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缺血后处理对视网膜缺血-再灌注损伤后GRP78,Caspase-12表达的影响
目的 研究缺血后处理(IP)对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜神经节细胞GRP78,Caspase-12表达及凋亡的影响,为临床缺血后处理治疗缺血再灌注性视网膜疾病提供实验依据.方法 健康SD大鼠65只随机分为3组:空白组5只、模型组30只、处理组30只,空白组不做任何处理,前房加压建立RIRI模型.处理组于缺血60min后行3个循环的灌注30s阻断30s,再进行2h,6h,12h,24h,48h灌注.免疫组织化学检测各组GRP78,Caspase-12的阳性表达.结果 空白组未见GRP78,Caspase-12表达.模型组GRP78阳性细胞数12h多;模型组Caspase-12阳性细胞数24h多.与模型组比较,处理组GRP78表达明显增强(P＜0.05),Caspase-12表达明显减少(P＜0.05).结论 缺血后处理对视网膜缺血-再灌注损伤可通过增强GRP78及抑制Caspase-12的表达,减少视网膜神经节细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 缺血后处理 GRP78 Caspase-12 -
色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs)对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型中PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用.方法 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的慢病毒(lentivirus,LV)为载体,将PEDF基因以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况.选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组(N组)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)治疗组(PBS组)、hUCMSCs治疗组(M组)及PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组(P组);N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗.5d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜PEDF和VEGF的mRNA表达情况.结果 荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％.RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量(4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示,转染后PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量[(83.09±7.58)μg·L-1]明显高于hUCMSCs[(12.30±1.24) μg·L-1],差异有统计学意义(P＜0.05).尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);P组高于M组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗5d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);P组厚于M组.RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用.
关键词： 色素上皮衍生因子 血管内皮生长因子 基因转染 视网膜缺血-再灌注损伤 -
实验性视网膜缺血-再灌注损伤中坏死性凋亡相关因子的表达变化
目的 建立视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)模型,观察坏死性凋亡是否参与其病理过程.方法 野生型C57小鼠随机分为对照组及实验组.对照组不做任何处理,实验组采用前房灌注法建立RIRI模型,并于RIRI后1d、2d、4d、7d分别收集视网膜或眼球,行荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光染色检测受体相互作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)3及RIP1、白细胞介素-13、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-0、Caspase8的表达变化.结果 荧光定量PCR检测RIP3、RIP1、白细胞介素-1β、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、Caspase8的mRNA表达,与对照组比较,实验组在不同时间点均有显著升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.001).RIP3及RIP1表达以早期升高为主,后期逐渐下降.Westem blotting检测发现RIP3在RIRI后1d及2d显著升高,随后呈下降趋势.组织切片免疫荧光染色也发现RIP3在RIRI后1d及2d显著升高,随后呈下降趋势.结论 实验性RIRI模型中,坏死性凋亡参与了其病理过程.坏死性凋亡特异性蛋白RIP3表达以早期升高为主,后期逐渐下降.
关键词： 坏死性凋亡 视网膜缺血-再灌注损伤 受体相互作用蛋白 鼠 -
雷帕霉素对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 探讨雷帕霉素对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion iniury,RIRI)的保护作用和机制.方法 75只SPF级健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组、实验对照组、实验组,每组25只.实验对照组和实验组行前房灌注建立RIRI模型.实验组在前房灌注前2h按2 mg·kg-1剂量腹腔注射雷帕霉素,实验对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水和DMSO.分别在再灌注后0h、6h、12 h、24 h、48 h取3组视网膜标本,HE染色法观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)形态及测量视网膜内层厚度;TUNEL法检测视网膜组织中凋亡细胞的表达;Real-time PCR检测缺氧诱导因子1 α(hypoxia-inducible factor 1 α,HIF-1 α)mRNA在视网膜组织的表达水平.结果 再灌注后0h,实验组视网膜内层厚度为(137.55±7.76) μm,视网膜水肿较实验对照组轻,实验对照组视网膜内层厚度为(162.26±6.41)μm,且实验组RGC空泡化现象较少;再灌注6h以后实验组视网膜内层厚度均较实验对照组厚(均为P＜0.05).实验组再灌注后12h、24h、48 h的细胞凋亡情况明显低于实验对照组(均为P＜0.05).再灌注后0h、6h、12 h、24 h、48 h实验组视网膜组织中HIF-1α mRNA表达水平较实验对照组降低(均为P ＜0.05).结论 雷帕霉素对RIRI具有保护作用,HIF-1α表达水平的下调可能与该作用有关.
