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中药范畴内的菌物药
中药分类通常是以药材自然属性作为依据,如分为植物药、动物药、矿物药等."真菌类中药"包括以子实体、菌核等入药的"药用真菌"和真菌的固体发酵产品--从古代的曲、酱、酒等至现代的"菌质"均属"真菌药物",已有千年以上药用史.但因生物分类学长期来误将真菌视为低等植物,故使"真菌类中药"也随着属于植物药,就既缺乏科学的归属更难以解释"真菌药物"的性质,从而将影响它产品的定位,脱离中药范畴,与那些在理念、工艺、应用上都有显著差异的现代其他各类生物制品统一定位.固体发酵是中药传统范畴内仅有的一项生物技术,它的发展受益于中医药理念、经验的指导,工艺与应用也具有中药特色,近期又接受应用现代中药的研发内容要求与实验方法,其下游工程也和现代中药提取、纯化技术一致,产品有合格质量标准,并按相关规定进行各期临床试验,因此它既有中药历史传统又符合现代中药的要求.虽然"真菌类中药"拥有研发潜力巨大、生产工艺多种、临床涉用面广等优势,且现代中药生物技术--固体发酵工程更已有显著的重要进展,但至今仍因缺乏科学归属与合理定位,而影响它的发展.现代生命科学已确认真菌并非植物,早已成立了真菌界Fungi,又与一些貌似真菌的真核生物如卵菌Oomyces、粘菌Slimemoulds等被统称为菌物Fungi,因此建议在中药范畴内正式冠名一类真菌为主的菌物药,以药用真菌和真菌药物即真菌的"固体发酵系列工程"所产各类菌质将成为重要支柱.本文同时介绍了菌质的历史、理念、工艺、应用等情况和已研发的三种代表性菌质的基本情况与方法.
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当归固体发酵后水提取工艺优选
目的:优选固体发酵后当归的水提取工艺.方法:以阿魏酸、干浸膏为指标,用正交设计优选提取工艺.结果:佳提取工艺为浸泡0.75 h,煎煮2次,1h/次,加水量为药材的12倍和8倍量.结论:确定的提取工艺稳定可行,可作为发酵后当归的提取方法.
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用蛹虫草固体发酵法高效生产虫草素的研究
目的:研究并建立用蛹虫草固体发酵方式高效生产虫草素的佳方法.方法:通过对不同菌株在固体发酵过程中各生长期的虫草素含量变化进行跟踪测定以及正交旋转组合设计、正交试验设计等方法埘影响虫草素产量和含量的各影响因子(包括菌种、生长期、培养基配方和环境条件等)进行系统优化.结果:JF-1是虫草素生产的佳菌株,现蕾期是收获提取虫草素的佳时期;佳的培养基配方为水料比1.1:1(mL·g-1),营养水中酵母膏、蛋白胨、葡萄糖的用量分别为22.6,6.0,25.4 g·L-1,营养水pH 6.6;佳的环境条件为:光照强度4 400 lx,每日光照时间18 h,温度18～22℃.结论:用以上方法固体发酵生产虫草素,经过约13 d的培养,培养基中虫草素达到0.60%,比传统液体发酵方法的高产量高近2倍,并且培养时间缩短2 d.
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当归苦参丸方药固体发酵前后2种水提取液的成分比较
目的:探讨固体发酵技术对中药成分提取的影响.方法:以当归苫参丸为例,对该方药作固体发酵前后2种水提取液的阿魏酸、苦参碱、苦参总碱、干浸膏4个指标成分的综合比较.结果:综合评价Y值的顺序为Y_(发酵)＞Y_(未发酵).结论:当归苦参丸方药经固体发酵后有利于药物成分的提取.
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僵蛹发酵方法改进的研究
目的 改进中药僵蛹的发酵方法,以提高其活性成分草酸铵的含量.方法 以蚕蛹为发酵基质,通过接入白僵菌液体菌种制备形成僵蛹.以草酸铵的含量为主要考察指标,结合基质转化率,研究不同接种量对发酵工艺的影响,并与生药僵蚕中草酸铵的含量进行比较.结果 与空白对照比较,随着白僵菌接种量的加大,僵蛹中草酸铵的含量增加,其中以接种量为 20%时含量达大,为 7.72%,在 5% ~ 25%接种量范围内,僵蛹中草酸铵的含量均高于四个不同产地生僵蚕的含量.结论 该固体发酵法简单、易行、可控,不易污染杂菌,能有效地提高活性成分草酸铵的含量,制备形成的僵蛹某种程度上可作为僵蚕的代用品.
