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缺氧诱导因子-1α mRNA和蛋白在妊高征胎盘组织中表达定位
目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在妊高征胎盘组织细胞中的定位.方法:收取10例妊高征孕妇的胎盘组织,应用免疫组织化学方法,观察HIF-1α蛋白在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达;应用原位杂交的方法,观察HIF-1α mRNA在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达.结果:在妊高征胎盘中,HIF-1α蛋白主要表达在合体滋养细胞、血管内皮细胞的胞核和胞浆中;HIF-1α mRNA主要表达在合体滋养细胞和血管内皮细胞的胞浆中.结论:HIF-1α在妊高征胎盘组织中表达主要集中在胎盘的合体滋养细胞和血管内皮细胞.妊高征胎盘中合体滋养细胞和血管内皮细胞表达HIF-1α,可能与妊高征的发病及病理生理有关.
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缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子对高原脑水肿的研究进展
机体急进高原,会导致一系列病理生理改变,轻者出现高原反应,如恶心、头晕、食欲减退等,严重者出现急性高原病,其中急性高原反应为轻型,高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)和高原脑水肿(high altitude cerebral edema,HACE)为急性高原病的重型.HACE发病的主要诱因为缺氧,缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是人体和动物在缺氧条件下的重要转录因子,转录及调控多种和缺氧相关因子的表达,在启动缺氧应激和许多疾病的发病过程中发挥了重要作用[1].
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移居青海高原汉族HIF-1α基因rs11549467多态性与慢性高原病易感性
目的 探讨移居青海高原汉族HIF-1α基因rs 11549467单核苷酸多态性与慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)易感性.方法 收集移居青海高原汉族CMS男性患者和体检健康男性各120例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测HIF-1α基因rs11549467位点多态性,基因突变者采用测序验证,分析其与CMS的易感性.结果 HIF-1α基因rs11549467位点存在G、A两个等位基因和GG、GA两种基因型,病例组和对照组各基因型及等位基因频率比较均无显著性差异,P ＞0.05.结论 移居青海高原汉族人群HIF-1α基因rs11549467位点基因多态性可能与CMS易感性无关.
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硒代蛋氨酸对慢性低氧大鼠缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的影响
目的 明确硒代蛋氨酸(Se-Met)对慢性低氧大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,及对心肌细胞线粒体结构的影响.方法 将SD大鼠共分为9组,设常氧组1组,海拔3000m和5000m各4组:低氧对照组,低氧1、2、3补硒组,补硒组饲料中加入Se-Met,分别为参考摄入量的5、10、20倍.低氧模拟实验在低压氧舱进行(30d).用ELISA法测定各组大鼠血浆HIF-1α、VEGF水平;用电镜观察心肌细胞线粒体改变.结果 在海拔3000m和5000m的低氧对照组的HIF-1α水平高于补硒各组,HIF-1α水平随补硒量的增加而降低,5000m补硒各组下降明显.VEGF水平在海拔3000m组均低于常氧组,VEGF水平随补硒量增加而降低.补硒组大鼠心肌细胞线粒体的形态明显接近于常氧对照组.结论 Se-Met对慢性低氧大鼠HIF-1α、VEGF水平存在影响,能够减轻低氧对心肌细胞线粒体结构的影响.
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缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究
目的 了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)活化的影响. 方法 将肠上皮细胞分为常氧处理(正常对照)、缺氧(设缺氧1、2、6、12、24 h)及缺氧+寡霉素处理(分别用浓度为5、10、20、40μg/mL寡霉素处理1 h,再缺氧6 h).采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达,免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况. 结果 与正常对照(0.08±0.07)相比较,缺氧1 h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达(0.52±0.30)即显著升高(P＜0.05),6 h达峰值(2.37±1.08,P＜0.05),同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加.寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加,用5、10、20及40μg/,mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1.62±0.96、1.48±0.56、1.08±0.36及0.58±0.11,均较单纯缺氧6 h(2.67±1.38)显著降低(P＜0.05),HIF-1α向细胞核转位也被抑制. 结论 呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化,线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用.
