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缺氧微环境中HIF-1α基因沉默的人绒毛膜癌细胞系JE G-3侵袭和迁移能力观察
目的 观察缺氧微环境中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)沉默的人绒毛膜癌细胞系JEG-3的侵袭、迁移能力.方法 取对数生长期JEG-3细胞分为A、B、C、D组,其中A、B、C组置于体外缺氧微环境培养,D组不处理.当细胞融合到60%~70%时A、C组分别用HIF-1αsiRNA和无关序列转染,B、D组不做处理.采用Transwell细胞侵袭试验及划痕试验检测各组细胞侵袭能力和迁移能力.采用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测各组细胞HIF-1α、CXCR4的mRNA和蛋白表达.结果 A组细胞的侵袭和迁移能力明显低于其余3组(P均<0.05),B、C组细胞侵袭和迁移能力显著高于D组(P均<0.05).A组细胞中HIF-1α、CXCR4的mRNA和蛋白表达均低于其余3组(P均<0.05),B、C组细胞HIF-1α蛋白、CXCR4 mRNA和蛋白表达均高于D组(P均<0.05).结果 缺氧微环境中HIF-1α沉默的JEG-3细胞侵袭、迁移能力下降,其机制可能与HIF-1α下调细胞CXCR4表达有关.
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索拉非尼对肝癌细胞中PD-L1表达的影响及机制
目的 探讨索拉非尼对肝癌细胞中程序性死亡分子配体1(PD-L1)表达的影响及可能的机制.方法 分别将0、2.5、5、10 μmol /L 索拉菲尼培养液作用于肝癌细胞株HepG2,Real-time PCR和Western blotting法检测不同浓度索拉菲尼处理后HepG2细胞中PD-L1和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平.分别用pEGFP-N1-HIF-1α(pEGFP-N1-HIF-1α组)、shRNA-HIF-1α(shRNA-HIF-1α组)和对照质粒pEGFP-N1、shRNA-control(pEGFP-N1组、shRNA-control组)转染HepG2细胞,检测各组HIF-1α、PD-L1 mRNA及蛋白的表达.结果 索拉菲尼干预后,HepG2细胞中PD-L1和HIF-1α mRNA及蛋白的表达下调,呈浓度依赖性(P均<0.05).与pEGFP-N1组比较,pEGFP-N1-HIF-1α组PD-L1、HIF-1α mRNA及蛋白表达水平升高(P均<0.01);与shRNA-control组比较,shRNA-HIF-1α组PD-L1、HIF-1α mRNA及蛋白表达水平降低(P均<0.01).结论 索拉非尼可通过抑制HIF-1α信号通路抑制肝癌细胞中PD-L1的表达.
关键词： 肝肿瘤 索拉非尼 程序性死亡分子配体1 缺氧诱导因子1α -
急性低压缺氧脑损伤大鼠脑组织海马区HIF-1α时序性变化及意义
目的：观察急性低压缺氧大鼠脑组织海马区缺氧诱导因子1α( HIF-1α)表达的时序性变化,探讨其与缺氧性脑损伤的关系。方法将100只成年雄性SD大鼠随机分为常氧对照组、低压缺氧6 h组、低压缺氧12 h组、低压缺氧18 h组和低压缺氧24 h组,每组20只。各低压缺氧组置于低压氧舱模拟海拔7000 m高原环境。采用HE染色法观察各组脑组织海马区形态学改变,检测脑组织含水量,一氧化氮合酶( NOS)活性及NO含量,反转录聚合酶链反应( RT-PCR)检测HIF-1α mRNA,免疫荧光化学染色法定位HIF-1α蛋白。