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四种曲霉属真菌发酵对普洱茶香气成分的影响
香气是影响普洱茶风味、口感和质量的重要因素之一,而后发酵过程对于普洱茶香气的形成有着举足轻重的作用.本文旨在研究和比较不同真菌发酵对普洱茶香气成分形成的影响.研究采用黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉和灰绿曲霉固体发酵普洱晒青毛茶,并以超声波辅助萃取分散相液液微萃取结合气相色谱-质谱联用的方法提取和鉴定其挥发性成分.结果共从中鉴定了63个挥发性成分.与普洱晒青毛茶相比,4种真菌发酵茶在发酵过程中产生了大量的甲氧基苯类化合物,其为普洱茶特有的香气成分之一;其中1,2,3-三甲氧基苯的含量高.普洱茶特征的甲氧基苯类香气成分的产生与曲霉属真菌发酵密不可分,其中黑曲霉和泡盛曲霉对普洱茶香气品质的形成至关重要.
关键词： 普洱茶 曲霉属 固体发酵 挥发性成分 气相色谱-质谱联用仪 -
中药桑叶固体发酵前后抗氧化活性的研究
目的 探讨桑叶固体发酵前后70％乙醇提取物的体外抗氧化活性.方法 应用“药用真菌固体发酵工程”的原理和方法,以桑叶为药性基质,冠突散囊菌为发酵菌种,在一定条件下进行固体发酵,对发酵物用70％乙醇进行提取.并以维生素C(Vc)和乙二胺四乙酸(EDTA)为阳性对照,以清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、·OH自由基、铁还原能力及与Fe2+螯合能力5个指标对发酵前后桑叶体外抗氧化活性进行评价;同时对发酵前后总黄酮、总酚酸含量进行测定.结果 未发酵桑叶70％乙醇提取物清除自由基能力及铁还原能力优于固体发酵7d后桑叶的70％乙醇提取物,但对于Fe2+螯合能力而言,发酵后的桑叶70％乙醇提取物较未发酵前有所升高.其中未发酵桑叶70％乙醇提取物DPPH、ABTS、Fe2+螯合能力的IC50值分别为:4.69、2.03、20.89 mg/mL,而固体发酵7d后的桑叶70％乙醇提取物三者的IC50值分别为:17.63、1.87、9.20 mg/mL;同时含量测定结果显示,发酵后桑叶中总多酚含量较发酵前明显下降,而发酵后桑叶中总黄酮含量却高于发酵前总黄酮含量.其中发酵前桑叶中总黄酮、总酚酸含量分别为4.39、3.95 mg/mL,而发酵后桑叶中总黄酮含量上升至5.37 mg/g,总酚酸下降为1.55 mg/g.结论 固体发酵7d,能够降低桑叶清除自由基的能力及铁还原能力,但却能升高其螯合能力.
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不同药(食)用真菌固体发酵对黄芪中黄芪甲苷的影响
目的 研究黄芪经不同真菌固体发酵后黄芪甲苷的变化,为开发新型中药及其制剂提供参考.方法 选用灵芝、桑黄、姬松茸、香菇4种药(食)用真菌对黄芪进行固体发酵,用HPLC-ELSD法检测黄芪和4种黄芪固体发酵物中黄芪甲苷和异黄芪甲苷的量.结果 黄芪经4种真菌固体发酵后,黄芪甲苷均不同程度地转化成异黄芪甲苷.结论 在固体发酵过程中,药(食)用真菌将黄芪中黄芪甲苷主要转化为异黄芪甲苷,且转化率差异较大.
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蒽酮-硫酸法测定亮菌糖浆中多糖的含量
亮菌糖浆为白磨科密环菌属假密环菌Amill-ariella tabescens(Scop.ex.fr)Sing经固体发酵,提取浓缩后制成的口服制剂,主要用于急、慢性肝炎及胆道疾病的治疗[1.2].多糖为其主要活性成分之一,具有保肝[3.4]、防辐射[5]和抗肿瘤[6]等作用.为了控制亮菌糖浆的质量,本实验采用蒽酮-硫酸比色法对其多糖含量进行了测定.
