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HIF-1α基因多态性与慢性高原病易感性的关系
目的:研究缺氧诱导因子1 α(HIF-1 α)的常见单核苷酸多态性C1772T、G1790A与慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)的易感性关系.方法:通过病例-对照研究,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测青海高原地区100例CMS患者和100例健康对照人群在HIF-1α基因C 1772T、G1790A位点的基因型分布,分析其与CMS易感性的关系.结果:病例组和对照组中,HIF-1α基因C1772T、G1790A位点等位基因及基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡.在HIF-1α基因C1772T位点检出CC、CT两种基因型,未见TT基因型,两组基因型频率及等位基因频率比较差异无显著性(P＞0.05);在HIF-1α基因G1790A位点检出GG、GA两种基因型,未见AA基因型,两组基因型频率及等位基因频率比较差异无显著性(P＞0.05).结论:缺氧诱导因子1α单核苷酸多态性C 1772T、G1790A可能与CMS无关.
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缺氧诱导因子1αPro582Ser基因多态性与2型糖尿病肾病相关性研究
目的：探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）Pro582Ser多态性与糖尿病肾病的关系。方法：收集244例2型糖尿病患者，用PCR-RFLP 技术检测 HIF-1α基因外显子1285 bp 位点多态性。结果：HIF-1α外显子1285 bp存在C/T单核苷酸多态性，使脯氨酸变为丝氨酸（Pro582Ser）；糖尿病患者与糖尿病肾病患者相比，该位点CT 杂合子频率较高（P＜0．05），Logistic 回归分析表明，高 HbA1c、低 HDL-c 是糖尿病肾病的高危因素，Pro582Ser 多态性未进入方程。结论：高 HbA1c、低 HDL-c 是糖尿病肾病的高危因素；HIF-1αPro582Ser多态性可能与2型糖尿病肾病相关，但仍需进一步探讨。
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缺氧诱导因子1α及环氧合酶-2的表达与食管鳞癌生物学行为的关系
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达及其与临床生物学行为之间的关系.方法:对78例手术切除的ESCC标本和10例正常的食管黏膜组织进行连续切片,用免疫组织化学方法检测HIF-1α、COX-2和用CD34标记的毛细血管蛋白的表达情况.查阅病历记录肿瘤的大小、病理分型、淋巴结转移等情况.结果:HIF-1α、COX-2在正常的食管组织中不表达或很微弱的表达,在ESCC组织中阳性率分别为59%、65%,HIF-1α、COX-2表达程度呈正相关;二者表达与食管癌的微血管密度相关;HIF-1α、COX-2蛋白的表达与ESCC细胞的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05),与性别、年龄、发生部位、肿瘤形态无关.结论:ESCC组织中HIF-1α和COX-2的表达增加,ESCC的不良生物学行为与HIF-1α、COX-2过表达导致肿瘤血管增加有关.
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颈椎病终板软骨组织中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α表达的相关性
目的:探讨颈椎病软骨终板组织中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法检测25例颈椎病患者和20例颈椎外伤患者(对照组)终板软骨组织中VEGF和HIF-1α的表达,并且对颈椎病患者终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达进行相关性分析.结果:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α阳性表达率分别为(28±12)%和(39±17)%.对照组VEGF及HIF-1α阳性表达率分别为 (43±14)%和(63±11)%;终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达均低于对照组(P<0.05);相关分析显示,颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达存在正相关性(r=0.86,P<0.05).结论:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达明显减少,HIF-1α对调节VEGF的表达起到关键性作用.
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低氧对人肺腺癌A549细胞生长的影响
目的:研究低氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549生长、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞技术观察低氧不同时间对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响.采用免疫细胞化学方法检测bcl-2和caspase-3表达.采用半定量RT-PCR法分析低氧对细胞内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的影响.结果:MTT结果显示低氧12、24、48 h后,A549细胞生长受到抑制.流式细胞技术检测显示低氧12、24、48 h后,G1/G0期的A549细胞增多,相应的S期细胞减少,同时A549细胞凋亡明显增多.免疫细胞化学结果显示随着低氧时间的延长,bcl-2表达减少,而caspase-3表达增加.RT-PCR检测HIF-1αmRNA的结果显示12、24、48 h低氧组HIF-1α mRNA水平均较相应的常氧组增加(P＜0.05).结论:低氧环境可抑制A549细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1/G0期,并促进细胞凋亡,其作用可能是由于低氧环境影响HIF-1α mRNA水平及通过调节bcl-2和caspase-3的表达诱导细胞凋亡而实现.
