首页 > 文献资料
-
上皮-间质转化在胃癌发生、发展中的作用
胚胎发育过程中经上皮-间质转化（ EMT）和间质-上皮转化后终形成各类组织器官，目前研究多集中于EMT与肿瘤侵袭转移的关系。本文对EMT与胃炎、胃黏膜屏障、胃癌启动、侵袭转移、耐药、免疫逃逸之间的关系作一综述，探讨其在胃癌发生、发展中的作用，从而为胃癌病理机制的研究以及胃癌的防治提供新思路。
-
上皮-间质转化在结直肠癌中的研究进展
结直肠癌是常见的恶性肿瘤，侵袭转移是导致患者死亡的主要原因。上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞转变为间质表型的过程，参与包括结直肠癌在内多种肿瘤的发生、发展、侵袭和转移，并与肿瘤化疗耐药密切相关。EMT 的发生涉及多条信号通路，但其机制尚未完全阐明。本文就 EMT 机制及其在结直肠癌中的研究进展作一综述。
-
CC趋化因子受体4过表达对甲状腺未分化癌细胞转移的影响
目的:探讨CC趋化因子受体4(CC chemokine receptor 4,CCR4)对甲状腺未分化癌增殖和侵袭、转移能力的影响.方法:构建过表达CCR4的甲状腺未分化癌细胞株KHM-5M和C643,用CCK-8法检测CCR4对细胞增殖能力的影响;用transwell小室检测CCR4对甲状腺未分化癌侵袭、转移能力的影响.Western印迹检测CCR4对上皮-间质转化(EMT)相关的E-钙黏蛋白、波形蛋白和Snail蛋白表达的影响.结果:甲状腺未分化癌KHM-5M和C643细胞株转染CCR4慢病毒后,CCR4蛋白的表达量显著升高.与对照组相比,过表达CCR4对甲状腺未分化癌细胞的增殖能力无显著影响,而侵袭、转移能力明显升高.过表达CCR4后,E-钙黏蛋白表达显著下降,波形蛋白和Snail蛋白表达显著升高.结论:CCR4通过EMT促进甲状腺未分化癌侵袭、转移,但对甲状腺未分化癌增殖能力无显著影响.
-
Raptor调节前列腺癌上皮-间质转化机制研究
目的 探讨Raptor调节前列腺癌上皮-间质转化(EMT)作用及机制研究.方法 构建Raptor-shRNA慢病毒载体并筛选具有稳定转染Raptor-shRNA DU145细胞株,应用transwell观察沉默Raptor后DU145细胞株侵袭力的变化,Western Blot观察沉默Raptor后DU145细胞E-cadherin,β-catenin,N-cadherin和vimentin表达,以及RhoA活性表达.结果 成功构建Raptor-shRNA DU145细胞株;transwell检测稳定转染Raptor-shRNA后DU145细胞侵袭力下降(P＜0.01);Western Blot检测显示该细胞株E-cadherin和β-catenin表达下降,N-cadherin和vimentin表达升高,RhoA活性表达下降.结论 Raptor与前列腺癌细胞EMT的发生有关,其作用可能是通过RhoA信号途径.
