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033 苯致血液、免疫毒性及T细胞受体分析在接苯人群中的应用
苯是一种应用广泛的化学物质,长期接触可引起白血病.本文就苯的血液和免疫毒性及其机制,T细胞受体相关分析在接苯人群中的应用情况进行综述.
关键词： 苯 细胞受体Vβ基因谱 T细胞受体重排删除环 -
胸腺近期输出功能测定在评价细胞免疫功能重建中的应用
T细胞受体重排删除环(TRECs )是T细胞受体基因重排过程中删除的DNA环,可作为胸腺近期输出功能的指标,本文综述其在造血干细胞移植、HIV-1感染和AIDS患者抗逆转录病毒治疗、肿瘤化疗以及细胞因子补充治疗后免疫重建评价中的应用.
关键词： T细胞受体重排删除环 细胞免疫重建 胸腺输出功能 造血干细胞移植 -
胸腺输出功能的评价手段-T细胞受体重排删除环的定量分析
多年来,因缺乏合适的检测胸腺输出naive T细胞的技术,未能明确胸腺输出功能.由于胸腺T细胞的分化始于T细胞受体(TCR)基因的重排,在TCRα基因重排时,通过δRec和ψJα基因片段重组形成染色体外DNA环而删除TCRδ基因,该删除环称为信号结合T细胞受体重排删除环(siTRECS)或TRECs.TRECs十分稳定,不扩增且随着细胞增殖而稀释,故近期研究认为对TRECs的定量检测可以直接地估计胸腺的输出功能.本文综述了TRECs定量分析在评价正常人和造血干细胞移植,血液肿瘤、HIV感染和自身免疫性疾病等等的胸腺输出功能中的作用.
关键词： T细胞受体重排删除环 胸腺输出功能 定量PCR -
清髓性非血缘脐血与同胞供体造血干细胞移植后T淋巴细胞亚群及其受体重排删除环早期重建规律的比较分析
本研究比较分析清髓性非血缘脐血移植(UCBT)与同胞供体骨髓和/或外周血干细胞移植(BMT/PBSCT)后恶性血液病受者早期T细胞亚群及T细胞受体重排删除环(T-cell receptor excision cycles,TREC)的重建规律.用流式细胞术检测40例恶性血液病患者清髓性异基因造血干细胞移植后6个月外周血中T细胞亚群的变化,实时定量PCR检测TREC.结果表明,UCBT与BMT/PBSCT相比,在移植后1个月内CD3+、CD3+ CD4+、CD3+ CD8+细胞绝对值明显降低,此后无明显差别;2个月内CD3+细胞比例较低,但无明显差别.UCBT同BMT/PBSCT类似,CD3+ CD4+细胞自植入开始即明显减低,2个月达低,以后缓慢恢复,但至6个月仍未达正常;而CD3+ CD8+亚群植入时已达正常水平,CD4+/CD8+比值至6个月仍低于正常.UCBT组在移植后1个月内naive T细胞明显高于BMT/PBSCT组;而在移植后3个月开始终末分化效应记忆T细胞明显高于BMT/PBSCT组,且明显高于正常对照组.移植后6个月内两组移植受者TREC均较低.结论:与同胞供体BMT/PBSCT相比较,UCBT后早期T细胞重建显著延迟,但终末效应记忆T细胞亚型水平明显升高,从而发挥着抗感染或抗白血病作用.
关键词： 造血干细胞移植 脐血移植 免疫重建 T细胞亚群 T细胞受体重排删除环 -
尿毒症维持性血液透析近期胸腺输出功能变化研究
目的 评估尿毒症维持性血液透析(MHD)患者近期胸腺输出na(i)ve T细胞的情况.方法 对郑州大学附属肿瘤医院2010年10月至2011年10月收治的15例MHD患者利用实时定量PCR( TaqMan)方法检测其透析前后外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+T细胞中TRECs水平.以10例年龄相匹配的正常人外周血作为对照.结果 与正常人外周血中TRECs拷贝数相比,15例MHD者首次透析前的TRECs均显著低下,分别为(0.48±0.39)拷贝/1000 PBMCs和(1.03±0.57)拷贝/1000CD3+T细胞(P值分别为0.0014和0.0067).而透析2～6个月后外周血中的TRECs值差异较大,平均为(0.41±0.36)拷贝/1000 PBMCs和(1.33±1.46)拷贝/1000 CD3+T细胞(P值分别为0.0008和0.019),仍明显低于正常水平,与首次透析前的水平相比,差异无统计学意义.结论 MHD患者首次透析前及透析2～6个月后胸腺近期输出na(i)ve T细胞功能均明显低下,胸腺近期输出功能低下是导致细胞免疫功能缺陷的根本原因之一.