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中药内的菌物药
现代生命科学已确证真菌独立成为真菌界,又以其为主出现了“菌物”(fungi)的概念和名词.因此,以往归属于中药“植物药”内的“真菌类中药”应冠名为“菌物药”,仍归属于中药,这将有助于对其所研发的新药进行合理定位.菌物药具有“药用真菌”和“真菌药物”二类药用方式,前者以真菌自身组织入药(如灵芝、茯苓等),后者是中药所独创也是唯一的一类生物制药工艺(如古代中药神曲和现代槐耳菌质).新创立的基于药性基质的“双向固体发酵”工程取得了良好进展,如具抗病毒作用的“槐芪菌质”及对雷公藤进行解毒持效的“灵雷菌质”等;利用中药药渣作为药性基质,进行中药二次开发并涉及环境保护等研究已引起业内各方的高度重视,对此取得的新进展进行简要概述.
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固态发酵产纳豆激酶的工艺优化
目的研究纳豆菌的固体发酵.方法采用单因素和正交试验,对以豆渣为原料纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行了优化.结果固体发酵佳条件为培养基配比豆渣:麸皮=5:2,初始含水量65%(w),接种量10%(φ),初始pH 8.0,培养温度 35 ℃;采用适培养基和优化工艺,在 250 mL 三角瓶中进行验证实验,纳豆激酶的酶活可达到 1 577 U*g-1.结论以豆渣为原料固体发酵产纳豆激酶是可行的
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基于双向固体发酵技术的灵青菌质发酵动态变化研究
目的:确定灵芝菌固体发酵青木香的发酵终点,为灵青菌质的制备工艺提供实验依据.方法:运用双向固体发酵技术,青木香与灵芝菌共同发酵后,定期取样,测定基质转化率,并分别采用反相高效液相色谱法和紫外分光光度法测定发酵产物灵青菌质中马兜铃酸Ⅰ和总马兜铃酸的含量.结果:基质转化率、样品中马兜铃酸Ⅰ和总马兜铃酸的含量随发酵时间呈现动态变化:发酵至第28天灵青菌质的基质转化率小幅下降,第28～ 35天相对稳定,此后又大幅下降；HPLC法测定结果表明,0～28 d马兜铃酸Ⅰ含量基本无变化,28d后含量开始明显下降；UV法测定结果表明,0～28 d总马兜铃酸的含量保持下降的趋势,28～35 d含量基本保持恒定,35 d后开始上升.结论:灵芝发酵青木香药材的发酵终点基本可判定为第28 ～ 35天.双向固体发酵技术可有效地应用于青木香的减毒.
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灵芝菌固体发酵三七药渣工艺研究
目的：优化灵芝菌固体发酵三七药渣的发酵工艺，缩短发酵周期，为三七药渣再利用研究提供新的思路。方法运用单因素试验法，以菌蕾形成时间为考察指标，筛选出佳发酵条件。结果灵芝菌发酵三七药渣优发酵工艺为：三七药渣粉末（过10目筛），加入1.5％生长因子CaCO3，加适量水（使含水量达60％），接种量（V/V）＝1：1~1.5：1，在（28±1）℃下，避光培养。结论灵芝菌固体发酵三七药渣的工艺稳定、可靠、高效、产物得率高，为三七药渣的进一步研究和开发利用奠定了基础。
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基于固体发酵的白钱菌质急性毒性及镇痛作用的研究
目的:利用药用真菌白僵菌固体发酵中药马钱子,使马钱子毒性下降,同时保持其镇痛作用.方法:选用对马钱子基质适应性较强的白僵菌,在一定条件下对马钱子进行双向固体发酵,获得白钱菌质；观察马钱子发酵前后小鼠急性毒性(LD50)的变化情况,并比较它们对醋酸腹腔刺激所致小鼠扭体的抑制作用和对小鼠热板致痛的影响.结果:发酵组的LD50为167.3 mg/kg,与马钱子生品相比,LD50上升率为33.8％,各发酵组均可明显延长小鼠舔后足的潜伏期(P＜0.001),发酵组的高、中剂量组可明显减少小鼠腹腔注射醋酸引起的扭体反应次数(P＜0.05或P＜0.01),但低剂量组对减少扭体次数未见明显效果.结论:马钱子经白僵菌发酵后毒性明显降低,并保持了其镇痛作用.