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HIF-1α、CD44在胃癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨缺氧诱导因子1α（ hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、CD44在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测184例胃癌组织中HIF-1α和CD44的表达，并分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 HIF-1α、CD44在胃癌组织中的阳性表达率分别为55．4％（102/184）、62．4％（116/184）；HIF-1α的表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关（ P＜0．05），CD44表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关（ P＜0．05）；相关分析结果显示，CD44和HIF-1α在胃癌组织中的表达呈正相关（ r＝0．71，P＝0．003）。多因素分析显示，HIF-1α阳性表达、CD44阳性表达、淋巴结转移和肿瘤浸润深度为胃癌的独立预后因素（ P＜0．05）。结论 HIF-1α、CD44在胃癌组织中的表达呈正相关且与胃癌预后密切相关。
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酒精性脂肪肝大鼠模型肝组织中HIFs/PPAR信号通路激活程度与脂质代谢的关系
目的:研究酒精性脂肪肝大鼠模型肝组织中HIFs/PPAR信号通路激活程度与脂质代谢的关系.方法:选择成年SD大鼠,通过酒精灌胃和高脂饮食的方式建立酒精性脂肪肝大鼠模型,取肝脏组织检测HIF-1α、PPARγ以及脂质代谢相关酶的含量,取血清检测脂质代谢指标和肝细胞损伤指标的含量.结果:(1)模型建立后1周、2周、3周和4周时,模型组大鼠肝脏中HIF-1α呈升高趋势、PPARγ呈降低趋势,且HIF-1α含量高于对照组、PPARγ含量低于对照组(P＜0.05);(2)模型组血清中apoCⅡ、apoCⅢ、α-GST、GLDH含量以及肝脏组织中FAT、FABP1、FAS、ACC、ACAT-2含量均显著升高(P＜0.05),且与HIF-1α呈正相关、与PPARγ呈负相关.结论:酒精性脂肪肝大鼠模型肝组织中转录因子HIF-1α含量异常升高、PPARγ含量异常降低,能够通过增加肝脏中脂质代谢相关酶的表达来造成脂质代谢异常、肝细胞损伤.
关键词： 酒精性脂肪肝 过氧化物酶体增殖物激活受体 缺氧诱导因子1α 脂质代谢 大鼠 -
缺氧诱导因子-1α的表达在大鼠急性一氧化碳中毒迟发型脑病中的作用
目的：探讨缺氧诱导因子‐1α（HIF‐1α）在急性一氧化碳中毒迟发型脑病（DEACM P）中的作用。方法90只雄性SD大鼠随机分为3组：DEACM P组，空气组（AC组）及空白对照组（BC组）。采用腹腔注射CO法复制DEACM P大鼠模型，选取中毒后第1、3、7、14、21、28天为6个时相点，应用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力，TUNEL法检测大鼠海马区锥体细胞凋亡情况，免疫组织化学染色法检测海马区HIF‐1α蛋白的表达情况。结果 DEACM P组大鼠与AC组及BC组比较，平均逃避潜伏期明显延长，第4象限运动时间缩短，差异均有统计学意义（P＜0．05）。DEACMP组大鼠海马区神经元凋亡指数于中毒后第3天开始升高，第7天时达到高峰，各时间点凋亡指数明显高于AC组及BC组。 HIF‐1α在DEACM P组大鼠海马区的表达于中毒后第1天时升高，第3天达到高峰，第28天仍有表达，而且各时间点表达均高于AC组及BC组（P＜0．05）。结论 HIF‐1α可通过诱导海马区神经元凋亡而参与DEACM P的发病。
关键词： 急性一氧化碳中毒迟发型脑病 细胞凋亡 缺氧诱导因子1α -
缺氧诱导因子-1α和p53在原发性肝癌中的表达及其与临床病理参数的相关性
缺氧诱导因子(HIF)-1α在大多数正常组织中检测不到,在缺氧、癌基因激活、抑癌基因失活、生长因子等因素的刺激下,HIF-1 α与另一亚单位HIF-1 β结合,作用于结构基因的调控序列,促进下游基因转录,使组织细胞对缺氧产生适应性调节.