关键词： 雷帕霉素 Wistar大鼠 缺氧诱导因子1α 视网膜缺血-再灌注损伤 细胞凋亡 -
BMSC移植对视网膜缺血-再灌注损伤凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响
目的 研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响.方法 将52只健康成熟SD大鼠随机分为正常组(4只)、模型组(24只)、BMSC组(24只),将后两组按再灌注后时间1h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h分为6个时间点,前房加压建立RIRI模型,干细胞贴壁法培养BMSC,RIRI模型建立1h后模型组与BMSC组分别行玻璃体腔注射等量PBS缓冲液、BMSC细胞悬液.在再灌注后6个时间点过度麻醉处死大鼠,立即摘取术眼,通过免疫组织化学检测各组视网膜中c-fos/c-jun的阳性表达.结果 正常组未见e-fos/c-jun阳性表达,再灌注后1h、6h、12h、24 h、48 h、72 h后,模型组c-fos阳性细胞数分别为(6.2±1.8) mm-2、(59.8±19.7)mm-2、(428.5 ±45.8) mm-2、、(680.5 ±38.1)mm-2、(230.0 ±30.1) mm-2、(5.8±1.2) mm-2,BMSC组c-fos阳性细胞数分别为(3.9±1.9)mm-2、(30.5 ±23.3) mm-2、(230.5±36.3) mm-2、(546.5 ±40.8)mm-2、(110.5 ±24.4)mm-2、(3.3 ±0.8)mm-2;模型组c-fos阳性细胞数分别为(9.2 ±2.0)mm-2、(255.7 ±30.1)mm-2、(435.3 ±40.4)mm-2、(665.2 ±55.7)mm-2 、(91.7±16.5)mm-2、、(4.3±1.5)mm-2,BMSC组c-fos阳性细胞数分别为(5.2±1.4) mm-2、(134.6±29.4)mm-2、(251.9 ±34.5)mm-2、(558.3 ±25.9)mm-2、(50.5 ±23.4)mm-2、(2.5 ±0.9)mm-2.与模型组比较,BMSC组各时间点c-fos、c-jun的阳性细胞数明显减少,其中再灌注后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h 2组差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 RIRI后行BMSC玻璃体腔注射可抑制c-fos/c-jun阳性表达,减少神经节细胞层细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 骨髓间充质干细胞移植 c-fos C-Jun -
Edaravone对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax表达的影响
目的 研究Edaravone对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响.方法 健康Wistar大鼠36只随机分为3组:空白对照组、模型组和Edaravone治疗组.空白对照组不做任何处理,模型组和Edaravone治疗组均采用前房加压法建立大鼠RIRI模型,Edaravone治疗组于缺血前30 min行腹腔注射Edaravone(3 mg·kg-1),恢复灌注30min后再行腹腔注射Edaravone (3 mg· kg-1).免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血-再灌注后24 h视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax的表达情况.结果 空白对照组未见Bcl-2和Bax表达.再灌注后24h,模型组Bcl-2表达为0.406±0.022,Bax表达为0.661±0.034,Bcl-2/Bax为0.609±0.015；Edaravone治疗组Bcl-2表达为0.581±0.031,Bax表达为0.491±0.017,Bcl-2/Bax为1.104±0.094.与模型组比较,Edaravone治疗组Bcl-2表达明显增强(P＜0.05),Bax表达明显减弱(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论 Edaravone对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有明显的保护作用,其机制可能与上调Bc1-2表达及下调Bax的表达有关.