-
一种结肠癌干细胞上皮-间质转化分层模型的建立和验证
背景与目的:肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)是肿瘤中具有干细胞特性的一类细胞,同时具有自我更新能力及多向分化潜能.CSC在肿瘤转移过程中起着重要作用.上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与恶性肿瘤浸润、转移及与肿瘤患者预后紧密联系.本研究以CSC是否经EMT为标准,建立一种新型结肠癌干细胞EMT分层模型,以评价不同活性物质对不同分型的结肠癌干细胞表型的影响.并用当下研究成熟的抑癌基因miR-139-5p及其靶向抑制的转录因子4(transcription factor 4,TCF4)蛋白验证上述模型的可行性,为临床研究提供理论依据.方法:以CD44和细胞上皮黏附分子/上皮特异性抗原(epithelial cell adhesion molecule/epithelial specific antigen,EpCAM/ESA)为结肠癌干细胞标志物,采用流式细胞术分选皮下移植瘤中CD44+ESA+、CD44+ESA-细胞亚群和转移瘤中CD44+ESA+、CD44+ESA-细胞亚群,分别命名为Epi-S、Epi-P、pEMT-S和pEMT-P,亲本细胞株HCT116作为后续实验的阴性对照;验证分选后不同细胞亚群的多药耐药性、克隆形成能力以及干性转录因子SOX2、OCT4和EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达情况;检测miR-139-5p过表达、TCF4敲低对Epi-P和pEMT-P以及TCF4过表达对Epi-S和pEMT-S CSC侵袭能力与EMT标志分子E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白的影响.结果:相较于HCT116亲本细胞株,Epi-S、Epi-P、pEMT-S和pEMT-P共4种CSC分型均对奥沙利铂(oxaliplatin,LOHP)和氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)产生了不同程度的抗性;干性相关转录因子OCT4和SOX2在4种CSC分型中表达均升高,与亲本细胞株相比,差异有统计学意义(P<0.05);上皮相关标志物E-cadherin、N-cadherin和vimentin在4种CSC分型中表达均升高,与亲本细胞株相比,差异有统计学意义(P<0.05);过表达miR-139-5p或敲低TCF4均能抑制Epi-P和pEMT-P结肠癌干细胞亚型的侵袭能力(P<0.01);在表型稳定未经历EMT的上皮亚系Epi-S中,过表达TCF4能够显著促进其侵袭能力(P<0.01);Epi-P和pEMT-P中过表达miR-139-5p和敲低TCF4,上皮标志物E-cadherin表达增加,间充质标志物N-cadherin和vimentin表达下降.结论:以CD44和ESA为结肠癌干细胞标志物分选出的4种分型具有不同表型可塑性,该模型可用来评价不同生物活性物质对结肠癌干细胞上皮-间质转化的影响.
-
RORα高表达对二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响
背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗肿瘤的作用.该研究在DADS上调人胃癌MGC803细胞RORα的基础上,观察DADS与RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响.方法:相差显微镜观察MGC803细胞形态的影响.采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT相关分子表达.裸鼠实验检测对移植瘤生长的影响.结果:相差显微镜显示,DADS组与RORα高表达组细胞大小较MGC803细胞一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞少见,异型性降低.RORα高表达加DADS后,上述改变更为明显.Western blot检测结果显示,DADS组与RORα高表达组Snail蛋白表达明显下调,DADS+RORα高表达组更明显(P<0.05).RT-PCR与Western blot检测显示,DADS与RORα高表达可明显下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA与蛋白表达,DADS+RORα高表达组更为显著(P<0.05).免疫荧光显示,DADS组与RORα高表达组细胞Snail与Vimentin表达较对照组明显减弱和E-cadherin表达显著增强,DADS+RORα高表达组更为显著,与Western blot结果一致.裸鼠实验显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),并且,移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率分别为15.07%、26.55%与49.27%(P<0.05).免疫组织化学检测结果显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组较对照组的Ki-67、CD34与Vimentin表达均明显降低,E-cadherin表达明显增强.结论:RORα高表达可增强DADS体内外抑制人胃癌细胞EMT的作用.
-
肝细胞癌组织中FoxP3+调节性T细胞与上皮间质转化和患者预后的关系
背景与目的:肿瘤微环境中的调节性T细胞(tumor-infiltrating regulatory T cells,Tregs)在肿瘤的发生、发展中起重要作用,上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是恶性肿瘤获得转移和侵袭能力的重要生物学过程,但对肝癌浸润性Tregs与EMT之间的关系尚不清楚,本研究探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织浸润的Tregs与EMT的关系及其临床意义.方法:采用免疫组化和核酸原位杂交技术检测74例原发性HCC和20例癌旁组织中Tregs标志物FoxP3和EMT标志物(E-cadherin、Vimentin蛋白和Snail mRNA)的表达.结果:HCC组织中每高倍视野的FoxP3+Tregs数为9.7 (3.8～20.2)个,癌旁组织为1.7 (0.5～4.2)个(P＜0.01),有门静脉癌栓和镜下癌栓的HCC组织Tregs数高于无门静脉癌栓和镜下癌栓组(P＜0.05),高Tregs组术后无瘤生存率、总体生存率均低于低Tregs组(P＜0.05,P＜0.01).Spearman相关分析表明,E-cadherin阳性率分别与另两种EMT标志物呈负相关(Vimentin:r=-0.572,P＜0.01; Snail:r=-0.597,P＜0.01).Tregs数量与E-cadherin呈负相关(r=-0.513,P＜0.05),与Vimentin和Snail呈正相关(Vimentin:r=0.598,P＜0.01; Snail:r=0.423,P＜0.05).结论:HCC组织中浸润的Tregs有利于肝癌的侵袭、转移,与EMT关系密切,并且对患者预后判断有一定的参考价值.