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解偶联蛋白2和缺氧诱导因子1α在肺癌组织中的表达
目的 检测临床肺癌组织中解偶联蛋白2的表达与分布,并分析其与缺氧诱导因子1α在肺癌发生的关系.方法 通过荧光定量PCR方法检测肺癌和癌旁正常组织中解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1α的表达,同时应用免疫组织化学、Western blot方法检测解偶联蛋白2在肺癌和癌旁正常组织中的表达.结果 荧光定量PCR方法检测,肺癌组织中解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1αmRNA的表达约是癌旁正常组织的3倍,Western blot方法检测,解偶联蛋白2在肺癌组织中的表达量约是癌旁正常组织的2倍;免疫组织化学方法检测,解偶联蛋白2主要在细胞质中表达,在肺癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,且癌细胞的恶化程度与解偶联蛋白2的含量呈正相关.结论 解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1α在人肺癌组织中均有高表达,但两者无明显相关性.
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融合蛋白TAT-HIF-1α-PAS-B原核表达载体的构建、表达及纯化
目的 构建蛋白转导结构域TAT和人缺氧诱导因子1α PAS-B结构域融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 分别构建原核表达质粒pTAT-PAS-B、pET-PAS-B和pTAT-EGFP;在大肠杆菌BL21(DE3)pLyss内,以IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸(NiNTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化.结果 成功构建了PAS-B结构域的原核表达载体,经过优化表达和纯化条件,融合蛋白在IPTG诱导下获得特异性表达,纯化得到了高纯度的目的蛋白.结论 含人缺氧诱导因子1αPAS-B和TAT结构域融合蛋白的成功表达及纯化,为应用该融合蛋白调控体内HIF-1α的活性奠定了基础.
关键词： 原核表达系统 TAT蛋白转导结构域 缺氧诱导因子1α PAS-B结构域 -
缺氧诱导因子1α和2型谷氨酰胺酶在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和2型谷氨酰胺酶(glutaminase 2,GLS2)在结直肠癌中的表达,探讨其临床意义.方法 应用免疫组化法检测本院结直肠癌术后108例组织标本(其中23例含癌旁黏膜组织)中HIF-1α和GLS2的表达,分析二者的表达与临床病理参数的相关性;采用Spearman等级相关分析检测HIF-1α和GLS2表达的相关性,Kaplan-Meier 法分析结直肠癌中HIF-1α和GLS2的表达与患者预后的关系,Cox回归模型分析结直肠癌患者预后的影响因素.结果 结直肠癌组织中HIF-1 α和GLS2的表达均高于癌旁黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.01).HIF-1 α的表达与结直肠癌患者年龄、TNM分期、淋巴结转移、术后远处转移密切相关(P＜0.05),而GLS2的表达与结直肠癌患者年龄、浸润深度、术后远处转移密切相关(P＜0.05).HIF-1 α和GLS2的表达显著正相关(r=0.464,P＜0.01),且均与结直肠癌的预后有关,Cox回归分析显示TNM分期、术后远处转移及HIF-1α、GLS2的表达均是结直肠癌预后的独立影响因素(P＜0.05).结论 结直肠癌患者中HIF-1α、GLS2高表达预后均较低表达差,提示二者在结直肠癌的发生、发展中可能发挥重要作用.
