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量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的定位及对其超微结构的影响
目的 观察体外实验量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布和对其超微结构的影响.方法 利用量子点与小鼠腹腔巨噬细胞体外共孵育和电子显微镜技术,观察量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布及对其超微结构的影响.结果 透射电镜下,量子点被小鼠腹腔巨噬细胞内吞入细胞质内,形成单位膜包被的空泡样结构.扫描电镜下,可见与量子点体外共孵育的小鼠腹腔巨噬细胞的表面有较多的片状细胞突起.结论 量子点可使巨噬细胞活化,并使其表面突起增多;量子点被巨噬细胞内吞后,分布在细胞质内,并形成单位膜包被的空泡样结构.
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体外共培养双份脐血CD34+细胞对各自归巢相关分子表达的影响
本研究探讨脐血CD34+细胞体外混合培养对彼此归巢相关分子表达的影响.从正常人骨髓中分离扩增间充质干细胞,富集传代,加速器照射(12Gy)后作为滋养层细胞,将免疫磁珠分选纯化的两份脐血CD34+细胞混合接种到其表面(其中1份CD34+细胞用CFSE标记),观察各自归巢相关分子(黏附分子)表达的变化.结果表明,脐血CD34+细胞分选富集的纯度为(98.25±0.93)%,实验组在共培养6天后,两份脐血CD34+细胞的比例分别降为(60.4±6.32)%和(60.2±5.12)%,但与对照组比较无统计学差异;实验组各份CD34+细胞的CD44,CD62L,CD184以及CD26的阳性率较培养前均无显著变化.而CD162表达显著下降.CD54在培养3天后有所上升,但培养6天后下降至培养前水平,与对照组比较无统计学差异.结论:将两份脐血的CD34+细胞体外混合培养对彼此归巢相关分子并无明显影响.
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幽门螺杆菌和非甾体消炎药对胃上皮细胞动力学的影响
目的:观察幽门螺杆菌(Hpylori)和非甾体消炎药(NSAID)对胃上皮细胞增生凋亡的影响.方法:胃癌细胞株AGS与H pylori和/或消炎痛,阿司匹林体外共培养,通过MTT比色法,增生细胞核抗原(PCNA)的Western Blotting检测技术,观察细胞增生青况,FITCAnnexin-V/PI双染色流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳,透射电镜方法等检测细胞凋亡.结果:MTT比色法和蛋白质印迹检测细胞PCNA表达结果表明细胞毒素相关基因A(CagA)阳性的H pylori菌株NCTC11637能够促进细胞增生,此外,低密度(3.2×107-4×109CFU/L)NCTC11637能促进细胞的增生,而高浓度(＞2×1010CFU/L)则抑制细胞的增生.消炎痛和阿司匹林能抑制细胞的活力.当AGS细胞与H pylori和NSAID共同孵育时,细胞的生长亦明显受到抑制.FITC-AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测表明消炎痛和阿司匹林可诱导细胞凋亡明显增强,而Hpylori组则未见凋亡的增强,当二者共同作用于AGS细胞时,细胞凋亡率明显升高,但与非甾体消炎药单独作用组相比,则有所下降.透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳进一步证实了FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测的结果.结论:CagA阳性的Hpylori更加容易促进胃上皮细胞的增生.H pylori对细胞生长的影响与H pylori的密度有关.Hpylori和NSAID间的作用是相互拮抗的.
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角质形成细胞和黑素细胞体外共培养体系的建立
目的：构建角质形成细胞和黑素细胞体外共培养模型。方法胰酶消化包皮的表皮作为细胞来源，获取黑素细胞和角质形成细胞。结果角质形成细胞与黑素细胞混合培养5天后，细胞培养基逐渐变成浅灰色，再继续培养，培养基的颜色加深，细胞生长状态良好。结论成功构建了角质形成细胞与黑素细胞体外共培养模型，为色素问题的进一步研究奠定了基础。
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肝细胞与非实质细胞体外共培养的研究进展
近年来,生物人工肝(bioartificial liver,BAL.)支持系统已成为延长急性肝功能衰竭患者生命,并向肝移植手术过渡的一种替代性治疗手段.