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低血容量性休克大鼠缺氧诱导因子1α的表达及其在血管低反应性发生中的作用
目的 观察低血容量性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况及其与血管低反应性发生的关系.方法 将112只SD大鼠建立低血容量性休克模型后分为休克组(56只)、给药组(56只,于建立休克模型前4 h在大鼠腹腔内注射9μg/kg寡霉素).于伤后0.0(10～15 min)、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 h,采大鼠动脉血后处死大鼠取SMA,每组每时相点8只.采用离体血管环张力测定技术测定血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析法检测SMA血管组织中HIF-1α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达水平;连二亚硫酸钠还原法和硝酸还原酶法分别测定其全血一氧化碳(CO)浓度和血浆一氧化氮(NO)含量.另取8只大鼠作为正常对照组,不作处理,留取标本检测以上指标.结果 与正常对照组比较,休克组大鼠伤后早期(0.0～1.0 h)血管反应性增高,伤后0.5 h达峰值,血管环对NE的大收缩反应(Emax)增大,NE的50%大效应的负对数克分子浓度(pD2)减小;伤后0.5～1.0 h Emax值均高于正常对照组(P＜0.01);休克中、后期,血管反应性进行性下降,Emax减小、pD2增大,伤后4.0 h Emax低于正常对照组(P＜0.01).给药组伤后早期(0.0～1.0 h)血管反应性增高部分受抑制(P＜0.05),伤后0.5 h Emax值为(2.01±0.22)g/mg,明显低于休克组[(2.96±0.18)g/mg,P＜0.05].休克晚期给药组血管反应性轻度回升,与休克组伤后4.0、6.0 h比较,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).与正常对照组比较,休克组伤后HIF-1α mRNA的表达呈稳步增高,伤后4.0 h达峰值(P＜0.01);iNOS、HO-1 mRNA表达水平亦逐渐增高,分别于伤后2.0、4.0 h达峰值(P＜0.01).与正常对照组比较,休克组随着病情的发展全血CO浓度和血浆NO含量呈逐渐升高的趋势.与休克组相比,给药组全血CO浓度基本稳定在正常范围内,血浆NO含量也明显降低. 结论 低血容量性休克可引起血管反应性的双相变化.HIF-1α在血管低反应性的形成中发挥了重要作用.
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双链小片段干扰RNA抑制缺氧条件下乳鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达
目的构建含缺氧诱导因子1α(HIF-1α)小片段干扰RNA(siRNA)靶序列的U6启动子表达框结构,观察其对缺氧条件下乳鼠心肌细胞HIF-1α表达的影响. 方法分离培养乳鼠心肌细胞,分为常规培养液对照组、RNA干扰(RNAi)组(转染无效干扰序列Ⅳ)、RNAi抑制组(转染有效干扰序列并按下游引物不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组).设计、合成3对(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)含HIF-1α编码基因片段(正、反义)和1对(Ⅳ)随机序列(正、反义)的PCR下游引物.PCR法构建U6启动子表达框及相应正、反序列表达框,同时转染心肌细胞.每组每时相点5皿细胞.于缺氧1 h后,用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定其蛋白水平表达,免疫组织化学法检验干扰效果.缺氧6 h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1α m RNA的表达. 结果筛选出的佳抑制片段为Ⅱ组序列.缺氧1 h,对照组、RNAi组心肌细胞HIF-1α蛋白水平显著增高,Ⅰ、Ⅱ、ⅢRNAi抑制组HIF-1α蛋白水平较对照组明显降低,其中Ⅱ组降低为显著(P<0.01);缺氧6 h,RNAi组心肌细胞HIF-1α mRNA水平较常氧条件下明显增高(P<0.01);RNAi抑制Ⅱ组未见明显增高(P>0.05). 结论构建的HIF-1αⅡ组表达框能有效地抑制缺氧乳鼠心肌细胞HIF-1α表达.
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缺氧诱导因子1α对缺氧条件下大鼠心肌细胞糖酵解的影响
目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠心肌细胞糖酵解的影响.方法常规分离、培养大鼠心肌细胞,分为单纯缺氧组:使用无糖培养基在低氧混合气体(体积分数94%N2、5%CO2、1%O2)中培养;HIF-1α抑制组:先利用RNA干扰技术构建HIF-1α蛋白低表达的细胞模型,再作上述缺氧培养.两组细胞均设缺氧前(常规培养)及缺氧1、3、6、12、24 h 6个时相点,采用生物化学方法检测细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及培养上清液中乳酸(LA)的含量.结果(1)HK、PFK活性:与缺氧前比较,两组心肌细胞两酶活性均呈先升高后下降的变化趋势.单纯缺氧组两酶活性峰值分别为(159±13)、(298±44)U/g.HIF-1α抑制组两酶活性在缺氧1、3、6 h时均明显低于单纯缺氧组(P＜0.05或0.01),其峰值分别为(133±55)、(188±55)U/g.(2)LDH活性、LA含量:与缺氧前(92±12)U/g比较,单纯缺氧组细胞LDH活性缺氧后显著升高,6 h时达高峰(2 568±125)U/g(P＜0.01),随后逐渐下降;各时相点培养上清液中LA含量也成倍增加.HIF-1α抑制组细胞的LDH活性于缺氧3 h时达峰值(2 125±126)U/g,明显高于缺氧前(P＜0.01);培养上清液中LA含量亦较缺氧前增高(P＜0.01),但增幅较小.结论缺氧条件下大鼠心肌细胞中HIF-1α高表达是细胞糖酵解持续增强的直接原因,此为心肌细胞应对缺氧环境的重要内源性保护机制.
