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M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞的转化及其意义
目的 诱导人单核细胞向M2型巨噬细胞转化及探讨诱导M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化的可行性.方法 通过磁珠阳性分选法从健康成人新鲜血液中获得人单核细胞,经重组入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导6d,应用流式细胞仪鉴定M2型巨噬细胞标志物CD163阳性表达率.对M2型巨噬细胞应用干扰素(IFN)-γ和脂多糖(LPS)诱导2～3d,应用流式细胞仪鉴定M1型巨噬细胞表面标志物CD16阳性表达率.结果 经重组人M-CSF诱导后的单核细胞,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(66.37±2.67)％,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(13.37 ±4.41)％,M2型巨噬细胞阳性表达率明显高于M1型巨噬细胞阳性表达率(P＜0.01).而M2型巨噬细胞再经IFN-γ和LPS诱导后,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(48.57 ±5.98)％,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(25.83±1.95)％,M1型巨噬细胞的阳性表达率明显高于M2型巨噬细胞的阳性表达率(P＜0.05).结论 人M2型巨噬细胞在IFN-γ和LPS诱导下可向M1型巨噬细胞转化.
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牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用
目的:探讨牙龈蛋白酶对M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的调控作用.方法:采用sheets改良法从PgATCC 33277培养物上清中制备牙龈蛋白酶,应用质谱法鉴定牙龈蛋白酶,底物发色法测定酶活性,鲎试剂检测牙龈蛋白酶中LPS残留量.体外细胞模型实验评价牙龈蛋白酶对大肠杆菌脂多糖(Ec-LPS)诱导的M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子的影响.实验分为3组:阴性对照组、Ec-LPS组和Ec-LPS+牙龈蛋白酶组,采用qRT-PCR和ELISA法检测M1型巨噬细胞表达的抑菌细胞因子白细胞介素12(IL-12)、一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素10(IL-10)在基因和蛋白水平的表达情况.结果:制备的牙龈蛋白酶为RgpA,活性20 U/L,LPS残留量＜0.01EU/mL.qRT-PCR和ELISA结果显示,与阴性对照组相比,Ec-LPS组IL-12和iNOS基因和蛋白的表达水平明显升高,IL-10的表达降低,即成功诱导M1型巨噬细胞,组间有显著差异(P＜0.01);Ec-LPS+牙龈蛋白酶组IL-12、iNOS和IL-10基因和蛋白的表达较Ec-LPS组显著降低,但高于阴性对照组,组间有显著差异(P＜0.01).结论:牙龈蛋白酶具有抑制M1型巨噬细胞表达抑菌细胞因子IL-12、iNOS的作用.
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巨噬细胞极化与动脉粥样硬化
巨噬细胞可极化成两种亚型,促炎的M1型和抗炎的M2型,通过调控炎症反应可影响动脉粥样硬化发展进程.研究表明,巨噬细胞极化在动脉粥样硬化病理生理中发挥了重要作用,但目前调控巨噬细胞极化决定动脉粥样硬化炎症反应转归的机制尚不十分清楚.本文重点就动脉粥样硬化发展过程中影响巨噬细胞极化的因素做一阐述,为调节炎症反应防治动脉粥样硬化提供一个新研究方向.
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NT-3促进脂多糖诱导的M1型巨噬细胞向M2表型极化
目的 探讨神经营养素-3(NT-3)能否促进脂多糖(LPS)诱导的M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化.方法 体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分为LPS组和LPS+NT-3组.用脂多糖(100 ng/ml)刺激12h后,撤掉LPS培养基,冲洗,分别加入基础培养基和含有NT-3(40 ng/ml)的基础培养基,培养24 h后,全部置换成基础培养基培养24 h,收集上清与细胞.固定后的细胞分别做CD68/CCR7(M1型细胞标记物)、CD68/CD206(M2型细胞标记物)、CD68/TrkC免疫荧光双标染色.用酶联吸附试验(ELISA)检测上清中TNF-α和IL-10水平.结果 免疫荧光细胞化学染色显示,LPS刺激后的巨噬细胞表达NT-3的受体TrkC.LPS组可观察到较多的M1型细胞和较少的M2型细胞.LPS+NT-3组可观察到M1型细胞数减少,而M2型细胞数增多.与LPS组比较,LPS+NT-3组的M1型巨噬细胞比例降低,同时M2型巨噬细胞比例增加(P＜0.01).ELISA结果显示,与LPS组比较,LPS+NT-3组上清中TNF-α的水平明显下降(P＜0.01),IL-10的水平相对升高但是差异不明显(P＞0.05).结论 NT-3促进M1型巨噬细胞向M2型极化可能通过与其受体TrkC结合发挥作用,进而减少促炎因子TNF-α的分泌.