-
结直肠癌与其淋巴结转移癌及结直肠癌细胞上皮-间质转化的对比研究
背景与目的:对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的研究虽有大量文献报道,但研究数据仍有争议.本研究旨在探讨淋巴结转移的结直肠癌与结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异.方法:Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系SW480和SW620 E-cadherin和vimentin的mRNA表达:免疫组织化学法检测30例配对结直肠癌及其转移淋巴结的石蜡组织标本中E-cadherin和vimentin的表达,HE染色观察30例配对结直肠癌及其淋巴结转移癌组织形态以及SW480和SW620的细胞形态.结果:SW480与SW620中E-cadherin和vimentin的mRNA表达差异有统计学意义(P=0.037),均以后者为高;E-cadherin和vimentin在结直肠癌与其淋巴结转移癌组织中的表达差异无统计学意义(P=0.108;P=0.660).部分淋巴结转移癌中E-cadherin的表达高于结直肠癌(4/30),且vimentin表达比结直肠癌弱,甚至表达缺失(6/30);结直肠癌与其淋巴结转移癌组织具有相似的形态学特征;SW480和SW620两者形态类似.结论:结直肠癌对比其淋巴结转移癌、SW480对比SW620发现EMT特征无显著差异,推测是由于淋巴结转移癌和SW620发生TEMT.
-
上皮-间质转化及相关microRNA分子与肿瘤的恶性行为的研究进展
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞表型向间质细胞表型转变的过程,是一种重要的病理生理现象,与肿瘤侵袭、转移及耐药等恶性行为密切相关；microRNA作为一种与基因转录调控有关的重要小分子RNA,在EMT过程中有着举足轻重的作用.本研究就EMT现象及相关microRNA 分子与肿瘤恶性行为的研究进展作一综述.
-
Gab2通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的上皮-间质转化
背景与目的：越来越多的证据显示，Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2，Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关，但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的影响，明确Gab2在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织中Gab2及EMT标记物上皮性钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况并分析其相关性，用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测乳腺组织Gab2的表达情况，采用小干扰RNA(siRNA)技术降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中Gab2的表达，采用划痕实验检测表皮生长因子(epithelial growth factor，EGF)刺激后转染细胞的侵袭能力变化，用Western blot检测敲低Gab2后MDA-MB-231细胞中E-cadherin及vimentin的表达情况，同时检测p-GSK-3β的表达情况、转录因子Snail转核情况。结果：Gab2在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin的表达呈负相关，而与vimentin的表达呈正相关(P<0.05)；乳腺癌组织中Gab2的表达量明显高于正常乳腺组织；siRNA质粒转染后，SiGab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低，结果显示转染成功，划痕实验显示细胞的侵袭能力减弱，表明Gab2影响乳腺癌细胞系的侵袭能力；敲低Gab2后，MDA-MB-231细胞中的E-cadherin的表达明显升高，而vimentin的表达明显降低；GSK-3β的磷酸化受到抑制，而Snail在敲低Gab2的细胞核中的表达明显下调。结论：Gab2可以通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的EMT，从而促进乳腺癌的侵袭和转移。
关键词： 乳腺癌 侵袭 Grb2协同结合蛋白2 上皮-间质转化 信号通路 -
长链非编码RNA-H19促小细胞肺癌细胞株A549上皮-间质转化及侵袭
背景与目的：近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)可能在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用，其中H19在膀胱癌、胃癌、肝细胞癌等多种肿瘤中呈现异常过表达，并且能够促进肿瘤增殖，增加肿瘤细胞迁移和侵袭能力等。但H19在非小细胞肺癌中的表达及功能尚不十分清楚。本研究拟观察H19对非小细胞肺癌细胞株A549增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)及侵袭能力的影响。方法：在A549中通过转染质粒使H19过表达，通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8，CCK-8)检测H19过表达对A549细胞增殖能力的影响，通过Transwell检测其对A549细胞侵袭能力的影响，通过光学显微镜观察细胞的形态学变化，通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测EMT相关蛋白的变化，通过荧光素酶报告基因检测CDH1基因启动子活性的变化。结果：在A549中H19过表达后，细胞增殖能力有所增强(空白对照组D值为1.64±0.02，阴性对照组为1.59±0.04，过表达H19组为1.89±0.02，P<0.05)，细胞的侵袭转移能力增强[阴性对照组(30±6)个/视野，过表达H19组(110±7)个/视野，P<0.05)]，细胞发生伪足变长增多、细胞间隙增大等EMT特征的形态学变化，同时蛋白水平CDH1表达降低，而VIM及SNAI2的表达升高，伴有CDH1基因启动子活性下降60%以上(P<0.05)。结论：在非小细胞肺癌细胞株A549中H19过表达可诱使其发生EMT，并促进其增殖及侵袭能力。