关键词： edaravone 视网膜缺血-再灌注损伤 Bcl-2 Bax -
MSC移植对视网膜缺血-再灌注损伤后神经节细胞中HIF-1α及Caspase-3表达的影响
目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对视网膜缺血-再灌注损伤低氧诱导因子-1αt( hypoxia inducible factor-1αα,HIF-1α)及Caspase-3表达及神经节细胞凋亡的影响,为MSC移植治疗视网膜缺血-再灌注损伤提供实验依据.方法 将65只健康SD大鼠随机分为3组:正常组5只、模型组30只、MSC移植组30只,各组均将左眼作为实验眼制作视网膜缺血-再灌注损伤模型.贴壁筛选法体外培养SD大鼠MSC,模型组于缺血-再灌注1h予以玻璃体内注射PBS缓冲液,MSC移植组于缺血-再灌注后1h予以玻璃体腔注射MSC.各组SD大鼠分别于缺血-再灌注损伤后1h、6h、12h、24 h、48 h及72h处死,并立即摘除左眼眼球,固定包埋并切片,免疫组织化学法检测各组SD大鼠视网膜缺血-再灌注后HIF-1αα及Caspase-3的表达情况.结果 正常组未检测到HIF-1α及Caspase-3有表达,在视网膜缺血-再灌注后1h、6h、12h、24 h、48 h及72 h模型组HIF-1α的表达分别为0.620±0.025、1.889±0.099、7.591±0.359、4.756±0.156、2.564±0.164、1.023±0.144；MSC移植组分别为0.222±0.058、0.774±0.162、1.831±0.124、1.567±0.059、0.930±0.010、0.583±0.065.模型组Caspase-3表达分别为0.106±0.093、0.593±0.083、1.760±0.087、3.855±0.142、2.429±0.070、1.329±0.080；MSC移植组分别为0.028±0.004、0.180±o.032、0.887±0.0075、1.857±0.050、1.554±0.079、0.957±0.087.与模型组相比,MSC移植组HIF-1α及Caspase-3的表达明显减少,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 视网膜缺血-再灌注损伤后行MSC玻璃体内注射可抑制神经节细胞HIF-1α及Caspase-3的表达,减少神经节细胞的凋亡,对视网膜缺血-再灌注损伤有一定的保护作用.
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Caspase-7与视网膜缺血-再灌注损伤
视网膜缺血-再灌注损伤是细胞凋亡、炎症反应等多种机制参与的病理生理过程.半胱氨酸蛋白酶7(Caspase-7)是Caspase家族中的凋亡效应分子,近期研究表明,它在调控炎症细胞因子方面也起着重要作用.本文就Caspase-7生物学特性及其与细胞凋亡、炎症反应在视网膜缺血-再灌注损伤的分子机制进行综述.
关键词： Caspase-7 视网膜缺血-再灌注损伤 细胞凋亡 炎症反应 -
氨基胍对兔缺血-再灌注损伤后视网膜形态学及一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响
背景 临床研究表明,多种眼科疾病如青光眼、视网膜中央动脉阻塞、缺血性视神经病变等均可导致视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI),严重影响视功能,因而对治疗RIRI药物的研究是非常必要的.目的 观察并探讨氨基胍对兔RIRI后形态学的变化,并研究其对一氧化氮(N0)及一氧化氮合酶(iNOS)在视网膜中表达的影响及其机制.方法 清洁级日本大耳白兔66只,以随机数字表法分为正常组、RIRI模型组和氨基胍治疗组.用前房灌注生理盐水法升高眼压60 min后恢复灌注建立兔RIRI模型,氨基胍治疗组每日在模型兔腹腔内注射氨基胍注射液80 mg/kg,而RIRI模型组以同样的方法注射等量生理盐水.RIRI模型组和氨基胍治疗组分别于缺血即时、再灌注后6、24、72h各取2 只兔活体行眼底彩色照相及荧光素眼底血管造影(FFA).各组兔分别于再灌注后1、6、24、72 h用空气栓塞法处死并摘除眼球以制备视网膜切片,用TUNEL法检测视网膜组织神经细胞的凋亡变化,通过硝酸还原酶法检测NO浓度,比色法检测iNOS活力.