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牙周炎和牙周健康状态的大鼠牙周组织中M1/M2型巨噬细胞的分布和比例
目的 了解大鼠牙周炎和牙周健康状态时牙周组织中M1/M2型巨噬细胞的分布和比例.方法 选取雄性SD大鼠12只,随机分为慢性牙周炎组(chronic periodontitis,CP)(n=6)和牙周健康组(periodontal health,PH)(n=6),CP组采用结扎丝结扎下颌第一磨牙构建牙周炎模型,经组织病理学检查确认牙周炎模型构建成功.用诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)标记M1型巨噬细胞,用CD163标记M2型巨噬细胞,采用免疫组织化学和免疫荧光法了解两组M1型和M2型巨噬细胞的分布,并比较两组M1/M2.结果 PH组M1型巨噬细胞计数为12.17±1.40,CP组M1型巨噬细胞计数为40.00±3.20,两组差异具有统计学意义(t=7.96,P<0.0001).PH组M2型巨噬细胞计数为4.50±1.09,CP组M2型巨噬细胞计数为5.33±0.67,两组差异无统计学意义(t=0.65,P=0.53).PH组M1/M2比值为3.72±1.08,CP组M1/M2比值为8.31±1.37,两组差异具有统计学意义(t=2.63,P=0.025).结论 牙周炎时,M1型巨噬细胞明显增多,分布更加广泛,其可能参与了牙周炎的进展,并可能与牙骨质破坏密切相关.
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气血并治方有效组分对骨髓源性巨噬细胞及其诱导M1型IL-8、IL-10、TGF-β水平的影响
目的 观察气血并治方有效组分(CWQB)对C57BL/6J小鼠骨髓源性巨噬细胞(M0型)及脂多糖(LPS)联合干扰素-α(IFN-α)诱导M1型巨噬细胞白细胞介素8(IL-8)、 白细胞介素10(IL-10)、转化因子-β(TGF-β)表达水平的影响.方法 从C57BL/6J小鼠股骨中分离、 提取、 培养骨髓细胞(BMC),以粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)诱导分化为M0型巨噬细胞,LPS+IFN-α诱导M0型巨噬细胞分化为M1型,采用流式细胞法检测M0型和M1型巨噬细胞表面标志性细胞因子表达情况.根据MTT检测结果 ,CWQB和辛伐他汀分别作用于M0和M1型巨噬细胞10 h,常规倒置相差显微镜下观察细胞形态,ELISA法检测细胞上清液IL-8、IL-10、TGF-β的含量,RT-PCR法检测细胞裂解液IL-8、IL-10、TGF-βmRNA的表达水平.结果经上述方法培养和诱导的M0型巨噬细胞84%呈F4/80和CD11b双阳性,M1型巨噬细胞83.4%呈CD86和iNOS双阳性;常规倒置相差显微镜下观察,M0型巨噬细胞呈圆形或椭圆形,伴有伪足,M1型巨噬细胞呈梭形,伴伪足伸展,药物干预后巨噬细胞均呈圆形伴短伪足,整体形态较为收拢;在加入CWQB作用10 h后,M0型巨噬细胞组IL-8分泌量由(2.07±0.14)pg·mL-1降低至(1.69±0.17)pg·mL-1(P<0.05),TGF-β分泌量由(1.24±0.14)pg·mL-1升高至(1.41±0.15)pg·mL-1(P<0.05).M1型巨噬细胞组IL-10分泌量由(0.73±0.12)pg·mL-1升高至(1.03±0.10)pg·mL-1(P<0.05),TGF-β分泌量由(1.13±0.32)pg·mL-1升高至(1.33±0.26)pg·mL-1(P<0.05).基因相对表达量方面,与M0组比较,M0+CWQB组IL-8 mRNA下降,IL-10、TGF-βmRNA升高(P<0.05);与M1组比较,M1+CWQB组IL-8 mRNA下降,IL-10、TGF-βmRNA升高(P<0.05).结论 CWQB可以抑制骨髓源性巨噬细胞及LPS+IFN-ɑ诱导M1型巨噬细胞IL-8的表达,促进IL-10、TGF-β的表达,从而发挥其调节炎症反应的作用.