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灵芝和灵芪菌质多糖的含量动态变化初步分析
采用苯酚-硫酸法对不同发酵时间灵芝和灵芪茵质多糖的含量进行测定,研究了灵芝、灵芪茵质多糖含量变化与不同发酵时间的关系.结果表明,灵芝和灵芪茵质多糖含量在发酵初期均有所降低,但随着发酵时间的延长,灵芪茵质多糖含量有所波动.本研究对其发酵终点的判定具有一定的参考意义.
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真菌固体发酵提高人参药材中皂苷含量的研究
目的：采用功能真菌固体发酵的方法，提高人参药材中皂苷类成分的含量。方法：将菌种M1与湿热灭菌后的人参药材进行固体发酵培养，分别利用紫外分光光度法和高效液相色谱法，对人参药材发酵前后的总皂苷以及单体皂苷含量的变化进行分析检测。结果：M1真菌能够显著提高人参药材中人参总皂苷的水平，总皂苷含量在第12天达到高，增长率为103．82％；六种单体人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2和Rd的含量之和也有显著提高。结论：采用固体发酵的方法，通过真菌M1的生物转化作用，可以显著提高人参药材中有效成分人参皂苷的含量。
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固液态发酵条件对桑叶发酵提取物中降糖活性物质的影响
目的:探讨不同发酵条件对桑叶总黄酮、总多酚含量及体外降糖活性的影响.方法:本研究主要利用比色法考察固态、液态两种发酵条件对桑叶发酵物中总黄酮、总多酚含量的影响,同时建立α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶为体外降糖活性筛选模型,以期筛选佳发酵条件.结果:液体发酵7d桑叶70％乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶抑制率高(92.79％);未发酵水提取物对α-淀粉酶抑制率高(63.68％),其次为液体发酵7d桑叶70％乙醇提取物(54.81％).且在生药浓度为10 mg·mL-1时,都高于阳性对照阿卡波糖.结论:利用冠突散囊菌发酵,可以改变桑叶提取物的体外降糖活性,为开发糖尿病药物提供可行思路.
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绿色木霉复合木聚糖酶的固态发酵条件优化
目的 研究不同发酵条件对绿色木霉产复合木聚糖酶性能的影响.方法 采用固体发酵培养方式,通过改变发酵条件,包括碳源、氮源的种类、浓度及接种量,测定相应条件下发酵产物的酶活性来确定发酵工艺.结果 绿色木霉产酶的佳碳源为玉米芯和麸皮(4∶6);氮源为硫酸铵(4%);接种量为1×107个孢子/g培养基.30℃固体培养70 h,发酵后用无菌水(pH 5.0)28 ℃浸提3 h测定酶活性.结论 在优化的培养条件下,木聚糖酶的高酶活性达到267 U/g.
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珍贵束丝放线菌固体发酵生产安丝菌素及安丝菌素P-0制备
目的 获得安丝菌素及安丝菌素P-0纯品.方法 珍贵束丝放线菌ATCC 31565经固体发酵培养,培养物乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析后得到安丝菌素P-2、P-3和P-4混合物.安丝菌素混合物经化学法脱去C-3酰基侧链,采用制备型HPLC获得安丝菌素P-0纯品.结果 每升固体发酵培养基可获得安丝菌素P-2、P-3和P-4混合物(98±2)mg(纯度85％).50mg该安丝菌素样品可获得安丝菌素P-0纯品约31mg(纯度大于99％),产率约82％.结论 将安丝菌素固体发酵培养与提取、去酰基化和HPLC纯化相结合,建立了一套安丝菌素P-0纯品的实验室制备工艺.
关键词： 安丝菌素P-0 珍贵束丝放线菌ATCC 31565 固体发酵 -
单宁酶粉剂的制备工艺研究
目的 制备单宁酶粉剂,为单宁酶的广泛应用奠定基础.方法 通过五倍子生料固体发酵产单宁酶,提取酶液利用冷冻干燥法制备单宁酶粉剂.结果 冷冻干燥8h后酶液脱水率达到94%,比较酶活力后发现加入1%聚乙二醇为保护剂的固体酶粉剂表现出良好的稳定性,一个月后仍能保持91%的活性.结论 冷冻干燥法是一种制备单宁酶粉剂的简便有效的方法.