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三白脂素-8抑制缺氧诱导因子-1α对肾癌细胞解偶联功能的影响
目的 观察三白脂素-8(Man A)抑制缺氧诱导因子1α(HIF-1α)后对肾癌细胞的生长是否有抑制作用,此作用是否与线粒体解偶联功能相关.方法 构建高表达HIF-1α的肾癌细胞模型,使用不同浓度ManA干预转染后的肾癌细胞(转染组)和单纯肾癌细胞(非转染组).MTT法检测细胞增殖;RT-PCR及ELISA法检测细胞内HIF-1α、UCP2的表达;荧光分光光度计检测细胞内ATP水平;提取细胞线粒体,分光光度计检测细胞线粒体mPTP、△Ψm的变化情况.结果 Man A干预细胞后,细胞内HIF-1α、UCP2的表达,ATP水平在高剂量组显著下降(P＜0.05).Man A抑制了肾癌细胞的增殖,且在中、高剂量出现显著下降(P＜0.05).Man A可提高肾癌细胞线粒体mPTP开放程度,并导致转染组所有剂量组,非转染组中高剂量组△Ψm降低(P＜0.05).结论 Man A可显著抑制肾癌细胞增殖,并影响其线粒体解偶联功能.
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六味地黄汤通过缺氧诱导因子1α途径对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的抑制作用
目的 探讨六味地黄汤对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在慢性肾间质纤维化中的表达及作用.方法 选择清洁级雄性SD大鼠30只,随机分为分假手术组、模型组和六味地黄汤组各10只.假手术组打开腹腔暴露肾脏,但不切除肾脏.模型组、六味地黄汤组大鼠均在无菌条件下进行5/6肾切除术复制慢性肾间质纤维化模型,术后8周,比较3组肾脏组织病理变化,HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)在肾组织中的蛋白表达水平.结果 与六味地黄汤组比较,模型组肾组织中HIF-1α、CTGF蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05).结论 HIF-1α通过调节CTGF的表达促进肾间质纤维化,而六味地黄汤可降低HIF-1α的表达,从而减轻肾间质纤维化.
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HIF1A基因两个位点多态性与夏尔巴人群高原低氧适应关系的研究
目的 研究西藏高原夏尔巴人群缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,alpha subunit;HIF1A)基因(HIF1A)第12外显子1772(C→T)、1790(G→A)多态性与高原低氧适应相关性.方法 选取世居西藏高原夏尔巴族148人及广东汉族健康个体90人的血样,提取白细胞基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)检测HIF1A基因第12外显子1772(C→T)、1790(G→A)的单核苷酸多态性,分析其基因多态性特征.结果 1772(C→T) CC、CT和TT基因型频率在夏尔巴人组与汉族对照组分别为14.19%和16.67%、39.19%和41.11%、46.62%和42.22%,两组间比较差异无统计学意义;1790(G→A) GG、GA和AA基因型频率在夏尔巴人组与汉族对照组分别为57.43%和75.56%、37.84%和21.11%、4.73%和3.33%,夏尔巴人组的GG基因型频率较汉族对照组的低(P＜0.01),而GA基因型频率高于汉族对照组(P＜0.01).组合基因型分布,夏尔巴人CC+GA、CT+AA、TT+GA和TT+AA的组合基因型频率高于汉族组.结论 HIF1A基因1790(G→A)多态性与夏尔巴人群高原低氧适应存在相关性,GA、AA基因型可能对低氧适应有利,值得进一步深入探讨.
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PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制研究
目的 探讨PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在博来霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化中的作用机制.方法 56只C57 BL/6小鼠随机分为对照组和实验组,实验组通过气管内滴注BLM(2.5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组在相同条件下气管内滴注等量0.9％氯化钠溶液.在造模第21 d取小鼠肺组织标本行HE和Masson染色分析肺组织形态学变化;运用Ashcroft评分以及检测羟脯氨酸含量评估肺纤维化程度;Western blot方法检测PI3 K/Akt/HIF-1α信号通路的变化以及肺泡表面活性物质(Pro-SPC)蛋白含量;实时定量PCR(RT-PCR)法检测胶原蛋白3(Collagen3) mRNA表达水平;免疫组织化学法检测肺组织内Collagen3蛋白和细胞凋亡数的变化.结果 实验组与对照组相比,肺泡炎和肺纤维化程度明显加重,肺组织内充填大量炎细胞及纤维病灶.试验组Ashcroft评分和羟脯氨酸含量均较对照组显著升高(P＜0.05).同时,PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在实验组肺内明显活化,并伴有Pro-SPC蛋白生成减少,Collagen3蛋白含量及mRNA水平增加,以及肺内细胞凋亡数明显增加.结论 PI3K/Akt/HIF-1α信号通路的异常活化促进了肺纤维化形成.