结果①与常氧对照组比较,各低压缺氧组脑组织海马区神经细胞均有不同程度的水肿、坏死或凋亡,细胞质不规则红染,核仁碎裂或消失,且海马各区损伤程度不同,以 CA1区为严重；②与常氧对照组比较,各低压缺氧组脑组织含水量均显著上升(P均<0.01),且随缺氧时间的延长呈递增趋势；③与常氧对照组比较,各低压缺氧组脑组织NOS活性均显著升高(P均<0.01)；除低压缺氧6 h组外,其余各组脑组织NO含量均随缺氧时间的延长而显著增加(P均<0.01)；④常氧对照组中未检测到HIF-1αmRNA表达,各低压缺氧组HIF-1αmRNA相对表达均显著增加,且具有时间依赖性(P<0.01或<0.05)；常氧对照组脑组织海马各区均未见HIF-1α蛋白阳性标记的绿色荧光,低压缺氧损伤后先在部分神经细胞胞质中出现微弱荧光信号,随着缺氧时间的延长荧光强度逐渐增强,并明显呈向胞核聚集的趋势。结论急性低压缺氧可导致脑含水量升高,引发脑水肿,且损伤程度随缺氧时间的延长而加重；HIF-1α的应激性表达对急性低压缺氧性脑损伤有保护性调控作用。
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人视网膜母细胞瘤组织中的血管生成拟态观察及相关调控因子的作用
目的：观察人视网膜母细胞瘤（ RB）中血管生成拟态（ VM）形成情况及来源，探讨相关调控因子的作用。方法收集人RB组织的石蜡切片，采用HE染色、过碘酸-Schiff（PAS）/CD34双重染色观察RB中VM形成情况，计算血管生成拟态密度（VMD）；采用免疫组织化学方法检测ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）、造血干细胞抗原CD133（AC133）、CD34表达，检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及其下游因子EphA2、基质金属蛋白酶（MMP）-2表达。采用Pearson相关性分析法分析VMD与上述指标的关系。结果 HE染色显示部分RB组织中除有内皮细胞衬覆的血管外，还可见肿瘤细胞围成的不规则管腔（内有红细胞）；PAS/CD34双重染色显示43份RB组织中VM阳性23例（53．48％），VMD为（26．52±8．72）个/HP，VM阳性率与RB分化程度呈负相关（r＝-0．532）、与临床分期无明显相关。 VM阳性RB组织中ABCG2阳性细胞数显著多于阴性组织中（P＜0．01），VM阳性组织中部分肿瘤细胞AC133表达阳性、VM阴性组织中未见AC133表达，所有RB组织中仅血管内皮细胞CD34阳性表达。 HIF-1α、EphA2、MMP-2在VM阳性组织中的表达均显著高于阴性组织（P均＜0．01），VMD与三者表达均呈正相关（P均＜0．01，r分别为0．694、0．630、0．795）。结论低分化RB组织中存在VM，其管壁构成可能主要来源于ABCG2阳性的肿瘤干细胞，HIF-1α及其下游因子EphA2、MMP-2表达上调可能促进VM形成。
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HIF-1α对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨
目的 观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 构建并筛选HIF-1 α基因的RNAi表达质粒,以脂质体LipofectamineTM 2000介导转染MCF-7细胞.转染后48h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中HIF-1α mRNA的转录水平,筛选有效的HIF-1 αRNAi质粒；CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测顺滑蛋白(SMO)mRNA表达.结果 成功构建含HIF-1α短发夹状RNA(shRNA)1～4的RNAi表达质粒,其中HIF-1 αshRNA-4干扰抑制效率为74％,干扰效果强(P均＜0.05).HIF-1 αshRNA-4干扰48、72、96 h后,MCF-7细胞的生长抑制率明显升高(P均＜0.05).HIF-1αshRNA-4转染后MCF-7细胞SMO mRNA的相对表达量为0.56 ±0.06,低于转染前的1.07 ±0.16(P ＜0.05).结论 HIF-1α表达可促进乳腺癌细胞增殖,可能与其参与调控SMO的表达有关.