结果 各时间点眼底彩色照相及FFA检查结果表明,与RIRI模型组比较,氨基胍治疗组视网膜水肿程度减轻,血管闭塞程度及比例降低,荧光素渗漏量及面积减轻并减少.TUNEL染色凋亡细胞计数检测表明,正常组兔视网膜未见TUNEL阳性细胞,而缺血-再灌注1、6、24、72 h后RIRI模型组兔视网膜凋亡细胞计数均明显高于氨基胍治疗组(F分组=2762.37,P=0.00；F时间=894.24,P=0.00).RIRI模型组和氨基胍治疗组各组内相邻时间点之间TUNEL阳性细胞的差异均有统计学意义(RIRI模型组:q=24.47、36.59、-20.37,P＜0.05；氮基胍治疗组:q=20.94、16.79、-6.92,P＜0.05),再灌注后24 h各组TUNEL阳性细胞数量达到高峰.各时间点RIRI模型组兔视网膜NO浓度明显高于氨基胍治疗组(q=3.84、4.01、8.91、3.75,P＜0.05),各组内相邻间点之间NO浓度的差异均有统计学意义(RIRI模型组:q=4.77、13.40、-10.29,P＜0.05;氨基胍治疗组:q=4.55、9.05、-5.08,P＜0.05),各组24 h视网膜中NO浓度达峰值.各时间点RIRI组视网膜iNOS活力均明显高于氨基胍治疗组(q=-3.74、-4.94、-6.53、-3.98,P＜0.05)；各组内相邻时间点间iNOS活力的差异均有统计学意义(RIRI模型组:q=8.43、6.71、-6.39,P＜0.05；氨基胍治疗组:q=4.16、5.08、-3.93,P＜0.05),各组24 h iNOS活力达峰值. 结论 氨基胍对维持RIRI后的视网膜形态和功能起保护作用,其作用机制可能为抑制iNOS的活性,减少NO的生成.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 氨基胍 凋亡 一氧化氮 诱导型一氧化氮合酶 -
β-七叶皂苷钠对大鼠缺血-再灌注损伤视网膜iNOS及Caspase-2表达的影响
目的:观察β-七叶皂苷钠对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及Caspase-2表达的影响,探讨其对缺血-再灌注视网膜保护作用可能的机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、缺血-再灌注模型组、β-七叶皂苷钠组.通过前房灌注法建立视网膜缺血-再灌注损伤模型.分别于术后12、24 h行免疫组化、实时荧光定量RT-PCR检测iNOS的表达,免疫组化检测Caspase-2的表达.结果:免疫组化、RT-PCR均显示与相同时间点模型组比较,β-七叶皂苷钠组iNOS表达显著降低(P＜0.01),免疫组化显示与相同时间点模型组比较,β-七叶皂苷钠组Caspase-2表达显著降低(P＜0.01).结论:β-七叶皂苷钠可能通过抑制iNOS的表达,减少视网膜神经细胞的凋亡,对视网膜缺血-再灌注损伤发挥保护作用.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 iNOS β-七叶皂苷钠 Caspase-2 -
色素上皮源性因子对缺血-再灌注视网膜神经节细胞的保护作用
目的:研究色素上皮源性因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)对高眼压诱导的大鼠视网膜缺血-再灌注后视网膜神经节细胞的保护作用.方法:经眼角膜进行前房平衡盐水(BSS)灌注,维持眼内压110 mmHg,以阻止视网膜正常血液灌注.60 min后取出灌注针头,恢复视网膜正常血流,从而建立大鼠视网膜缺血-再灌注模型.实验分为正常非缺血组和视网膜缺血-再灌注组,后者又分为生理盐水注射对照组和PEDF注射实验组,再灌注模型建立后立即向实验组大鼠玻璃体腔内注射0.2 g/L PEDF 2 μL.实验对照组用同样方法注射等量生理盐水.分别于注射后2 d和7 d进行眼球摘除,对视网膜进行光学显微镜形态学观察和Fas原位杂交免疫学分析,探讨PEDF对缺血-再灌注视网膜神经节细胞的保护作用.结果:缺血-再灌注2 d时生理盐水注射组和PEDF注射组视网膜神经节细胞明显少于正常对照组(P＜0.01)和(P＜0.05),PEDF注射组视网膜神经节细胞数较生理盐水注射组明显较多,相比有显著性差异(P＜0.05);视网膜神经节细胞计数再灌注7 d后结果与2 d时类似.再灌注2 d生理盐水注射组Fas阳性染色细胞比PEDF注射组明显较多(P＜0.05),生理盐水组比PEDF注射组阳性细胞百分率明显较高(P＜O.01);再灌注7 d时两组Fas阳性细胞计数无明显差异.结论:视网膜缺血-再灌注后即刻行玻璃体腔内PEDF注射可以改善视网膜神经节细胞的损伤并有一定保护作用.
关键词： 视网膜缺血-再灌注损伤 色素上皮源性因子 凋亡 Fas