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雷帕霉素及去铁敏对缺血缺氧创面愈合的影响
目的 探讨雷帕霉素及去铁敏对缺血缺氧创面愈合的影响及其作用机制.方法 SPF级雄性成年SD大鼠40只,体质量(300±20)g,于背部制备缺血缺氧创面模型;将其随机分为4组(n=10),分别为空白对照组(A组)、去铁敏干预组(B组)、雷帕霉素干预组(C组)、去铁敏+雷帕霉素共同干预组(D组).模型制备后3、6、9d,A、B、C、D组分别腹腔注射生理盐水、去铁敏(10mg/kg)、雷帕霉素(3mg/kg)、去铁敏(10mg/kg)+雷帕霉素(3mg/kg).模型制备后观察创面愈合情况并记录愈合时间;于创面完全愈合后第2天切取创面愈合组织,采用实时荧光定量PCR及Western blot检测创面组织中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、VEGF mRNA及蛋白的表达.结果 各组大鼠均成活至实验完成,创面均愈合;其中A、B、D组创面愈合时间均较C组明显缩短(P＜0.05);A、B、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量PCR检测示,C、D组mTOR mRNA表达较A、B组明显下调(P＜0.05),A、B组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).B、D组HIF-1α、VEGF mRNA表达较A、C组明显上调,A组较C组表达上调,比较差异有统计学意义(P＜0.05);B、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测示,C、D组mTOR蛋白相对表达量较A、B组明显下调(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C组HIF-1α蛋白相对表达量明显高于D组(P＜0.05),A、B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).B、C、D组VEGF蛋白相对表达量较A组明显下调,D组低于B、C组,C组低于B组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 去铁敏可促进大鼠缺血缺氧创面愈合,而雷帕霉素作用相反;可能与慢性缺血缺氧创面中存在mTOR与HIF-1信号调节通路有关.
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缺氧诱导因子1α参与异氟醚延迟性预处理减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤的研究
目的 异氟醚预处理能对大鼠肾脏发挥急性期缺血保护作用,但急性期保护作用仅能维持2～3 h.探讨异氟醚延迟性预处理是否能减轻.肾脏缺血再灌注损伤,以及缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)是否参与调节该保护作用. 方法 取雄性C57BL/6小鼠52只,体重20～25 g,随机分为4组(n=13):对照组(A组)、PBS加异氟醚预处理组(B组)、无意义小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)加异氟醚预处理组(C组)和HIF-1α siRNA加异氟醚预处理组(D组).气体暴露前24 h C、D组小鼠经尾静脉分别给予含有50μg无意义siRNA或HIF-1α siRNA的无RNA酶的PBS 1 mL;A、B组给予等体积PBS.B、C、D组给予含1.5%异氟醚和25%O_2的气体持续吸入2 h,A组仅吸入含25%O_2的气体2 h.气体暴露后24 h,采用Western blot技术检测肾脏组织中HIF-1α和促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)蛋白的表达;制备肾缺血再灌注损伤,于再灌注后24 h检测血清肌酐(serum ereatinine,SCr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,并观察肾组织病理学变化. 结果 与A组比较,B、C组HIF-1α和EPO蛋白表达明显增加(P＜0.01),SCr和BUN水平以及肾小管评分明显降低(P＜0.01);D组HIF-1α蛋白表达及SCr、BUN水平较A组明显下降(P＜0.01).与B、C组比较,D组HIF-1α和EPO蛋白的表达明显下降(P＜0.01),SCr和BUN水平以及肾小管评分明显增加(p＜0.01),肾组织损伤明显加重. 结论 异氟醚延迟性预处理能明显减轻肾缺血再灌注损伤,HIF-1α参与调控异氟醚的保护作用.