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HIF-1α基因3'非编码区多态性与胰腺癌发生发展的相关研究
目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因3'非编码区多态性与胰腺癌发生、发展的关系.方法 以病例对照研究方法,采用聚合酶链扩增(PCR)和DNA序列测定分析技术,对291例胰腺癌患者(病例组)和247例健康对照者(对照组)的HIF-1α基因多态性位点进行特异扩增检测,分析HIF-1α3'非编码区SNP位点rs2057482基因型分布与胰腺癌发病风险的关系和对胰腺癌患者临床病理特征的影响.结果 HIF-1α基因rs2057482位点C/C基因型在病例组和对照组的频率分别为73.5％和61.9％,rs2057482位点C/T+ T/T在病例组和对照组的频率分别为26.5％和38.1％,两者差异有统计学意义(P＜0.01).携带C/C基因型者患胰腺导管腺癌的危险性是携带纯合C/T+ T/T基因型者的1.684倍(95％ CI:1.242 ～2.314).通过Logistic回归分析,胰腺癌中C/C基因型患者生存时间为(14.0±2.1)个月,低于C/T+ T/T基因型患者的(25.2±6.3)个月(P=0.01),且该位点在是否淋巴结转移者间基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HIF-1 α基因3'非编码区rs2057482位点的单核苷酸多态性在胰腺癌发生、发展过程中发挥作用.
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肝癌组织中Glut1与HIF-1α表达的关系及临床意义
目的 探讨肝细胞癌组织中葡萄糖转运蛋白1(Glut1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况及其临床意义,并分析两者的相关性.方法 用免疫组织化学Envision法检测45例肝细胞癌、11例正常肝组织中的Glut1和HIF-1α表达情况.结果 Glut1和HIF-1α在肝癌组织中的阳性率明显高于正常肝组织(P＜0.05).在肝癌组织中,Glut1和HIF-1α表达均与肿瘤大小、临床分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓有关(P＜0.05).肝癌组织中Glut1与HIF-1α表达呈正相关(r=0.583,P＜0.01).结论 Glut1和HIF-1α异常表达与肝癌的发生、发展有一定关系.HIF-1α可能通过上调Glut1表达促进肝细胞癌发生.
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HIF-1α、MUC1和MMP-9在子痫前期胎盘组织中的表达及意义
目的 探讨子痫前期患者胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factors-1α,HIF-1α)、黏蛋白1(Mucin1,MUC1)和基质金属蛋白酶-9(Matrix Metall oproteinase-9,MMP-9)的表达及意义.方法 采用免疫组化ABC法和Western Blot法检测30例正常晚期妊娠孕妇(对照组)和50例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度22例、重度28例)胎盘组织中HIF-1α、MUC1和MMP-9的蛋白定位和表达.结果 HIF-1α主要在胎盘绒毛合体滋养细胞表达;轻、重度子痫前期组胎盘组织中HIF-1α的表达均高于对照组(P ＜0.01);MUC1主要表达于胎盘合体滋养细胞,子痫前期重度组MUC1表达显著高于轻度组及对照组(P ＜0.01);MMP-9在胎盘合体滋养细胞表达,轻度、重度子痫前期组均低于对照组(P＜0.01),差异有统计学意义.轻度与重度子痫前期组之间MMP-9的表达差异无统计学意义(P＞0.05);重度子痫前期组HIF-1 α的表达与MUC1呈正相关(P＜0.01),而MUC1的表达与MMP-9呈负相关(P＜0.01).结论 HIF-1α、MUC1、MMP-9共同参与子痫前期的病理生理改变,并与病情严重症程度有一定关系.
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肾细胞癌组织中缺氧诱导因子1α和环氧化酶-2的表达
目的 探讨肾细胞癌组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COx-2)的表达及其临床价值.方法 采用免疫组化S-P法检测50例肾细胞癌和25例癌旁正常肾脏组织中HIF-1α和COX-2的表达,并分析两者与肾细胞癌临床病理特征的关系.结果 肾细胞癌组织中HIF-1 α和COX-2的阳性表达率分别为72.00％、74.00％,均高于癌旁正常膀胱组织的8.00％、12.00％(P均＜0.05).肾细胞癌组织中HIF-1 α和COX-2的表达与其淋巴结转移、病理分化程度和临床分期有关(P均＜0.05).肾细胞癌组织中HIF-1α和COX-2的表达呈正相关关系(r=0.544,P＜0.05).结论 肾细胞癌组织高表达HIF-1α和COX-2,可能促进肾细胞癌的发生发展,两者可以作为靶向治疗的新靶点和预后评估指标.
