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PITC、OPA两种柱前衍生方法测定瓜蒌皮中精氨酸含量的比较研究
目的:选择一种准确、简便的测定瓜萎皮精氨酸含量的方法.方法:对异硫氰酸苯酯(PITC)和邻苯二甲醛(OPA)两种柱前衍生方法测定精氨酸的含量进行比较.结果:PITC衍生法有副反应产物,干扰测定结果.OPA衍生法简化了衍生过程,衍生方便、快速,衍生产物单一,测定结果相对准确.结论:PITC衍生法测定瓜蒌皮中精氨酸含量不准确,操作繁琐,不可作为测定瓜蒌皮精氨酸含量测定的方法.OPA衍生法测定瓜蒌皮中精氨酸含量较准确,操作简便,可为中药精氨酸含量测定方法选择提供参考.
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建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量
目的 通过优化色谱条件建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量.方法 以9种氨基酸对照为外标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)柱,流动相A为0.1 mol/L的醋酸钠溶液(用冰醋酸调整pH至6.50)-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(4:1),检测波长254 nm,流速为0.45 mL/min,柱温36℃.结果 复方氨基酸胶囊(9-5)中9种氨基酸出峰时间与对照品出峰时间一致,其他物质无干扰;仪器精密度RSD为0.5%~1.2%,中间精密度RSD为1.3%~1.9%;各氨基酸的溶液浓度与其峰面积线性关系良好(r≥0.999),溶液稳定性RSD为0.6%~1.8%,各氨基酸的平均回收率在95.0%~105.0%之间.含量测定方法比对实验中UPLC法与HPLC法分析结果无明显差异,分析速度明显提高.结论 建立的UPLC法高效,快速,灵敏,准确,可用于测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量.
关键词： 异硫氰酸苯酯 复方氨基酸胶囊(9-5) UPLC 氨基酸 方法学验证 -
柱前衍生化法测定盐酸氨基葡萄糖软膏的含量
目的 建立柱前衍生化RP-HPLC法测定盐酸氨基葡萄糖软膏的含量.方法 采用NH2色谱柱(250mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(体积比90:10),流速为1.0 mL·min-1,衍生化试剂为异硫氰酸苯酯,检测波长254 nm.结果 在本色谱条件下,盐酸氨基葡萄糖质量浓度在12.75～38.25 mg·L-1内呈良好的线性关系,回收率为100.4%.结论 该方法准确、可靠,适用于盐酸氨基葡萄糖软膏的含量测定.
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不同品种、产地瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱研究
目的：建立瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱，并比较研究不同品种、产地瓜蒌皮氨基酸含量差异，为科学评价与有效控制瓜蒌皮质量提供依据。方法：采用异硫氰酸苯酯（ PITC）为衍生试剂，色谱柱为Eclipse XDB C18（4．6mm ×250mm，5μm）；流动相A：乙腈－水（4∶1），流动相B：醋酸钠－乙腈溶液（93∶7），梯度洗脱；流速：1mL／min；检测波长：254nm；柱温为30℃。结果：建立了瓜蒌皮中19种游离氨基酸类成分液相指纹图谱共有模式，并对不同产地瓜蒌皮药材进行了相似度比较和聚类分析。结论：本方法简便、快速、重复性好，可用于鉴别和区分不同来源的瓜蒌皮药材，为全面控制瓜蒌皮药材的质量提供依据。
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不同干燥方式对地龙提取物中17种氨基酸的影响
目的 研究不同干燥方式对地龙提取物中17种氨基酸的影响,确定其适宜的干燥方法.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法,测定并比较真空冷冻干燥、真空减压干燥和微波干燥3种方式所得地龙干燥样品以及未经干燥样品中的17种氨基酸的量.结果 冷冻干燥所得产品中氨基酸的损失率小,含水量低,外观色泽和形态均较优;谷氨酸、组氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸这6种氨基酸在真空减压干燥下的损失率分别为5.01％、9.41％、7.45％、13.19％、4.99％和6.59％;除门冬氨酸和脯氨酸外,其他15种氨基酸在微波减压下的损失率均在22.65％～55.97％之间.结论 温度是地龙氨基酸提取液干燥过程中的重要因素.真空冷冻干燥对地龙提取物中的17种氨基酸的影响较小,是地龙提取物较适宜的干燥方式.