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子宫内膜异位症子宫内膜细胞对鼠胚体外早期发育的影响
子宫内膜异位症(EMs,内异症)与妇女不育有着密切的关系,约有25%～4O%的不孕妇女患内异症,而内异症患者中,不育症约占3O%～40%.为探讨子宫内膜异位症患者的子宫内膜是否对胚胎的发育产生不利的影响,本实验将两细胞期鼠胚与内异症妇女子宫内膜细胞体外共培养,观察其对鼠胚早期发育的影响.
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睾丸sertoli细胞免疫抑制及营养作用的研究进展
睾丸支持细胞( sertoli cell,SC)的结构首先由意大利组织学家Enricol sertoli在1865年进行了描述,多年以来,SC作为生精细胞的支架,为生精细胞提供免疫屏障及营养支持的作用已经得到人们的认可,随着免疫学及分子生物学的不断深入研究,各种免疫特殊组织,如睾丸、眼前房、脑、胎盘滋养层等,受到人们的广泛关注,特别是近代人们通过对凋亡机制和各种信号传导通路的研究,加深了对SC细胞特殊免疫状态及营养作用在分子水平的认识,近研究发现SC免疫豁免的功能和营养作用可应用与某些细胞的培养与移植,SC可以延长某些移植物的存活时间及功能状态,同时SC还可以和某些细胞在体外共培养,改善细胞的生存状态和功能.
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X线照射后体外共培养内皮细胞与星形胶质细胞Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF表达变化及意义
目的：观察 X 线照射体外共培养的内皮细胞与星形胶质细胞后血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）、受体Tie-2及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化，探讨VEGF、Ang-1、Ang-2及Tie-2和放射性脑损伤（ RBI）的关系。方法利用Transwell培养板，将小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3与星形胶质细胞共培养。以5、10、20、30 Gy剂量的X线照射共培养的内皮细胞与星形胶质细胞后继续培养24 h，并设正常对照组即未照射组。 Western印迹法检测细胞VEGF、Ang-1、Ang-2及Tie-2蛋白的表达情况。结果5、10、20、30 Gy剂量组VEGF的蛋白表达均高于对照组[（1.71±0.11）、（2.03±0.05）、（2.20±0.06）、（2.19±0.08）比（1.26±0.10），P＜0.05]；5、10、20、30 Gy剂量组Ang-1的蛋白表达均低于对照组[（2.27±0.07）、（2.28±0.06）、（2.01±0.05）、（1.54±0.08）比（2.46±0.04），P＜0.05]；5、10、20、30 Gy剂量组Tie-2的蛋白表达均低于对照组[（2.40±0.10）、（2.47±0.06）、（1.05±0.09）、（1.00±0.08）比（4.80±0.07），P＜0.05]；5 Gy和10 Gy剂量组Ang-2的蛋白表达均高于对照组[（2.10±0.07）、（2.43±0.08）比（1.69±0.05）， P＜0.05]；20 Gy和30 Gy剂量组 Ang-2的蛋白表达均低于对照组[（1.12±0.10）、（1.21±0.04）比（1.69±0.05），P＜0.05]。结论 X线能够诱导体外共培养的内皮细胞与星形胶质细胞VEGF、Ang-1、Ang-2及Tie-2的蛋白表达水平发生不同的改变，而这些蛋白水平的不同改变可能与RBI的微血管损伤相关。
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骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的研究进展
骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓内的一种多能干结缔组织前体细胞,具有多向分化潜能,也是有可能成为软骨组织工程的种子细胞来源.本文从BMSCs诱导成软骨细胞的方法和研究进展做一综述,如体外细胞团聚集诱导培养、体外单层细胞诱导培养、体外三维支架环境中诱导培养、体内软骨微环境诱导培养、和软骨细胞体外共培养诱导以及基因转染诱导培养等,这也是软骨组织工程研究中不可缺少的重要环节.