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HIF-1α及VEGF在食管癌组织中的表达及其与放疗疗效之间的关系
目的 研究HIF-1α与VEGF在食管癌组织中的表达及与放射治疗疗效之间的关系.方法采用PCR和Western Blot法分析放疗前食管癌患者癌组织中HIF-1α与VEGF的mRNA和蛋白表达水平.采用6 MV-X线,常规分割放疗.分割剂量为2Gy/次,1次/d,5次/周.总剂量DT 60～70 Gy.结果36例食管癌患者癌组织中HIF-1 αmRNA表达阳性者21例,蛋白表达量为0.56±0.03;VEGF mRNA表达阳性者17例,蛋白表达量为0.74±0.02.HIF-1α与VEGF在癌组织中无论是mRNA还是蛋白质表达均呈正相关(r =0.887、0.854,P＜0.01).所有患者放疗有效率为61.1%.两者高表达者放疗疗效差.结论HIF-1α与VEGF在食管癌患者癌组织中均明显表达增加,两者与食管癌的发生、发展密切相关,与放疗疗效密切相关.
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血清miR-155及缺氧诱导因子1α的表达对急性脑梗死的诊断价值
目的 探讨血清miR-155及其靶基因缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor 1α,HIF1A)与急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)的相关性,探寻与ACI诊断及治疗有关的潜在血清生物标志物.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)法检测ACI患者和健康对照组血清miR-23b、miR-106b、miR-130a、miR-155和miR-425的表达水平,使用miR-Base和TargetScan数据库推测靶基因,并应用双荧光素酶报告和蛋白质印迹分析的办法验证,应用多变量Logistic回归分析等进行分析.结果 与健康对照组相比,ACI患者血清miR-155水平显著上调(P<0.05);经验证HIF1A是miR-155的靶基因;ACI患者血清HIF1A mRNA的表达水平显著下调(P<0.05),与miR-155的表达呈显著负相关(P<0.05);单独或联合存在的miR-155高表达和HIF1A mRNA低表达均与ACI患者的高总胆固醇(P<0.05)、高LDL(P<0.05)和低HDL(P<0.05)有显著相关性;此外,高表达的miR-155(P<0.05)、低表达的HIF1A mRNA(P<0.05),或者高miR-155和低HIF1A mRNA的联合表达都可能是检测ACI的指标.结论 血清miR-155上调及其靶基因HIF1A的下调与ACI具有相关性,可能对开发针对ACI的miRNA定向诊断有参考意义.
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雷帕霉素对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 探讨雷帕霉素对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion iniury,RIRI)的保护作用和机制.方法 75只SPF级健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组、实验对照组、实验组,每组25只.实验对照组和实验组行前房灌注建立RIRI模型.实验组在前房灌注前2h按2 mg·kg-1剂量腹腔注射雷帕霉素,实验对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水和DMSO.分别在再灌注后0h、6h、12 h、24 h、48 h取3组视网膜标本,HE染色法观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)形态及测量视网膜内层厚度;TUNEL法检测视网膜组织中凋亡细胞的表达;Real-time PCR检测缺氧诱导因子1 α(hypoxia-inducible factor 1 α,HIF-1 α)mRNA在视网膜组织的表达水平.结果 再灌注后0h,实验组视网膜内层厚度为(137.55±7.76) μm,视网膜水肿较实验对照组轻,实验对照组视网膜内层厚度为(162.26±6.41)μm,且实验组RGC空泡化现象较少;再灌注6h以后实验组视网膜内层厚度均较实验对照组厚(均为P＜0.05).实验组再灌注后12h、24h、48 h的细胞凋亡情况明显低于实验对照组(均为P＜0.05).再灌注后0h、6h、12 h、24 h、48 h实验组视网膜组织中HIF-1α mRNA表达水平较实验对照组降低(均为P ＜0.05).结论 雷帕霉素对RIRI具有保护作用,HIF-1α表达水平的下调可能与该作用有关.