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柱前衍生高效液相色谱法测定新疆金鸡菊中游离氨基酸
目的 建立柱前衍生高效液相色谱法测定新疆金鸡菊中游离氨基酸.方法 采用异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,高效液相色谱法测定新疆金鸡菊中游离氨基酸的含有量.色谱柱为Shim-pack VP-ODS (5 μm,250 mm×4.6mm),梯度洗脱,柱温35℃,UV 254 nm波长处检测.结果 本方法测定18种氨基酸的线性范围分别为8～ 720μg/mL,r值均大于0.99;平均回收率分别为94.08％～105.3％.结论 应用本法对新疆金鸡菊中的游离氨基酸进行测定,灵敏度高,结果准确可靠.
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柱前衍生反相高效液相色谱法测定西洋参中游离氨基酸
目的:建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定西洋参中17种游离氨基酸的分析方法.方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,用Venusil-AA氨基酸分析专用柱(5μm,4.6 mm×250 mm),醋酸钠缓冲溶液(pH6.5)-乙腈溶液和80%乙腈水溶液为流动相,采用梯度洗脱,紫外检测器在254 nm波长处检测.结果:氨基酸浓度在0.5～0.012 5 μmol范围内,线性相关系数均大于0.99.17种氨基酸的平均回收率在96.5%～102.3%.结论:西洋参根中的游离氨基酸主要以精氨酸为主,占游离氨基酸总量50%以上,这一结果为进一步研究西洋参的化学成分和药理作用提供了前提条件.
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用柱前衍生RP-HPLC法测定脑蛋白水解物注射液中牛磺酸的含量
目的:建立测定脑蛋白水解物注射液中牛磺酸含量的柱前衍生RP-HPLC法.方法:在碱性条件下,氨基酸与异硫氰酸苯酯反应,生成异硫氰酸苯-氨基酸的衍生物,采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),用二元梯度洗脱方式,流动相A为0.1 mol/L乙酸钠-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(80:20),检测波长254 nm.结果:牛磺酸在0.01～0.07 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),精密度良好,低、中、高3种浓度(0.019、0.024、0.029 mg/mL)的加样回收率分别为(97.0±0.5)%、(98.8±0.20)%、(100.0±1.6)%(n=3).结论:本法结果准确,重复性好.
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柱前衍生RP-HPLC法同时测定珐菲亚中14种水解氨基酸
目的 建立柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定珐菲亚中14种水解氨基酸含量的方法 .方法 采用Wa-ters XBridge Shield RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,梯度洗脱,流速0.8 ml/min,检测波长254 nm,柱温25℃.结果 14种氨基酸在一定浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r值均>0.9990,加样回收率(n=6)为90.2%~105.1%,氨基酸衍生溶液在24 h内稳定.结论 本实验建立的方法 可靠,可用于珐菲亚中氨基酸的含量测定.
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高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸含量
目的 建立高效液相色谱法检测酶促反应液中L-半胱氨酸含量.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法测定.色谱柱:Waters Symmetry C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相A:醋酸钠缓冲溶液-乙腈(40:3),流动相B:乙腈-水(4:1);梯度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温38 ℃;检测波长254 nm.结果 线性范围为0.01～0.1 mg/mL,r=0.999 5(n=6);平均回收率为100.03%,RSD为0.21%(n=6).结论 此法简便易行,重现性好.
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高效液相色谱法测定星虫体壁胶原蛋白
目的 建立快速检测胶原蛋白的高效液相色谱法.方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生反相高效液相色谱,以乙晴-醋酸盐缓冲系统梯度洗脱,于254nm渡长处根据羟脯氨酸的含量来推算星虫体壁胶原蛋白.结果 羟脯氨酸衍生物与其它氨基酸较好分离,在5～200βg/mL浓度范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),回收率为102.6%.RSD为1.58%.结论 此法快速、灵敏、分辨率高,适用于动物组织中胶原蛋白含量的测定.
