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正交试验法研究金丝桃素提取工艺
目的:优选金丝桃素的佳提取工艺.方法:采用正交试验法,以提取物中总金丝桃素含量为考察指标,对影响金丝桃素提取工艺的因素进行了研究.结果:实验设计四个因素中溶剂用量影响大,重复试验结果满意.结论:优选出金丝桃素提取工艺为用贯叶连翘量4倍的甲醇在40℃下浸提3次,每次12 h.
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HPLC法测定不同产地贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定贯叶连翘中金丝桃素含量的方法,并对不同产地贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量进行比较.方法:色谱柱为Boston pHlex ODS C_(18)(150min×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇-水(85:15,氨水调pH 9.5),检测波长为588nm,流速为1.0 mL·min~(-1).结果:金丝桃素检测浓度在0.14～3.60 μg·mL~(-1)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 7);平均回收率为100.7%,RSD=1.98%(n=6).不同产地贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量在0.005～0.562mg.g~(-1)之间.结论:不同产地贯叶连翘药材不同部位中金丝桃素含量均不同.本方法简便、准确、重现性好,可用于贯叶连翘的质量控制.
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金丝桃素提取物稳定性考察
目的：考察金丝桃素提取物的稳定性。方法以金丝桃素和伪金丝桃素含量变化为指标，考察光照、温度、抗坏血酸等因素对金丝桃素提取物短、长期稳定性的影响。结果短期内，金丝桃素提取物在常温避光及加抗坏血酸条件下较稳定；光照能使提取物中金丝桃素、伪金丝桃素含量短时间内升高，然后开始下降；在高温条件下，提取物稳定性差。8周内，提取物在常温光照、常温避光及加抗坏血酸条件下金丝桃素、伪金丝桃素含量均有不同程度地下降，在低温避光条件下比较稳定。结论金丝桃素提取物应低温、避光保存。
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不同方法除鞣质后贯叶金丝桃提取物中金丝桃素的含量变化
目的 考察用不同方法检测除鞣质后金丝桃素的含量变化和收率,建立贯叶金丝桃良好的除鞣质方法.方法 采用明胶沉淀法、改良明胶沉淀法及碱性醇沉法除鞣质后,用高效液相色谱(HPLC)法测定贯叶金丝桃提取物中金丝桃素含量变化和收率;色谱柱为Phenomenex-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.006 mol/L Na2HPO4(7:1,V/V,H3PO4调至pH=6.5),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长590 nm,外标法计算.结果 金丝桃素的进样量线性范围为0.019 4～0.776 0 μg(r=0.999 9),平均回收率为100.25%,RSD=1.29%(n=5);明胶沉淀法、改良明胶沉淀法和碱性醇沉法除鞣质后金丝桃素含量分别为0.092%,0.098%和0.093%,收率分别为70.15%,85.21%和89.16%.结论 改良明胶沉淀法具有鞣质去除完全、金丝桃素含量较高、损失较少的优点,且方法简便易行,可应用于贯叶金丝桃提取物除鞣质处理.
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金丝桃素及其提取物对肺癌细胞SpcA1的体外杀伤效应
目的 研究贯叶金丝桃中金丝桃素及其提取物对人肺癌细胞株SpeA1的体外杀伤效应.方法 以发光二极管为光源,通过测定胞内荧光强度来确定细胞对金丝桃素的吸收.用显微镜观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和凋亡DNA电泳分析法研究金丝桃素及其提取物对细胞的杀伤作用.结果 光活化的金丝桃素对SpeA1细胞有显著的体外杀伤效应,其抑制细胞生长的能力与金丝桃素的浓度及光照能量密切相关.结论 金丝桃素及其提取物能明显抑制肺癌细胞的生长.提示金丝桃素在肿瘤治疗中应用前景良好.
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不同产地贯叶连翘中金丝桃素和伪金丝桃素的含量分析
目的比较不同产地贯叶连翘中金丝桃素和伪金丝桃素的含量.方法样品经甲醇超声波提取,采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm)分离测定,以甲醇-0.006 mol/L磷酸氢二钠(87.5:12.5,V/V,用磷酸调节pH值至6.5)为流动相,检测波长为590 nm,流速为1.0 mL/min.结果不同产地贯叶连翘中金丝桃素和伪金丝桃素的含量存在一定差异.结论该方法为制订贯叶连翘药材质量控制标准提供了重要依据.