关键词： 雷帕霉素 Wistar大鼠 缺氧诱导因子1α 视网膜缺血-再灌注损伤 细胞凋亡 -
Rac1和HIF-1在激光诱导小鼠脉络膜新生血管模型组织中的表达
目的 研究Rac1和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)在激光诱导实验性小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型组织中的表达及意义.方法 用532 nm激光诱导小鼠CNV 模型,分别在光凝后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d 行荧光素眼底血管造影后处死小鼠,摘除眼球制作标本,行病理切片观察及免疫组织化学检测Rac1和HIF-1α蛋白在 CNV 组织中的表达.结果 正常小鼠视网膜脉络膜组织未见Rac1和HIF-1α蛋白阳性表达.激光诱导的小鼠 CNV 组织形成过程中均有 Rac1和 HIF-1α蛋白的表达,激光光凝早期二者表达均增高;光凝后1 d即有明显的阳性表达,二者的阳性表达率分别是11.21% 和24.80%;光凝后3～7 d 均达到高峰,Rac1 蛋白的阳性表达率分别为 34.58% 和53.35%,而 HIF-1α蛋白的阳性率为33.05% 和50.35%;光凝后14 d,二者的表达均下降,阳性率分别为25.50% 和31.97%;光凝后28 d,阳性率分别为9.32% 和11.26%;二者表达呈显著正相关(r＝0.943,P=0.016).结论 Rac1和 HIF-1α在CNV组织中存在高表达,且二者表达密切相关.
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血管生成相关因子在脉络膜黑色素瘤中的表达
背景 血管生成与肿瘤的发生之间有着密切的关系,目前对脉络膜黑色素瘤的发生发展过程与缺氧及血管生成相关因子相互关系的研究尚属少见.目的 研究血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在脉络膜黑色素瘤中的表达及其相互之间的关系.方法 收集青岛大学医学院附属医院眼科病理室保存的脉络膜黑色素瘤标本44例和眼睑色素痣石蜡标本16例,应用兔抗人HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF多克隆抗体,采用免疫组织化学SP法测定HIF-1α、iNOS、COX-2及VEGF在脉络膜黑色素瘤组织及眼睑色素痣中的表达并进行比较,评价4种蛋白与脉络膜黑色素瘤临床病例特征的关系,并对4种蛋白在脉络膜黑色素瘤中表达的相互关系进行研究.结果 脉络膜黑色素瘤组织中VEGF、HIF-1α、iNOS、COX-2的阳性表达率均明显高于眼睑色素痣组织,差异均有统计学意义(x2 =6.580、4.105、8.350、13.240,P＜0.05);VEGF蛋白在较大体积肿瘤中的表达明显高于体积较小的肿瘤,差异有统计学意义(x2=9.389,P＜0.05),但VEGF蛋白在不同病理分型及不同浸润深度肿瘤中的表达差异均无统计学意义(x2=1.186、5.398,P＞0.05)；HIF-1α在脉络膜黑色素组织中的表达与肿瘤体积大小、病理分型有关,差异均有统计学意义(x=8.664、6.622,P＜0.05),但其与肿瘤的浸润深度无关,差异无统计学意义(x2=4.914,P＞0.05)；iNOS蛋白的表达与肿瘤体积大小有关(x2=8.609,P＜0.05),但与病理类型及浸润深度无关,差异均无统计学意义(x2=4.789、4.309,P＞0.05)；COX-2蛋白的表达在不同体积的肿瘤中明显不同,差异有统计学意义(x2=7.320,P＜0.05),而COX-2蛋白在不同病理分型及浸润深度的肿瘤组织中的表达量差异均无统计学意义(x2=2.772、2.103,P＞0.05).HIF-1α、iNOS、COX-2的表达量与VEGF表达均呈显著正相关(r=0.943、1.000、0.986,P＜0.05)；COX-2与iNOS表达量之间、HIF-1α与iNOS表达量间及HIF-1α与COX-2的表达量间均呈明显正相关(r=0.986、0.943、0.986,P＜0.05).结论 HIF-1α、iNOS、COX-2在脉络膜黑色素瘤中表达升高,其表达水平与VEGF相关,提示3种基因对脉络膜黑色素瘤的血管生成均有一定作用,可通过该作用促进肿瘤组织的生长.