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柱前衍生化HPLC法测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液的含量
目的 建立柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)法测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液含量的方法.方法 采用异硫氰酸苯酯作柱前衍生剂,色谱柱为Waters sunfire ODS柱(4.6 mm×250 mm),流动相为:乙腈-0.1 mol/L醋酸钠(用稀醋酸调整pH 5.50)为44∶56,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 线性范围为0.025～2.5 mg/mL(r=0.999 8),平均加样回收率为99.9%,RSD为0.5%.结论 此法操作简单快速,灵敏度高,结果准确可靠,适用于N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液中N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的含量测定.
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异硫氰酸苯酯柱前衍生RP-HPLC测定大鼠脑组织中9种氨基酸类神经递质含量
目的 建立一种脑组织中氨基酸类神经递质的测定方法.方法 醋酸钠-乙腈-水为流动相,反相高效液相色谱洗脱,异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生和紫外检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中9种氨基酸类神经递质(谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸、谷氨酰胺、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸)的含量.结果 9种氨基酸在50 min内洗脱完全,分离效果良好;浓度在5～400μmol·L-1内线性关系良好,且相关系数＞0.99,平均回收率≥80％.结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,适用于一般实验室脑组织中氨基酸类神经递质的测定.
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异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度
目的:建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法.方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温40℃,采用二元梯度洗脱,254 nm波长处检测.结果:氨基酸血浆浓度在15.6～250 μmol/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于0.99;10种氨基酸的加样回收率在96.3%～103.4%;日间和日内变异系数均在4.8%以下.应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果.结论:该法简便、稳定,并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测.
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柱前衍生HPLC法测定依达拉奉注射液中L-半胱氨酸含量
目的 建立柱前衍生化HPLC法测定依达拉奉注射液中L-半胱氨酸盐酸盐含量的方法.方法 以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1mol·L-1醋酸钠溶液(用冰醋液调节pH至6.5)(45∶55),流速为1.0mL·min-1,检测波长254nm.结果 L-半胱氨酸盐酸盐衍生物浓度在0.4～4.0μg·mL-1范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率100.5%,RSD为1.4%(n=9).结论 本方法快速准确.
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HPLC法测定复方制剂中盐酸赖氨酸的含量
目的 完善复方制剂中盐酸赖氨酸含量的监测体系.方法 本实验采取高效液相色谱法(HPLC),并用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化.过程中选择合适色谱柱与柱温,尝试流动相的组成以及比例.以合适的流速进行梯度洗脱,后根据紫外图谱确定应选用的吸收波长.结果 赖氨酸在0.05mg·mL-1至1mg·mL-1浓度范围内线性关系良好(相关R系数大于0.999),所检测的三种样品的方法精密度RSD分别为0.706％、0.438％、0.343％,平均加样回收率为98.9％、92.5％、102.8％.含量测定结果在93％～107％范围以内.结论 该方法切实可行,弥补了原方法的缺陷,结果精确且重复性良好.因此该方式设计合理可考虑用作检定.