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生物活性材料Col-Tgel对人组织干细胞的作用
背景:虽然传统的人干细胞二维平面培养体系操作简便,但并不能真正模拟体内的三维生理微环境,不利于进行人干细胞生物学行为研究.目的:为构建一种可为细胞生长增殖提供类似于体内生理环境的三维培养体系,观察生物材料Col-Tgel对人造血干细胞和人间充质干细胞生物活性的影响.方法:①体外共培养实验:三维培养组,将绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞与人脐带 CD34+细胞直接接触共培养于生物材料Col-Tgel中;单独培养组,将人脐血CD34+细胞培养于生物材料Col-Tgel中;二维培养组,将绿色萤光蛋白标记的人间充质干细胞与人脐血CD34+细胞共培养于transwell小室;对照组,常规培养人脐血CD34+细胞.培养3 d后,流式细胞仪检测各组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞比例,同时对直接接触培养组进行原位免疫荧光染色;②体内移植实验:采用X射线照射NOD/SCID小鼠,照射后24 h分2组治疗,实验组于胫骨骨髓腔移植绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞-生物材料Col-Tgel溶液,对照组移植绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞-PBS溶液,移植3 d后进行移植侧胫骨标本双光子/共聚焦显微镜检测.结果与结论:①体外实验:三维培养组 CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞扩增倍数为二维培养组的2.8倍,说明在生物材料Col-Tgel中培养的间充质干细胞促进了CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞的扩增;三维培养组CD34+CD38-CD45RA-CD90+细胞扩增倍数较单独培养组增加4.5倍,较对照组增加1.5倍;免疫荧光染色显示,人间充质干细胞与人脐血CD34+细胞可在生物材料Col-Tgel中存活;②体内实验显示,两组均可见存活的人间充质干细胞;③结果表明,生物材料Col-Tgel可为人干细胞生长及增殖提供类似于体内微环境的三维体系.
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体外共培养条件下种植窗期子宫内膜与胚胎的相互作用
目的：探讨体外共培养条件下种植窗期子宫内膜与胚胎的相互作用。方法：选择2014年6月至2015年6月在郑州大学第二附属医院生殖中心取卵后因有卵巢过度刺激综合征倾向取消移植的20例患者，于取卵后第3天取其子宫内膜，和胚胎组成共培养组（A组），以单独内膜组（B组）和单独胚胎组（C组）作为对照组，采用RT-PCR法分别于（取卵后）第3、4、5、6、7天检测共培养组和单独内膜组LIF mRNA和IGF mRNA的表达水平，并在显微镜下观察共培养组和单独胚胎组的胚胎生长情况。结果：共培养组LIF mRNA和IGF mRNA表达要高于单独内膜组，且在种植窗期达到高，差异有统计学意义（P ＜0．05）。共培养组胚胎生长发育要优于单独胚胎组。结论：共培养对胚胎发育有积极的支持作用，使子宫内膜容受性提高，同时提高胚胎质量，要优于单独培养。
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体外共培养人牙髓干细胞对人牙囊干细胞增殖、成骨分化的作用
目的 通过体外建立人牙囊干细胞(human dental follicle stem cells,HDFSCs)和人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)共培养体系,研究HDPSCs对HDFSCs增殖、成骨分化的作用.方法 ①利用改良的组织块-消化联合法、免疫组化方法、流式细胞术以及多向诱导方法对HDFSCs和HDPSCs进行分离、培养、鉴定;②采用0.4μm孔径的Transwell小室构建HDFSCs和HDPSCs体外共培养体系;③CCK-8测定HDFSCs增殖活性的变化;④与HDPSCs体外共培养1周,qRT-PCR检测HDFSCs几个标志性成骨基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、人类相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)以及Ⅰ型胶原(collagen type 1,Col-1)的表达情况.结果 ①成功分离、培养、鉴定HDFSCs和HDPSCs;②从第4天开始,共培养组HDFSCs的增殖活力明显高于对照组(P＜0.05);③与对照组相比,共培养组ALP、Runx2、OPN、BSP、C0l-1的相对表达量均明显增高(P＜0.05).结论 与HDPSCs共培养能增强HDFSCs增殖活力及成骨分化.
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黑素细胞与角质形成细胞共培养的应用进展
自1988年Halaban首次成功地建立黑素细胞(Melanocyte,MC)和角质形成细胞(Keratinocyte,KC)体外共培养以来,因其能较好地模拟皮肤的生理状况而被众多学者相继采用、改进,并进行了一系列研究,包括MC和KC的相互作用、色素的转移和分布、移植治疗白癜风以及筛选和验证药物等各个方面.现将有关问题综述如下.