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曲安奈德对缺氧条件下培养人RPE细胞HIF-1α及VEGF表达的影响
目的 探讨曲安奈德(TA)对体外缺氧培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)合成的影响.方法 研究人RPE细胞分别在150 μmol/L CoCl2+0 μh/mL TA(0μg/mL TA组)、150μmol/L CoCl2+50 μg/mL TA(50μg/mL TA组)和150 μmol/L CoCl2+200斗g/mL TA(200μg/mL TA组)的培养条件下,通过RT-PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达,使用Western blot检测其蛋白水平.结果 与0μg/mL TA组相比,50μg/mL TA组及200μg/mL TA组中VEGF mRNA及蛋白的表达明显下降,差异均具有统计学意义(P＜005),但HIF-1α mRNA及蛋白的表达无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TA对缺氧条件下人RPE细胞HIF-1α表达无影响,但能有效地抑制VEGF的表达,对缺血性视网膜病变新生血管形成具有防治作用.
关键词： 曲安奈德 缺氧诱导因子1α 血管内皮生长因子 人视网膜色素上皮细胞 缺氧 -
伊马替尼敏感及耐药K562细胞P-糖蛋白、缺氧诱导因子和鞘氨醇激酶表达的比较
目的:比较伊马替尼敏感及耐药K562(K562/Ima)细胞P-糖蛋白、缺氧诱导因子1α和鞘氨醇激酶表达的差异.方法:取对数生长期的K562和K562/Ima细胞,采用不同质量浓度的伊马替尼分别处理48 h,应用MTT法计算耐药倍数;另取上述2种细胞,分别采用Western blot、RT-PCR及同位素掺入等方法检测2种细胞中P-糖蛋白、缺氧诱导因子1α和鞘氨醇激酶的表达.结果:相对于K562细胞,K562/Ima细胞的耐药倍数为24.在K562/Ima细胞中,P-糖蛋白、缺氧诱导因子1α和鞘氨醇激酶的表达均高于K562细胞.结论:K562/Ima的耐药机制与P-糖蛋白、缺氧诱导因子、鞘氨醇激酶等基因的表达上调有关.
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腹膜透析大鼠腹膜组织中HIF-1α和CTGF的表达
目的:探讨尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义.方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、尿毒症组及腹膜透析组,每组8只.尿毒症和腹膜透析组大鼠制备尿毒症模型,腹膜透析组于尿毒症造模成功后第6周开始每天规律行腹膜透析,28 d后取4组大鼠新鲜腹膜组织,采用免疫组化及RT-PCR技术检测HIF-1α、CTGF蛋白及mRNA的表达水平,并采用免疫组化技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果:4组大鼠腹膜组织中HIF-1α、CTGF蛋白和mRNA的表达水平及α-SMA蛋白表达水平差异均有统计学意义(P均<0.001),尿毒症组上述指标较正常对照组升高,腹膜透析组较尿毒症组升高更明显(P<0.05).4组腹膜组织中3个蛋白的表达均呈正相关(P<0.05).结论:腹膜透析大鼠腹膜纤维化的发生可能与HIF-1α、CTGF的表达上调有关.
