能完全满足组织工程化软骨的要求.骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养作为种子细胞,是目前组织工程研究的热点,现就骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养研究现状作一综述.
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人子宫内膜和子宫内膜异位症患者在位内膜细胞培养及形态
子宫内膜异位症是指有生长增殖能力的内膜组织或细胞出现在子宫腔以外种植生长而引起的临床症状,其病理形态多样,侵袭广泛,具有类似恶性肿瘤样的生物学特性,严重影响患者的生活质量.子宫内膜异位症病因复杂,发病机制尚不完全清楚.子宫内膜异位症的发生与在位内膜的生理特性密切相关[1],子宫内膜异位症在位内膜细胞与正常子宫内膜细胞在黏附[2]、凋亡[3]、免疫[4]、血管生成[5]等多方面存在差异,推测可能与子宫内膜异位症的发生相关[6].
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人脂肪来源间充质干细胞促进Matrigel培养内皮细胞血管形成
目的:通过体外细胞学研究(共培养体系建立)直观表现脂肪干细胞(Adipose derived stem cells,ADSCs)体外进血管形成能力,阐述脂肪干细胞作为辅助细胞通过促进早期血供建立而提高移植脂肪存活率的可能机制.方法:临床通过Coleman法抽吸成人大腿或腹部浅层脂肪,并通过经典方法培养获取ADSCs.对ADSCs进行形态学、表面分子标记物及多向分化等生物学特性鉴定,并通过Matrigel培养脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)管腔样结构形成实验探讨ADSCs体外促血管形成能力,说明ADSCs促进血管新生及移植物早期血供建立的潜力.结果:ADSCs/HUVECs共培养体系可于体外促进内皮细胞形成血管腔样结构,提高早期血管新生.结论:通过共培养体系模拟提示ADSCs体外具备促血管形成的能力,具有促进早期血供建立而提高移植物存活的潜力,为临床细胞辅助脂肪移植提高存活率的可能机制.
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黑素细胞与角质形成细胞共培养的应用进展
自1988年Halaban首次成功地建立黑素细胞(Melanocyte,MC)和角质形成细胞(Keratinocyte,KC)体外共培养以来,因其能较好地模拟皮肤的生理状况而被众多学者相继采用、改进,并进行了一系列研究,包括MC和KC的相互作用、色素的转移和分布、移植治疗白癜风以及筛选和验证药物等各个方面.现将有关问题综述如下.
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BMSC-肝细胞共培养上清治疗大鼠急性肝衰竭疗效观察
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bonemarrow mesenchymal stemcells,BMSC)-肝细胞共培养上清治疗大鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)的疗效,为其临床应用提供实验依据.方法 分别利用肝细胞、BMSC、BMSC-肝细胞培养上清治疗腹腔注射D-氨基半乳糖胺(D-gal)诱导的大鼠ALF模型,观察各治疗组动物的1周存活率,肝功能和肝组织病理改变.结果 肝细胞、BMSC及两者共培养上清治疗组大鼠存活率显著高于对照组(P＜0.01),其中共培养上清治疗组大鼠存活率高达80％；各治疗组ALT、AST、TBIL较治疗前均显著降低(P＜0.01),共培养上清治疗组下降明显；各治疗组肝脏病理组织学损害明显减轻,对照组损害加重.结论 BMSC-肝细胞共培养上清能更有效的救治大鼠ALF模型,有望为ALF的治疗提供了新的治疗途径.