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皮质神经元缺氧缺血后缺氧诱导因子1α表达与细胞外调节蛋白激酶信号通路的关系
目的 探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia.inducible factor 1α,HIF-1α)及细胞外调节蛋白激酶1/2(extra-cellular signal-regulated kinasel/2,ERK1/2)在体外培养的胎鼠大脑皮质神经元缺氧缺血再灌注后变化的趋势及其相互关系. 方法 取15只16～18 d孕龄SD大鼠的大脑皮层,进行皮质神经元原代培养,取培养5 d的原代神经元建立氧糖剥离(oxygen and glucose deprivation,OGD)模型.实验分为实验组1:OGD模型制备后,更换培养液为含葡萄糖的神经元完全培养基,以形成再灌注;取再灌注0、2、4、8、12、24 h观察;对照组1:正常培养液孵育的神经元;实验组2:U0126预处理神经元后制备OGD模型,于再灌注后4、8 h观察;对照组2:DMSO预处理神经元后制备OGD模型,余同实验组2.应用Western blot定量测定各组HIF-1α、VEGF蛋白及ERKl/2、p-ERK1/2的表达变化,SABC免疫细胞化学法检测p-ERK1/2、HIF-1α蛋白表达及分布情况. 结果 培养5 d的皮质神经元突起间互相连接成网状.实验组1 HIF-1α、VEGF蛋白表达逐渐升高,8h表达量高,12 h后逐渐下降,与对照组1比较差异有统计学意义(P<0.05).各时间点实验组1与对照组1 ERK1/2蛋白表达无明显差异(P>0.05).实验组1 P-ERK1/2蛋白表达在2 h时开始增加,4 h达高峰,8 h开始下降,与对照组1比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组2 p-ERK1/2蛋白表达下降,HIF-1α及VEGF蛋白表达也随之下调,与对照组2比较差异均有统计学意义(P<0.05).各时间点实验组2和对照组2 ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).免疫细胞化学染色显示神经元黄棕色着色减弱,p-ERK1/2、HIF-1α表达下降. 结论 HIF-1α及其靶基因VEGF蛋白在OGD再灌注后的皮质神经元表达具有一定时间规律性,抑制ERK1/2信号通路后这两个蛋白表达均下降,提示该通路在神经元OGD后诱导HIF-1α及VEGF的调控中起重要作用.
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新生鼠缺氧缺血性脑损伤时三磷酸肌醇激酶信号通路与缺氧诱导因子1α的调节
目的 探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白的表达及三磷酸肌醇激酶(phosphoinositid 3-kinase/Akt,P13K/Akt)信号通路的激活,推测P13K/Akt信号通路与神经元HIF-1α表达调节的关系,以期更确切地阐明P13K/Akt在发育期脑缺氧缺血性损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)神经元HIF-1α表达中的作用.方法 10d龄SD大鼠56只,分为正常对照组(n=12)、假手术组(n=12)、实验组(n=24)、wortmannin干预组(n=4)和溶剂干预组(n=4).实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气(92%N2、8%O2)缺氧2.5 h,即为HIBD模型;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理;正常对照组不作任何处理.wortmannin干预组和溶剂干预组分别在侧脑室内注射wortmannin和DMSO、PBS 3 μL,30 min后制备HIBD模型.分别于建模后4、8及24 h处死动物取脑组织,应用免疫组织化学法检测HIF-1α、Akt蛋白的分布和表达,Western blot检测HIF-1α、Akt及P-Akt蛋白含量.结果 实验组HIF-1α蛋白表达在术后4h明显升高,8 h达高峰,24 h后下降;p-Akt蛋白于术后4h明显升高,8 h后下降.正常对照组各时间点HIF-1α和p-Akt均有极少量弱阳性表达.实验组各时间点HIF-1α蛋白表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);实验组p-Akt于4 h和8 h明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Akt蛋白表达随术后时间的延长无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后4 h wortmannin干预组的HIF-1α蛋白的表达明显下降,与溶剂干预组及实验组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 发育期HIBD时,可激活P13K/Akt信号通路,并诱导HIF-1α表达增加,可针对P13K/Akt信号通路和HIF-1α寻找新生儿HIBD新的治疗靶点.