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金丝桃素光动力通过抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管腔形成抑制血管生成
目的 探讨金丝桃素光动力(hypericin-photodynamic therapy,HY-PDT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管腔形成的影响,研究抑制血管生成的作用机制.方法 以血卟啉为阳性药,用金丝桃素及血卟啉分别与HUVECs避光孵育24 h后,给予585 nm黄光照射(1.0 J/cm2),24 h后采用MTT法检测不同浓度HY对HUVECs细胞增殖的影响,细胞划痕实验观察HUVECs迁移情况,Matrigel实验观察对HUVECs细胞管腔形成的作用,qRT-PCR检测Smad2基因mRNA的表达,Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Smad2表达变化.结果 HY-PDT能够抑制HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成;HY-PDT使HUVECs中ERK1/2磷酸化比率(p-ERK1/2/ERK1/2)显著降低(P＜0.01),并显著下调Smad2mRNA及蛋白表达(P＜0.01).结论 HY-PDT通过抑制ERK1/2蛋白磷酸化活化、降低Smad2 mRNA表达及蛋白水平,使HUVECs细胞增殖、迁移管腔形成受到抑制,抑制血管的生成.
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注射金丝桃素并525 nm激光照射对鲜红斑痣模型罗曼鸡鸡冠的血管损伤作用
目的 探讨注射金丝桃素(hypericin,HY)并525 nm激光照射对鲜红斑痣模型罗曼鸡鸡冠的作用.方法 取6月龄雄性罗曼鸡36只,按随机数字表法分为6组:正常对照组、激光对照组、血卟啉1 mg/kg阳性对照组、HY 0.3 mg/kg组、HY 1 mg/kg组、HY 3 mg/kg组,每组6只.除正常对照组外,对各组鸡冠单侧进行激光照射,未处理一侧作为自身对照.罗曼鸡静脉注射金丝桃素后,立即用激光照射鸡冠直径2 cm的区域,鸡冠剂量为功率密度100 mW/cm2.各组(除正常对照组)给药并525 nm激光照射后每天观察照相,处理7、14 d后处死动物,取鸡冠进行病理检查,并对鸡冠毛细血管计数.结果 HY给药组和血卟啉对照组从外观上可对鸡冠表皮产生不同程度的损伤,造成明显水肿、结痂、坏死.HY 1 mg/kg,HY 3 mg/kg组及血卟啉1 mg/kg阳性对照组对鸡冠的表皮损伤尤其明显,产生明显的坏死、结痂.HE组织学观察显示,HY各给药组及血卟啉对照组能导致鸡冠表皮增生,减少真皮毛细血管数,其毛细血管减少率与正常对照组及激光对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),激光对照组与正常对照组相比差异不大.结论 HY静脉注射给药并525 nm 激光照射对鸡冠真皮毛细血管有较好的破坏作用,能对鲜红斑痣模型鸡冠起到明显损伤作用.
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金丝桃素抗乙型肝炎病毒作用及机制的体外研究
目的：从细胞水平评价金丝桃素（HY）的抗乙型肝炎作用，并初步探寻其药物作用靶点。方法选择可分泌乙型肝炎病毒的肝细胞株 HepG2．2．15为实验对象，HY 为 HY 组，拉米夫定（3TC）为3TC 组，去离子水为空白对照组，对细胞进行分组给药。给药72 h 后，采用 Southern 印记杂交及荧光定量 PCR 检测病毒 HBV-DNA 的复制水平；ELISA 检测 HBV 表面抗原（HBsAg）和 HBVe 抗原（HBeAg）的抑制率；采用 Northern blot 与荧光定量 PCR 检测 pgRNA 的表达水平；Western blot 及荧光定量 PCR 检测调控因子肝细胞核因子3（HNF3β）、肝细胞核因子4（HNF4α）、过氧化物酶体增殖激活受体／视黄受 X 受体（PPARα／RXRα）的表达水平。结果与空白对照组相比，HY 组与3TC 组对 HepG2．2．15细胞中的 HBV DNA 及 HBsAg、HBeAg 的表达有明显抑制作用（P ＜0．05）。与空白对照组相比，HY 可显著减少 pgRNA 的表达（P ＜0．05），而3TC 无明显变化（P ＞0．05）。与空白对照组和3TC 组相比，HY 对调控因子 HNF3β与 HNF4α的表达有显著影响（P ＜0．05），但对 PPARα和PXRα的表达无影响（P ＞0．05）。结论 HY 具有强效抗乙型肝炎病毒作用，且其可使负向调控因子 HNF3β的表达升高并降低正向调控因子 HNF4α的表达。提示其药物作用靶点可能为 pgRNA。
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金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞蛋白激酶C活性的影响
目的研究金丝桃素(hypericin)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epi-thelium,RPE)细胞的蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)活性的影响. 方法用含0.5～5.0 μmol/L金丝桃素的10%血清培养液培养人RPE细胞,在有或没有PKC激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸 (phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)预处理RPE细胞的情况下,用PKC检测试剂盒测定金丝桃素对细胞液PKC (cytosolic PKC, c-PKC)和细胞膜PKC(membranous PKC, m-PKC)活性变化的影响. 结果未经PMA处理的人RPE细胞的c-PKC和m-PKC的原始活性分别为(35.34±4.1) pmol*min-1*mg-1和(62.52±8.8) pmol*min-1*mg-1.PMA处理细胞后,c-PKC在5 min内就迅速下降,20 min后下降缓慢,60 min降至处理前的18%,以后一直处于很低的水平.m-PKC在5 min后逐渐升高,至40 min达到高峰以后下降,60 min后恢复至对照水平,10 h后降至对照组的30%以下.用PMA处理RPE细胞48 h后,c-PKC和m-PKC都降低至不能测出.但若将金丝桃素与PMA同时加入后,能抵消大部分PMA对PKC的下降调节. 结论金丝桃素能阻止RPE细胞的PKC转位,使PKC的活性发生变化,有可能促进RPE细胞的凋亡,防止增生性玻璃体视网膜病变的发生.