关键词： 维持性血液透析 胸腺近期输出功能 免疫功能 T细胞受体重排删除环 -
慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后TRECs含量的变化
观察慢性乙型肝炎(CHB)患者经抗病毒治疗前后T细胞受体重排删除环(TRECs)含量的变化.利用实时荧光定量PCR方法检测15例干扰素、13例阿德福韦酯治疗前后的CHB患者及27例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中TRECs的含量.CHB患者中TRECs含量为(7.29±2.26)copies/103PBMCs,低于健康体检者TRECs水平(10.48±6.90)copies/103PBMCs,P＜0.05;TRECs含量与HBV载量直线相关分析r=0.06,P=0.975;干扰素组治疗后TRECs含量(12.77±5.25)copies/103PBMCs,高于治疗前(7.14±2.69)copies/103PBMCs,P＜0.05;阿德福韦酯组治疗后TRECs含量(8.63±3.26)copies/103PBMCs与治疗前(7.464±1.73)copies/103PBMCs比较,P＞0.05,差异无统计学意义.CHB患者组中TRECs含量低于正常对照组,TRECs含量与HBV载量无明显相关性,干扰素治疗能提高CHB患者中TRECs的含量,而阿德福韦酯无此作用.
关键词： 慢性乙型肝炎 T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 抗病毒药 -
一种动态检测小鼠微量血中T细胞受体重排删除环含量的方法
目的:通过检测比较外周血(颈动脉大量采血和微量隐静脉采血)、胸腺组织和脾脏组织等不同成分或组织中T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并建立一种通过微量外周血PCR预扩增的方法,评估胸腺输出功能.方法:采用C57BL/6小鼠作为实验对象,分成幼年组(5周龄,n=10)和成年组(15周龄,n=10).经过隐静脉采血及颈动脉采血后处死小鼠,取小鼠胸腺器官和脾脏器官,提取基因组DNA(gDNA),隐静脉微量血gDNA通过PCR预扩增,提纯后再和颈动脉血、胸腺组织和脾脏组织gDNA一起进行实时定量PCR,分析各组织成分TREC的表达水平及差别.结果:幼年组胸腺组织及外周血中TREC的含量比成年组高,且二者趋势基本一致;而脾脏组织结果与其相反;幼年组小鼠胸腺组织中TREC的含量比脾脏组织中高,成年组小鼠结果与之相反;微量外周血经过预扩增后再进行实时定量PCR的结果与直接定量PCR结果一致,且更高效.结论:研究提供了一种新型高效的动态检测T细胞受体重排删除环和检测胸腺输出功能的方法.
关键词： 胸腺 T细胞受体重排删除环 微量隐静脉血 颈动脉血 PCR预扩增 -
抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群的胸腺近期输出功能初步探讨
目的 观察抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测其胸腺近期输出功能.方法 利用实时荧光定量PCR方法检测30例抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群及22例正常人PBMCs中TRECs含量.结果 抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群中TRECs含量为(5.67±1.55)copies/103 PBMCs,与正常人TRECs水平(6.11±2.11)copies/103 PBMCs无差异(P＞0.05).结论 抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群TRECs水平情况显示其胸腺近期输出功能与正常人比较无差异.
关键词： 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 -
2例异基因造血干细胞移植后的植入状态监测及近期胸腺功能重建
目的 监测异基因造血干细胞移植后的植入状态,评价移植后的近期胸腺功能重建.方法 对1例接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)半相合亲缘供者与1例HLA全相合非亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的白血病患者,收集供者和受者术前、受者移植后1个多月、受者移植后4个多月的EDTA抗凝静脉血,同时采集10例正常健康志愿者的EDTA抗凝静脉血作为正常对照.采用STR-PCR技术检测20个常染色体STR基因座及1个性别基因座的基因型.采用实时荧光定量PCR方法检测受者不同时期和10例正常健康志愿者的T细胞受体DNA重排删除环(TREC)水平.结果 2例造血干细胞移植病例监测在移植后1个多月及4个多月均完全表现为供者源型.造血干细胞移植后1个多月及4个多月,半相合供者的白细胞及血小板恢复晚于HLA全相合供者.2例病人移植前TREC相对定量略低于年龄相近的正常对照组,移植后1个多月及4个多月TREC水平明显升高,其中HLA全相合移植病人TREC相对定量高于HLA半相合移植病人.结论 移植后1个多月及4个多月供者造血干细胞在受者体内完全植活.全相合造血干细胞移植后造血及免疫重建快于半相合造血干细胞移植.