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检测癫痫大鼠脑组织中 Glu、Gly、GABA 含量的异硫氰酸苯酯柱前衍生 HPLC 技术的建立
目的：建立检测癫痫大鼠脑组织谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（Gly）含量的异硫氰酸苯酯（ PITC）柱前衍生高效液相色谱（ HPLC）技术，并验证其检测效果。方法将海人藻酸（ KA）或等量生理盐水注射入大鼠海马CA3区建立癫痫模型或对照，2周后分别取其海马和皮层组织，采用PITC柱前衍生法处理样品，采用醋酸钠缓冲液和乙腈梯度洗脱，Venusil-AA氨基酸分析柱结合紫外检测器检测，计算Glu、GABA、Gly含量。结果在30 min内3种氨基酸完全出峰。在0．20～12．50 mg／L范围内Glu线性关系良好，相关系数为0．9993，日内精密度为1．46％，日间精密度为1．84％，加样回收率为97．12％±2．98％；在0．01～6．25 mg／L范围内Gly线性关系良好，相关系数为0．9984，日内精密度为1．17％，日间精密度为1．62％，加样回收率为96．63％±1．28％；在0．10～6．25 mg／L范围内GABA线性关系良好，相关系数为0．9994，日内精密度为1．00％，日间精密度为1．53％，加样回收率为99．25％±2．98％。模型组海马和皮层中Glu含量均高于对照组相应组织（P均＜0．05）。结论成功建立了检测癫痫大鼠脑组织Glu、Gly、GABA含量的PITC柱前衍生HPLC技术检测效果较好。
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建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊中氨基酸的含量
目的:通过优化色谱条件建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量.方法:以九种氨基酸对照为外标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用ACQUITY UPLC(@)BEH C18(2.1 × 100μm 1.7μ m)column,流动相A为0.1mol/L的醋酸钠溶液(用冰醋酸调整pH至6.50)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),检测波长254nm,流速为0.45ml/min,柱温36℃C.结果:复方氨基酸胶囊(9-5)中九种氨基酸出峰时间与对照品出峰时间一致,其他物质无干扰;仪器精密度RSD为0.5％～1.2％,中间精密度RSD为0.7％～1.1％;在59.42μg/ml～ 148.54μg/ml(以亮氨酸为例)内氨基酸的溶液浓度与其峰面积线性关系良好(r≥0.999),溶液稳定性RSD为0.6％～ 1.8％,各氨基酸的平均回收率在95.0％～ 105.0％之间.结论:建立的UPLC法高效,快速,灵敏,准确,可用于测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量.
关键词： 异硫氰酸苯酯 复方氨基酸胶囊(9-5) UPLC 氨基酸 方法学验证 -
青葙子中氨基酸的柱前衍生化HPLC-DAD法测定
目的 建立柱前衍生HPLC-DAD法测定中药青葙子中游离氨基酸和水解氨基酸的含量方法.方法 采用超声提取法和盐酸水解法制备青葙子的2类氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯柱前衍生HPLC-DAD法分析青葙子中的氨基酸.结果 18种氨基酸的分离良好,空白无干扰,线性关系良好,精密度RSD在0.30％～1.58％之间,重复性RSD在0.47％ ～ 1.92％之间,稳定性RSD在0.42％ ～ 1.71％之间,加样回收率96％～103％之间且RSD均小于5％,游离和水解氨基酸的含量分别为0.4022％、6.9082％,药用氨基酸和必需氨基酸含量较高.结论 该方法简便、快捷,能准确地测定青葙子中游离和水解氨基酸的含量,为青葙子及其制剂的质量控制提供了依据.
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不同采摘期金银花中氨基酸含量的PITC柱前衍生HPLC法测定
目的 建立柱前异硫氰酸苯酯(PITC)衍生HPLC测定金银花中水解氨基酸的方法,并比较不同采摘期对金银花氨基酸的含量影响.方法 6 mol·L-1盐酸水解金银花蛋白,以PITC为柱前衍生试剂,采用HPLC法测定不同采摘期金银花中氨基酸的峰面积并计算其含量.结果 18种氨基酸的分离良好,线性关系良好,精密度RSD在0.28％～0.86％之间,重复性RSD在0.92％ ～2.01％之间,稳定性RSD在0.67％～1.21％之间,加样回收率96.58％ ～ 103.52％之间且RSD均小于5％.金银花中18种氨基酸的总量、药用氨基酸合计和增味剂氨基酸合计都是幼蕾期高,二白期次之.结论 该方法简便、快捷,能准确的测定金银花氨基酸的含量.二白期氨基酸含量较佳,适合作为金银花的采收期,为山东金银花的规范化种植提供了理论依据.