-
TGM1基因过表达可抑制乳腺癌细胞的上皮-间质转化
目的:探究转谷氨酰胺酶1(transglutaminase 1,TGM1)基因过表达对乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法检测鼠源性乳腺癌FE1.2和FE1.3细胞中TGM1mRNA的表达水平.采用脂质体法将携带有TGM1基因全长序列的重组载体质粒pCMV3-TGM1-GFPspark转染至FE1.2细胞中,构建TGM1基因过表达的FE12细胞株(FE12-TGM1).光学显微镜下观察FE12细胞形态的变化,FCM法测量细胞粒径的大小;MTT法检测TGM1基因过表达对鼠乳腺癌细胞增殖能力的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测EMT相关分子标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-链蛋白(β-catenin)以及细胞周期调节蛋白D1 (cyclin D1)mRNA和蛋白的表达水平.后,采用细胞划痕愈合实验检测TGM1过表达对细胞迁移能力的影响.结果:FE1.3细胞中TGM1 mRNA的表达水平明显高于FE1.2细胞(P＜ 0.001).将重组载体pCMV3-TGM1-GFPspark转入FE1.2细胞后,FE1.2细胞中TGM1 mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P＜0.001和P＜0.01),细胞形态发生明显改变,细胞的粒径增大(P＜0.01),而FE1.2细胞的增殖能力明显降低(P＜0.001).TGM1基因过表达的E1.2细胞中E-cadherin mRNA的表达水平明显上调(P＜0.01),vimentin mRNA及蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜ 0.001),cyclin D1 mRNA的表达水平明显上调(P＜0.05),而cyclin D1蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05),β-catenin mRNA的表达水平无明显变化(P＞0.05),β-catenin蛋白的表达水平明显下调(P＜ 0.01);TGM1过表达后FE1.2细胞的迁移能力明显减弱(P＜0.05).结论:TGM1基因过表达能抑制乳腺癌细胞的EMT.
-
过表达钾离子通道调节蛋白抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭
目的:检测钾离子通道调节蛋白(K+ channel regulator,KCNRG)在肝癌细胞中的表达情况,并探讨上调KCNRG基因表达对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响.方法:首先采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测人正常肝上皮永生化细胞THLE-3和肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721、MHCC-LM3及SK-HEP1中KCNRG mRNA和蛋白的表达水平.然后采用脂质体转染法将KCNRG过表达质粒KCNRG-pcDNA3.1(+)转染至肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中,同时设置未转染的空白对照组和转染空载体的阴性对照组.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证KCNRG过表达效果后,分别采用细胞计数法、克隆形成实验和Transwell小室法分别检测肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的变化情况,并采用蛋白质印迹法检测肝癌细胞中EMT标志分子的表达变化.结果:肝癌细胞中KCNRG mRNA和蛋白表达水平明显低于人正常肝上皮永生化细胞THLE-3 (P值均＜0.01),尤以肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中的表达水平低.KCNRG过表达质粒转染后,肝癌细胞SK-HEP1和MHCC-LM3中KCNRG基因表达水平明显上调(P值均＜0.01),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平明显下调(P值均＜0.01),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平明显上调(P值均＜0.01),并且2种肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均被明显抑制(P值均＜0.01).结论:肝癌细胞中KCNRG基因表达水平明显低于正常肝细胞.KCNRG基因表达上调可以抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭及EMT.