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HPLC测定不同产地和不同部位贯叶金丝桃中的金丝桃素
目的 测定自四川、湖北、甘肃、陕西等4省48个样地的贯叶金丝桃中金丝桃素的含量,为评价药材质量提供依据.方法 采用HPLC方法,色谱柱为Agilent zorbax extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-6 mmol·L-1磷酸氢二钠(87.5∶12.5,用磷酸调pH6.5),检测波长为590 nm,柱温30℃,流速1 mL· min-,进样量10 μL.结果 金丝桃素4.04～252.5 ng与峰面积之间的线性良好(r2 =0.9996);回收率为99.69％,RSD=1.28％ (n =9).不同产地贯叶金丝桃中金丝桃素的含量为0.186 ～0.382 mg·g-1,不同部位中的含量为花＞叶＞茎;光照在提取过程中对金丝桃素检测结果的影响较大.结论 不同产地贯叶金丝桃的不同部位中金丝桃素的含量均不同.
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光源对金丝桃素光动力体外抗肿瘤作用的影响
目的 研究金丝桃素和贯叶金丝桃中金丝桃素提取物对人肝癌细胞株HepG2的体外杀伤效应及光源对其抗肿瘤作用的影响.方法 分析金丝桃素及金丝桃素提取物的吸收光谱,用不同波长的光源激发进行体外细胞毒试验,采用显微镜观察、MTT法分析和DNA电泳等方法评价金丝桃素及金丝桃素提取物的抗肿瘤效果.结果 590 nm的黄光激发金丝桃素和金丝桃素提取物对HepG2细胞有显著的体外杀伤效应,生长抑制率分别为51.5%、83.1%,其他波长光源的作用不显著.结论 金丝桃素的光动活性依赖于光源的波长,受适当光源激发的金丝桃素及金丝桃素提取物能显著抑制HepG2细胞的生长,显示金丝桃素有良好的光动力治疗肝癌的开发前景.
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HPLC测定新疆贯叶金丝桃中金丝桃素的含量
目的建立测定新疆贯叶金丝桃中金丝桃素含量的测定方法.方法采用HPLC法,Kromasil ODS-1色谱柱 (4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为甲醇-pH 6.5磷酸盐缓冲液(90∶10),流速1 ml*min-1,柱温40℃,检测波长588 nm.结果金丝桃素和其他组分可达基线分离,线性范围为0.0165～0.0825 μg(r=0.9999),平均回收率为101.1%,RSD=3.7%(n=9).结论本法操作简便快速,灵敏准确.新疆贯叶金丝桃药材中金丝桃素的含量略高于美国药典的要求.
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光化学法对血液中病毒的灭活效果研究
目的:筛选并验证全血中脂质包膜病毒灭活的佳光化学方法.方法:以f2噬菌体为试验病毒,通过噬斑计数法筛选佳灭活血液中病毒的光化学法,并通过正交试验筛选灭活血液中病毒的佳作用条件;以HIV-1和日本脑炎病毒为试验病毒,通过细胞感染试验验证佳光化学法对血液中脂质包膜病毒的灭活作用.结果:与核黄素和金丝桃素相比,亚甲基蓝(MB)所致的光化学效应对血液中f2噬菌体的灭活作用显著(P＜0.05);在使血液中f2噬菌体下降超过5个对数级时,MB光化学的佳作用条件分别是:MB终浓度为15 μmol/L,可见光(640 nm)照射强度为40 000 Lux,光照射作用时间40 min;在相同MB加入剂量和光照射强度下,照射10 min,血液中HIV全部灭活(下降5.78个对数级),照射20 min,血液中日本脑炎病毒全部灭活(下降7.00个对数级).结论:亚甲基蓝光化学法可高效灭活全血中f2噬菌体、HIV-1与日本脑炎病毒.