关键词： 造血干细胞移植 T细胞受体重排删除环 免疫重建 -
实时荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能
目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,进而评价CHB患者的胸腺近期输出功能,并分析TRECs含量与HBV病毒含量间的关系.方法 利用实时荧光定量PCR法检测205例CHB患者PBMCs中TRECs含量及血清HBV DNA含量,同时选取32例健康人群作为对照组.结果 患者组外周淋巴细胞中TRECs含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).根据HBV DNA含量的不同分为HBV DNA阴性组、低病毒组(＜1×105 IU/ml)和高病毒组(≥1×105 IU/ml),3组患者TRECs含量差异无统计学意义(t =2.58,P＞0.05).采用直线回归相关性分析发现,HBV DNA含量与TRECs含量之间无相关性(r=0.15,P＞0.05).结论 CHB患者PBMCs中TRECs含量低于正常人群,提示CHB患者胸腺近期输出功能明显降低;TRECs含量与HBV 病毒含量间无明显相关性.
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儿童急性淋巴细胞白血病T细胞受体重排删除环与严重感染相关性研究
目的 定量检测急性淋巴细胞白血病(急淋)患儿不同阶段外周血中信号连接/结合T细胞受体重排删除环(sjTRECs)水平的变化,以评价其作为预测化疗后严重感染指标的可行性.方法 共收集初发急淋患儿(初发组,n=30)、早期强化化疗结束后白细胞恢复且未感染患儿(化疗组,n=36)、化疗后严重感染患儿(感染组,n=30)及正常同龄儿童(正常组,n=50)外周血标本共146份,通过FQ-PCR法检测其sjTRECs水平,并进行组间比较.结果 正常组平均sjTRECs为(394±270)copies/103MNC,高于其他3组(P<0.05);化疗组sjTRECs水平低于初发组[(96±78)copies/103 MNC vs(210±219)copies/103 MNC,P<0.05];感染组sjTRECs水平低,仅为(48±40)copies/103 MNC.结论 监测急淋患儿化疗后sjTRECs水平变化可能有助于早期预测机体严重感染的发生.
关键词： T细胞受体重排删除环 急性淋巴细胞性白血病 感染 儿童 -
重度苯中毒患者T细胞受体 Vβ亚家族TRECs的分析
目的 检测重度苯中毒患者外周血23个TCR Vβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况.方法 分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增.结果 在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P＜0.05).在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12 个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P＜0.05).结论 本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况.苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况.
关键词： 苯 TCRVβ基因 T细胞受体重排删除环 初始T细胞 -
自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能
目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况.方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照.结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P＜0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平.结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异.
关键词： 自体造血干细胞移植 T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 -
异基因造血干细胞移植合并胸腺移植及CD4--DLI后T细胞重建情况
目的 评价异基因造血干细胞(allo-HSCT)联合胸腺移植(TT)时给予去除CD4+T细胞供体淋巴细胞输注(CD4--DLI)对T细胞重建及向外周T细胞储存库输出能力的影响.方法 分为两组,对照组allo-HSCT时联合TT,处理组allo-HSCT时联合TT及CD4--DLI,移植5个月后提取小鼠脾脏T细胞的基因组DNA,以实时定量PCR检测小鼠脾脏T细胞中信号结合T细胞受体重排删除环(sjTRECs)水平,PCR扩增目的基因与RAG2片段,建立PCR标准曲线并比较对照组和处理组脾脏T细胞sjTRECs含量.结果 对照组和处理组的脾脏T细胞sjTRECs水平差异有统计学意义,处理组显著高于对照组(P＜0.01).结论 allo-HSCT+TT时给予CD4--DLI能够显著加快移植后T细胞重建及向外周T细胞储存库输出能力的恢复.
关键词： 实时定量PCR T细胞受体重排删除环 异基因造血干细胞移植 T细胞重建 -
急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究
无aGVHD病史移植患者的外周血TRECs水平.3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到.结论:不同个体T细胞免疫重建时间存在差异;AML患者在allo-HSCT后早期(90 d内)的胸腺输出功能仍处于恢复阶段, 移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主;外周血TRECs水平可能与AML患者allo-HSCT后病情的发展、转归有关.
关键词： 造血干细胞移植 异基因 T细胞受体重排删除环 免疫重建 -
正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况
目的: 检测TCR 23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况.方法: 采用半巢式 PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增.结果: 在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1 sjTRECs 的检出率胸腺细胞高,其次是脐血,正常人低.当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血.当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1 000个细胞时仍能检测到.结论: 成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异.
关键词： T细胞受体 T细胞受体重排删除环 Vβ亚家族 -
T细胞受体重排删除环(TREC)定量检测的研究进展
T细胞受体重排删除环TREC(T cell receptor rearrangement excision circle),是naive T细胞的特异性标志,是TCR基因重排后删除掉的环状DNA片段,在细胞内不能复制也不随细胞分裂而增殖,稳定地存在于细胞内并随着细胞的分裂不断被稀释.研究认为对TREC的定量检测可以直接评估胸腺的输出功能.本文将针对T细胞受体重排删除环的形成原理以及TREC定量检测方法、正常人TREC水平数据库的确立以及TREC定量检测的缺陷进行综合性论述.