-
沉默DLX4基因表达可抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭
目的:探讨抑制DLX4 (distal-less homeobox 4)基因的表达对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及其可能的作用机制.方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人前列腺癌 LNCap、DU145和PC-3细胞中DLX4 mRNA和蛋白的表达水平.将 DLX4 shRNA重组慢病毒pLKO.1-puro-shDLX4感染PC-3细胞(称为 PC-3-shDLX4细胞)后,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别验证DLX4的敲除效果,应用MTT法和Transwell小室法分别检测PC-3-shDLX4细胞的增殖、迁移和侵袭能力,应用蛋白质印迹法检测PC-3-shDLX4细胞中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及参与调控EMT的重要转录因子Snail和Twist蛋白的表达水平.结果:DLX4 mRNA和蛋白在人前列腺癌LNCap、DU145和PC-3细胞中均有较高水平的表达,PC-3细胞中DLX4 mRNA和蛋白的表达水平均高于LNCap和DU145细胞(P值均＜0.05).重组慢病毒pLKO.1-puro-shDLX4感染PC-3细胞后,PC-3细胞中DLX4基因表达被有效沉默, PC-3-shDLX4细胞中DLX4 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(尸值均＜0.05).PC-3-shDLX4细胞的增殖能力未发生明显改变(P＞0.05),而其迁移及侵袭能力却明显下降(P值均＜0.05).PC-3-shDLX4细胞中 Vimentin蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05),而E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P＜0.05);参与调控EMT的Snail和Twist蛋白表达水平在PC-3-shDLX4细胞中亦明显下调(P值均＜ 0.05).结论:DLX4在前列腺癌细胞中表达水平较高,下调DLX4表达可能通过逆转Snail和Twist介导的EMT来抑制前列腺癌PC-3细胞的迁移和侵袭.
-
乳腺癌MCF-7细胞通过TGF-β诱导的上皮-间质转化获得耐药
目的:通过研究高侵袭转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和低侵袭转移性细胞株MCF-7中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和耐药的相关性,以探讨乳腺癌耐药的机制.方法:采用实时荧光定量PCR法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纤黏蛋白(fibronectin)以及转录因子Snail、Slug和锌指E-box同源结合框1(Zinc finger E-box binding homeobox 1, ZEB1) mRNA的表达水平;划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移和侵袭能力;CCK-8法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇的敏感性,并采用实时荧光定量PCR法检测耐药基因多重耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1, MDR1)和MDR相关蛋白1 (MDR-associated protein, MRP1) mRNA的表达水平.用转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)诱导MCF-7细胞发生EMT,或用靶向E-cadherin基因的E-cadherin-siRNA沉默EMT相关标志物E-cadherin的表达,再用CCK-8法检测MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的变化.结果:MDA-MB-231细胞中vimentin、fibronectin、 Slug和ZEB1 mRNA的表达水平均高于MCF-7细胞(P值均< 0.000 1), E-cadherin mRNA的表达水平明显低于MCF-7细胞(P=0.000 2), Snail mRNA的表达水平无明显差异.与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显更强(P值均< 0.000 1); 5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值明显高于MCF-7细胞(P值均<0.05); MDA-MB-231细胞中耐药相关基因MDR1和MRP1 mRNA表达水平明显更高(P值均< 0.000 1).TGF-p诱导MCF-7细胞发生EMT后,5-氟尿嘧啶对MCF-7细胞的IC50值明显上升(P<0.05);沉默E-cadherin表达后,MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性明显增强(P<0.05).结论:乳腺癌中EMT和耐药存在相关性,诱导EMT发生可导致细胞耐药.