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三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响
目的：比较人羊膜上皮细胞（（human amniotic epithelial cell, H-AEC））、羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal cell, HA-MSC）和脐带间充质细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC）分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组，比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力；检测各组细胞分泌一氧化氮（NO）的水平；用实时定量多聚酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞经典激活的巨噬细胞（classically activated macrophage, M1 macrophage）相关的促炎基因如白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死基因а（TNFа）、一氧化氮合成酶-2（NOS-2）以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶（Arg-1）、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36）表达情况。结果（1）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC处理后RAW264.7的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%，与对照组（31.1%±11.0%）相比，3种细胞的条件培养基处理后RAW264.7的迁移率均降低，差异具有显著性（P<0.05）；（2）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC共培养后RAW264.7细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76μmol/L，与对照组（45.65±1.78μmol/L）相比，H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降（P<0.05）；（3）促炎基因与抑炎基因的表达改变：（A）H-AEC处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调，与对照组相比有显著差别；HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表达下调显著，其余基因均上调表达；抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调；（B）3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、CD206、CD36表达均上调，与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细胞向M2型分化，但其效果和机制存在不同。
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巨噬细胞极化与动脉粥样硬化
巨噬细胞是动脉粥样硬化过程中具代表性的炎症细胞.机体通过多个信号通路选择性表达靶基因,使巨噬细胞呈现相应特征性的分子标志物,终实现不同极性及功能,即促炎的M1型和抗炎的M2型巨噬细胞.M1/M2型巨噬细胞具有可塑性,二者的分化影响着动脉粥样硬化的发展结局.因此,如何控制巨噬细胞介导的炎症反应已成为心血管领域的关注热点,也为动脉粥样硬化的防治带来新的希望.
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M1/M2型巨噬细胞极化对动脉粥硬化炎症影响的研究进展
炎症是动脉粥样硬化基本的病理改变之一,贯穿其发生、发展的全过程,并与急性脑血管事件密切相关.M1/M2型巨噬细胞的极化及其对炎症的调控作用,直接影响着动脉粥样硬化的疾病进程.本文对M1/M2型巨噬细胞的极化及其对动脉粥样硬化炎症的影响进行文献综述.
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降低蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2Ac)去甲基化促进巨噬细胞M1型分化
目的 研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C(PP2Ac)去甲基化在巨噬细胞M1型分化中的作用.方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化为M0型巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激48 h分化为M1型巨噬细胞;处理组和溶剂对照组在M1型巨噬细胞模型上,分别加入0.5 μmol/L ABL127和二甲基亚砜(DMSO)培养48 h.倒置显微镜观察细胞形态学变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞分化标志物环加氧酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C-X-C趋化因子配体10(CXCL10)的mRNA水平,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能,Western blot法检测PP2Ac去甲基化水平.结果 M0型巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞,细胞伸出伪足逐渐呈梭形,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL1O的mRNA水平明显升高,吞噬功能增强,PP2Ac去甲基化表达下降;处理组加入0.5 μmol/L ABL127,与溶剂对照组相比,PP2Ac去甲基化水平明显降低,梭形细胞增多,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL10明显增高,吞噬功能增强.结论 降低PP2Ac去甲基化能促进M1型巨噬细胞分化,并增强巨噬细胞促炎性细胞因子表达和吞噬功能.