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缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及对缺氧诱导因子1α蛋白表达的影响
目的 探讨缺血预处理(IP)对肝脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达的影响.方法 将120只Sprague-Dawley大鼠分为假手术(SO)组、IR组和IP组,每组40只.SO组术中只牵拉分离肝十二指肠韧带,操作完成后关腹;IR组阻断十二指肠韧带,造成缺血30 min后解除阻断;IP组在阻断肝十二指肠韧带前30 min进行持续5 min缺血及5 min再灌注.IR和IP组分别于再灌注2、6、12和24 h时间点各处死10只动物,取肝脏标本;SO组于术后2h取肝组织标本.检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平,免疫组织化学法测HIF-1α蛋白表达水平,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定肝细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI).结果 再灌注后,IR组及IP组大鼠各时点的ALT、AST、TNF-α、IL-10与SO组相比均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).IP组大鼠各时间点TNF-α明显低于IR组,IL-10明显高于IR组(P＜0.05).IP组大鼠ALT和AST在2、6、12 h低于IR组,差异均有统计学意义(P＜0.05).IR组和IP组大鼠细胞AI较SO组增加,差异有统计学意义(P ＜0.05);IP组大鼠各时间点AI低于IR组,差异均有统计学意义(P＜0.05).在IR及IP组内,不同时点HIF-1α蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);除24 h外其他各时间点IP组大鼠HIF-1α蛋白表达明显高于IR组,差异均有统计学意义(P＜0.05).IR组和IP组大鼠肝组织的HIF-1α蛋白表达与AI、TNF-α、IL-10均呈正相关(r=0.624,0.470,0.312,P＜0.05).结论 IP通过上调HIF-1α蛋白表达,抑制细胞凋亡,减少促炎性因子的释放,增加抗炎性因子的表达,对大鼠肝IR损伤有明显的保护作用.
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尖锐湿疣组织中缺氧诱导因子1α和Flt-1的表达及意义
目的：探讨尖锐湿疣( CA)组织中缺氧诱导因子1α( HIF-1α)和Flt-1的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测38例CA组织中HIF-1α和Flt-1的表达。结果 CA组织中HIF-1α和Flt-1阳性表达率分别为92．11%(35/38)和100．00%(38/38)，正常对照组HIF-1α和Flt-1阳性表达率分别为65．00%(13/20)和100．00%(20/20)；CA组织中HIF-1α和Flt-1阳性表达强度多在++~+++，正常对照组多在照组多在+~++；CA组织中HIF-1α和Flt-1阳性表达率与正常对照组比较差异未见统计学意义( P>0．05)，但两组HIF-1α和Flt-1的阳性表达强度比较差异有统计学意义( P<0．05)；HIF-1α和Flt-1表达之间呈正相关( P<0．05)。结论 HIF-1α和Flt-1参与了CA的发病过程，并在促进CA血管生成及发生发展中可能发挥重要作用。
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内质网应激在百草枯上调缺氧诱导因子1α中的作用
目的:探讨内质网应激在百草枯(PQ)上调缺氧诱导因子1α(HIF-1α)中的作用.方法:将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(10只)和染毒组(50只),染毒组按照50 mg/kg的标准将20％的PQ用生理盐水稀释到1 ml进行一次性灌胃,于灌胃后2、6、12、24、48 h处死动物取肺组织.提取肺组织总蛋白,采用Western Blotting检测HIF-1α和内质网应激标志物GRP78、XBP1的表达.选择ERS抑制剂4-苯基丁酸进行预处理,再施以PQ暴露,Western Blot和免疫荧光检测肺组织中GRP78及HIF-1α的表达.结果:染毒后2h肺组织中HIF-1α、GRP78和XBP1蛋白表达均较对照组明显升高,随时间延长,逐步增高.采用4-苯基丁酸抑制处理后,与PQ处理组比较,大鼠肺组织中GRP78、HIF-1α表达减少.结论:PQ进入肺组织后,可能通过诱导ERS上调HIF-1α的表达参与肺纤维化.