-
干扰ROR1基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的上皮-间质转化
目的:探讨干扰受体酪氨酸激酶样孤核受体1 (receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1,ROR1)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:将特异性靶向ROR1基因的siRNA(即ROR1-siRNA)转染至ROR1相对高表达的骨肉瘤MG-63细胞中,蛋白质印迹法检测ROR1基因表达下调情况.然后采用划痕愈合实验及Transwell小室法检测MG-63细胞迁移和侵袭能力的变化,倒置光学显微镜下观察细胞形态的变化.后,采用蛋白质印迹法和免疫荧光染色法检测MG-63细胞中EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)以及肿瘤转移相关蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1 (zinc finger E-box binding homeobox protein 1,ZEB1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达情况.结果:转染ROR1-siRNA可明显下调骨肉瘤MG-63细胞中ROR1蛋白的表达水平(P＜0.05).下调ROR1基因表达后,MG-63细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P值均＜ 0.05),细胞形态由间质细胞形向上皮细胞形转变,E-cadherin表达水平明显上调(P＜0.05),而vimentin表达水平明显下调(P＜0.05),另外ZEB1、MMP-2和MMP-9的表达水平均明显降低(P值均＜ 0.05).结论:RNA干扰ROR1基因表达可通过抑制EMT的发生,降低骨肉瘤MG-63细胞的迁移和侵袭能力.
关键词： 骨肉瘤 上皮-间质转化 RNA干扰 受体酪氨酸激酶样孤核受体1 -
重组人骨桥蛋白促进结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化
目的:探究外源性重组人骨桥蛋白(recombinant human osteopontin,rhOPN)对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮-间质转化的影响.方法:实验分为对照组、rhOPN组和anti-rhOPN组,结直肠癌HCT116细胞不进行任何处理或分别用400 ng/mL rhOPN、10 μg/mL抗rhOPN抗体处理.之后,应用CCK-8法、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin以及vimentin的表达情况.结果:rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞12 h后,rhOPN组细胞增殖能力明显强于对照组(P＜0.05),anti-rhOPN组细胞增殖能力明显弱于对照组(P＜0.05).rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞24 h后,rhOPN组细胞迁移率高于对照组(P＜0.01),anti-rhOPN组细胞迁移率低于对照组(P＜0.05).rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞36 h后,rhOPN组侵袭细胞数高于对照组(P＜0.01),anti-rhOPN组侵袭细胞数低于对照组(P＜0.05).rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞24 h后,rhOPN组细胞中N-cadherin和vimentin蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),E-cadherin蛋白的表达水平则低于对照组(P＜ 0.01);anti-rhOPN组细胞中N-cadherin和vimentin蛋白的表达水平均低于对照组(P＜0.05,P＞0.05),E-cadherin蛋白的表达水平则高于对照组(P＜0.05).结论:rhOPN可以促进结直肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与细胞上皮-间质转化有关.
-
AGE/RAGE参与结直肠癌细胞上皮-间质转化及肿瘤干性的调控
目的:探讨晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化及肿瘤细胞干性的影响,及其可能的作用机制.方法:200 μg/mL AGEs和200 μg/mL AGEs联合50 μmol/L磷脂-肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3kinase,PI3K)特异性抑制剂LY294002处理HCT116细胞后,分别应用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室法、克隆形成实验和肿瘤细胞成球实验检测HCT116细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和细胞成球能力.200 μg/mL AGEs和200 μg/mL AGEs联合50μmol/L LY294002处理HCT116细胞球后,应用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,FCM法检测CD133+细胞球所占比例,蛋白质印迹法检测HCT116细胞球中CD133、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白的表达.不同浓度AGEs、200 μg/mL AGEs和200 μg/mL AGEs联合50 μmol/L LY294002处理HCT116细胞后,应用蛋白质印迹法检测细胞中晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Snail、PI3K、磷酸化PI3K (phosphorylated PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,PKB1,又称Akt1)和磷酸化Akt1 (phosphorylated Akt1,p-Akt1)的表达.结果:200 μg/mL AGEs处理后,HCT116细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和细胞成球能力均明显增强(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,P＜ 0.01,P＜0.05),而50 μmol/L LY294002处理后这一作用被明显抑制(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).AGEs处理后,HCT116细胞球的侵袭能力增强(P＜0.01),CD133+细胞球所占比例增加(P＜0.05),CD133、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均明显上调(P值均＜ 0.05);而50 μmol/L LY294002处理后这一作用被明显抑制(P＜0.01,P＜0.05,P值均＜0.05).不同浓度AGEs处理后,HCT116细胞中RAGE蛋白的表达水平上调(P＜0.05).200 μg/mL AGEs处理后,HCT116细胞中p-PI3K、p-Akt1、N-cadherin、vimentin和Snail蛋白表达水平均上调(P值均＜ 0.05),E-cadherin蛋白表达水平下调(P＜0.05);而50 μmol/L LY294002处理后,HCT116细胞中p-PI3K、p-Akt1、N-cadherin、vimentin、Snail和E-cadherin的表达水平出现相反变化(P值均＜0.05).结论:AGEs激活RAGE信号通路,可促进结直肠癌HCT116细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,并维持肿瘤细胞干性,其机制可能与AGE/RAGE/PI3 K-Akt信号通路介导的上皮-间质转化有关.