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干扰素调节因子5(IRF5)调控小鼠骨髓源性巨噬细胞的极化
目的 诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,检测干扰素调节因子5(IRF5)在M1型和M2型巨噬细胞中的表达差异,并用IRF5小干扰RNA(IRF5 siRNA)沉默巨噬细胞中IRF5基因表达,观察其极化状态的改变.方法 用γ干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1型巨噬细胞分化,白细胞介素4(IL-4)诱导其向M2型巨噬细胞分化,实时定量PCR检测IRF5、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)和巨噬细胞甘露糖受体(MMR) mRNA在M1型和M2型巨噬细胞中的表达.用IRF5 siRNA转染巨噬细胞,实时定量PCR检测M1型巨噬细胞标志物IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS和M2型巨噬细胞标志物Arg1、MMR mRNA的表达,评估其极化状态的改变.结果 流式细胞术检测巨噬细胞分化率达81.7％,实时定量PCR检测显示M1型巨噬细胞中IRF5、IL-12、iNOSmRNA的表达量明显高于M2型巨噬细胞,TNF-α亦高于M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞中Arg1、MMR mRNA表达量同M1型巨噬细胞比较显著增高.IRF5 siRNA转染巨噬细胞后,IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS mRNA的表达量显著降低,Arg1、MMRmRNA的表达量明显增加.Western blot法检测结果显示IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS蛋白的表达量显著降低,Arg1、MMR蛋白的表达量明显增加,极化状态向M2型巨噬细胞偏移.结论 IRF5对巨噬细胞的极化调控有重要作用,可作为鉴别M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的重要标志物.
关键词： 干扰素调节因子5(IRF5) 小干扰RNA M1型巨噬细胞 M2型巨噬细胞 极化 -
猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用
目的 通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制.方法 实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL.用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响.结果 与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高.100 μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P＜0.01).结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达.
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Notch信号调控巨噬细胞激活分子机制的研究进展
巨噬细胞是机体抗感染免疫的主要效应细胞,是一类具有异质性的细胞亚群.因其解剖位置和功能表型上的差异,巨噬细胞可分为两类:组织定居巨噬细胞和炎性巨噬细胞.其中,炎性巨噬细胞的产生是巨噬细胞激活的表现形式,也是抵抗病原体入侵和重构组织稳态的一种免疫应答方式.巨噬细胞主要存在两种激活方式:经典激活和替代激活,激活后的巨噬细胞分别行使特定的功能.Notch信号通路可调控体内多种免疫细胞发育和功能,并通过多种分子机制调控巨噬细胞的激活.本文拟从巨噬细胞的类型、激活方式和Notch调控巨噬细胞激活的分子机制方面进行综述.
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M1型巨噬细胞糖代谢重编程机制及其在炎症启动中的关键作用
巨噬细胞是机体主要的炎症效应细胞,不仅是机体对抗感染的重要武器,而且与临床上大多数疾病的发生发展密切相关.正常细胞以葡萄糖氧化磷酸化途径代谢产能,在缺氧环境下则以糖酵解途径为主.而肿瘤细胞在氧气充足条件下也通过糖酵解代谢产能,这就是经典的Warburg效应理论.研究表明,M1型极化巨噬细胞可发生与肿瘤细胞类似的糖代谢重编程,表现为有氧糖酵解增强和氧化磷酸化减弱,而阻断糖代谢重编程可有效抑制炎症反应.近年来,免疫和代谢相关性研究成为学术界关注热点,并催生了免疫代谢学的概念,其中巨噬细胞与代谢的关联性研究也取得了丰硕成果.本文重点阐述了M1型极化巨噬细胞糖代谢重编程的可能机制,并分析了它在炎症启动调控中的关键作用,以期为临床上炎症相关疾病防治提供新策略.