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慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者治疗前后血清缺氧诱导因子1α及甘胆酸的检测分析
目的:研究血清甘胆酸(CG)与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)检测在慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期患者的评估价值.方法:选择医院诊治的78例COPD急性发作期患者纳入观察组,另选取78名同期健康体检者纳入健康对照组.对比两组CG、HIF-1α表达,评估C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞三烯B4(LTB4)在患者病情诊断中的作用及其临床价值.结果:观察组患者治疗前CG和CRP分别为(11.45±1.28)mg/L和(28.68±3.63)mg/L,明显高于健康对照组的(2.12±0.62)mg/L和(4.89±1.27)mg/L,其差异均有统计学意义(t=57.937,t=5.634;P<0.05).观察组患者治疗后HIF-1α、IL-8和LTB4指标分别为(0.76±0.22)ng/ml、(36.88±4.26)pg/ml和(368.26±57.29)pg/ml,均显著低于治疗前的(1.04±0.27)ng/ml、(53.21±6.22)pg/ml和(553.25±62.03)pg/ml,其差异均有统计学意义(t=7.100,t=19.130,t=19.349;P<0.05).结论:CG和HIF-1α检测在COPD患者病情评估中具有重要参考价值,可为评估患者病情及诊疗方案提供依据.
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急慢性酗酒后脑组织Ngb、Hif-1α表达Na+,K+ -ATPase活性变化与TSAH的关系
目的 探讨急慢性酗酒后脑组织脑红蛋白(Ngb)、缺氧诱导因子1α(Hif-1α)表达和Na+,K+ -ATPase活性变化及与外伤性蛛网膜下腔出血(TSAH)的关系.方法 雄性SD大鼠146只,随机分为急、慢性模型两大组,每组再各分为灌酒打击、灌水打击及单纯灌酒3个组,其中各打击组于后一次灌胃后2h,用单摆式打击装置制作脑震荡模型;断颈处死大鼠,用免疫组化法观察脑组织Nsb、Hif-1α的表达、用分光光度法检测Na+,K+ -ATPase.结果 急、慢性灌酒打击组TSAH发生率分别为28.6%和82.4%;各灌酒打击和单纯灌酒组Ngb、Hif-1α-IOD值均显著高于各灌水打击组(P＜0.01);急性单纯灌酒绢2～4h Na+,K+-ATPas活性明显低于灌水打击组(P＜0.01);慢性单纯灌酒组2h Na+,K+ -ATPase活性高于急性灌酒组(P＜0.01),而低于灌水打击组(P＜0.05).结论 急慢性灌酒后,脑组织Ngb、Hif-1α均呈反应件增强,Na+,K+ -ATPase活性降低,酒精作用可能参与了TSAH的发生和死亡过程.
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VHL基因和HIF-1α在大肠癌组织中的表达及临床意义
为探讨VHL基因和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系,我们用免疫组织化学SP法检测165例大肠癌和20例癌旁组织中VHL、HIF-1α表达情况.并分析其表达与大肠癌中医证型、分化程度、临床分期、转移及预后的相关性.结果显示,VHL基因在165例大肠癌组织中的阳性表达率为21.8%,在20例癌旁组织中的阳性表达率为75.1%(P＜0.001);HIF-1α蛋白在165例大肠癌组织中的阳性表达率为75.2%,在20例癌旁组织中的阳性表达率为5.0%(P＜0.001);VHL基因的阴性表达与HIF-1α蛋白的阳性表达与大肠癌患者的中医证型、肿瘤分期、淋巴结转移、器官转移及预后有关(P＜0.05).结果表明,VHL基因表达下调和HIF-1α蛋白表达上调在大肠癌的侵袭、转移中发挥重要作用.