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HPLC法测定滇西产金丝桃属植物中金丝桃素的含量
目的:测定生长于云南西部的7种金丝桃属植物中金丝桃素(hypericin)的含量,并考察其分布.方法:采用HPLC法,使用ODS色谱柱,流动相B:甲醇-乙腈-乙酸(50∶50∶0.5),A:乙腈(B∶A=6∶4)检测波长590mm.结果:回归方程:C=0.5211S-0.04988,r=0.99998,加样回收率102.7%,7种滇西产金丝桃属植物中有3种含金丝桃素.结论:本实验建立的方法适用于分析金丝桃属植物中金丝桃素含量,具有良好的重现性及精密度.
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金丝桃素药理作用以及制备方法研究概况
金丝桃素由中草药贯叶金丝桃提取而来,药理作用显著如抗病毒、 抗肿瘤、 抗抑郁等,也广泛应用于兽药.临床对其药理作用、 提取方法、 合成路线等进行了比较广泛的研究,本文对近年来金丝桃素在药理作用和制备方法等方面的新进展进行总结,为金丝桃素的全面开发提供文献参考.
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金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响
目的:探讨蛋白激酶C抑制剂金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响.方法:新西兰大白兔35只,随机挑选3只为空白对照组,16只为金丝桃素处理组、16只为生理盐水对照组.分别向玻璃体腔内注射0.1mL的金丝桃素(金丝桃素处理组)和生理盐水(生理盐水对照组),并分别于12,24,48h和72h后经前房灌注升高眼压达100mmHg(1kPa=7.5mmHg),持续90min,24h后取材.用高效液相色谱法测定不同时间点的视网膜谷氨酸含量.结果:急性高眼压兔视网膜谷氨酸含量比正常兔显著升高(P＜0.05).急性高眼压兔金丝桃素预处理48h后视网膜谷氨酸含量低,为(5.66±0.21)×10-5mmol/g,同期生理盐水对照后为(8.41±0.27)×10-5mmol/g,二者差异有显著性(P＜0.05).结论:金丝桃素玻璃体腔注射能降低兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量,对视网膜的有一定的保护作用.
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金丝桃素对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞保护作用的组织学观察
目的:探索金丝桃素对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞的影响.方法:取成年家兔20只,后房内注射a-糜蛋白酶,建立兔慢性高眼压模型.造模成功的兔眼在10d后玻璃体内分别注入金丝桃素0.1mL或生理盐水0.1mL,1次/wk,连续2wk.另用4只正常兔做空白对照.后光镜电镜观察视网膜神经节细胞的结构变化及视网膜内层平均厚度的变化.结果:生理盐水对照组节细胞数量减少,部分严重变性,染色质边集,线粒体、内质网等细胞器严重肿胀,视网膜内层平均厚度变薄.金丝桃素治疗组节细胞形态结构较生理盐水对照组损伤轻微,节细胞数量稍有减少,部分变性,染色质边集,线粒体、内质网肿胀较轻.视网膜内层平均厚度轻度变薄,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:金丝桃素作为一种特异性的蛋白激酶C抑制剂,对慢性高眼压下兔视网膜神经节细胞有保护作用.
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HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量
用HPLC法测定贯叶连翘根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量;结果表明花中含量高,茎中含量甚微.
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金丝桃素对培养的人视网膜色素上皮细胞钙离子内流的抑制
目的研究蛋白激酶C (PKC) 抑制剂金丝桃素对视网膜色素上皮细胞(RPE cells)钙离子信号共聚成像的影响. 方法使用钙荧光指示剂fluo-3 AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM),分析在100 nmol*L-1 佛波酯(PMA)和(或)5个浓度的金丝桃素(1, 2, 3, 4和5 μmol*L-1)刺激时培养的人RPE细胞的钙离子信号的变化. 结果 RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强. 只用PMA或金丝桃素刺激时,可以观察到荧光强度迅速下降,并且5个浓度金丝桃素之间的下降曲线无明显差异. 用PMA预先处理细胞24 h后,再给予金丝桃素刺激发现荧光强度并没有进一步下降. 结论 fluo-3 AM 是人RPE细胞钙离子良好的指示剂,金丝桃素能强力抑制钙离子内流,它作为治疗增殖性玻璃体视网膜病变的潜在药物可能是因为能抑制PKC活性和钙离子内流.