关键词： 结直肠肿瘤 细胞增殖 细胞运动 上皮-间质转化 晚期糖基化终末产物受体 -
下调转录因子KLF4抑制前列腺癌细胞上皮-间质转化及细胞迁移和侵袭
目的:探讨下调Krüippel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响.方法:构建稳定敲降KLF4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组LNCaP-con细胞.应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测LNCaP-shKLF4和LNCaP-con细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,以及稳定敲降KLF4的前列腺癌PC3-shKLF4细胞、对照组PC3-con细胞、LNCaP-con细胞和LNCaP-shKLF4细胞中EMT相关分子mRNA和蛋白的表达.Transwell小室法检测 PC3-con、PC3-shKLF4、LNCaP-con 和 LNCaP-shKLF4细胞的迁移及侵袭能力.结果:成功构建LNCaP-shKLF4和对照组LNCaP-con细胞.LNCaP-shKLF4细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组LNCaP-con细胞(P＜0.01,P＜0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad) mRNA的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜0.01), 而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、锌指E-盒结合同源异体框1 (Zinc finger E-box-binding homeobox 1,Zeb1)、Snail1、波形蛋白(vimentin,Vim)和基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1) mRNA的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜ 0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-cad的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜0.05),而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-cad、Zeb1、Snail1、Vim和MMP1蛋白的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜ 0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞的迁移和侵袭能力均分别低于对照组PC3-con和LNCaP-con细胞(P＜0.01,P＜0.05).结论:下调前列腺癌细胞中KLF4表达可促进上皮相关基因的表达,抑制间质相关基因的表达,从而在体外抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭.
-
RBMS3通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞侵袭及其上皮-间质转化
目的:研究RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RNA-binding motif,single-stranded-interacting protein 3,RBMS3)对胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能的分子作用机制.方法:首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MKN-28、MKN-45、NCI-N87和SGC-7901中RBMS3的表达水平.然后采用脂质体转染法将RBMS3过表达载体[RBMS3-pcDNA3.1(+)]转染至胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中,同时设置空白对照组和空载体转染的阴性对照组.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证RBMS3过表达效果后,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中上皮-间质转化相关蛋白以及Wnt信号通路中β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平变化.后,用Wnt通路激动剂氯化锂(lithium chloride,LiCl)处理RBMS3过表达的胃癌MKN-45和SGC-7901细胞后,再次采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化.结果:与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中RBMS3 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P值均＜ 0.05).RBMS3过表达质粒转染后,胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中RBMS3基因过表达,2种细胞的侵袭能力随之明显降低(P值均＜ 0.05).在RBMS3过表达的胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中,N-钙黏蛋白(N-cadherin)和β-catenin表达水平均明显降低(P值均＜ 0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平明显升高(P值均＜0.05).用LiC1处理RBMS3过表达的MKN-45和SGC-7901细胞后,RBMS3对2种细胞侵袭的抑制作用均被部分抵消(P值均＜0.05).结论:RBMS3可能通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路,抑制人胃癌细胞的侵袭和上皮-间质转化.
