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苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中BIP表达的影响
目的 通过研究苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中结合免疫球蛋白(BIP)表达的影响,以探讨其诱导肿瘤凋亡的可能机制.方法 运用移植瘤体积判定肿瘤生长抑制,TUNEL检测细胞凋亡率,原位杂交技术显现BIP表达状况.结果 经不同浓度苦参素处理9d后,肿瘤平均体积出现明显缩小(P＜0.05);各剂量组均出现细胞凋亡(P＜0.01);BIP表达明显下降(P＜0.01).结论 苦参素诱导裸鼠移植瘤凋亡的作用与调控内质网应激信号通路相关,BIP基因下调可能是其作用靶点之一.
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硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡及分子伴侣BiP表达的影响
本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)的凋亡诱导作用及其对H929细胞中分子伴侣BiP表达的影响.以不同浓度硼替佐米处理H929细胞24小时后,采用Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot检测靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白的表达.结果表明:不同浓度硼替佐米(20、40、80 nmol/L)均可诱导靶细胞凋亡,凋亡率分别为(15.73±0.67)%、(27.83±1.26)%及(44.17±2.25)%,呈剂量依赖性,且均显著高于未处理组(1.21±0.07%)(P＜0.05);经不同浓度硼替佐米处理后,靶细胞BiP mRNA和BiP蛋白水平均高于未处理组,且二者变化一致;在相近的促凋亡条件下(凋亡率约40%-50%),标准内质网应激诱导剂brefeldin A(500 ng/ml,24小时)对H929细胞BiP mRNA和BiP蛋白表达的上调作用与硼替佐米(80 nmol/L,24小时)基本一致.结论:硼替佐米诱导H929细胞凋亡并伴有分子伴侣BiP mRNA和BiP蛋白表达上调,表明硼替佐米诱导的H929细胞凋亡极可能涉及内质网应激反应.
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p38MAPK对轻度热应激大鼠脾脏巨噬细胞免疫功能的影响
目的: 探讨p38MAPK在Bip蛋白介导的体外轻度热应激大鼠巨噬细胞功能改变中的信号作用.方法: p38MAPK抑制剂预处理大鼠脾脏巨噬细胞,将细胞置于41℃恒温箱中,使细胞轻度热应激,1 h后恢复到37℃(抑制组),以未应激(对照组)和41℃热应激1 h后60 min巨噬细胞(应激组)为对照,分别检测3组巨噬细胞吞噬、杀伤、趋化功能,同时检测p38MAPK蛋白和Bip蛋白的表达.结果: p38MAPK抑制剂预处理大鼠脾脏巨噬细胞,与应激组比较,轻度热应激后巨噬细胞吞噬、趋化和杀伤活性明显降低(0.17±0.01 vs 0.74±0.03,33.32±3.55 vs 82.07±5.17,24.20%±2.39% vs 60.80%±4.02%,均P<0.01);应激组p38MAPK蛋白表达明显上调,p38MAPK抑制剂预处理后,抑制组p38 MAPK蛋白表达受到抑制,与应激组比较差异有显著性(p38/β-actin: 2.863±0.794 vs 4.752±1.386,P<0.01);Bip蛋白的表达(Bip/β-act in)也因p38MAPK抑制剂预处理而由应激组的1.270±0.535降至抑制组的1.028±1.061( P<0.05).结论: p38MAPK抑制剂可显著抑制轻度热应激大鼠巨噬细胞吞噬、趋化和杀伤功能以及p38MAPK和Bip蛋白的表达.
关键词： 轻度热应激 巨噬细胞 免疫 BIP 丝裂原激活的蛋白激酶 -
克罗米芬联合炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征的效果 及对BiP、CTGF的影响
目的 分析克罗米芬联合炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征的效果及对内质网分子伴侣免疫球蛋白结合蛋白(BiP)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 选择2015年2月-2016年3月于我院接受治疗的多囊卵巢综合征患者74例,按照随机分配原则将其分为对照组和观察组,各37例.其中,对照组患者给予克罗米芬治疗,观察组在其基础上给予炔雌醇环丙孕酮.对两组患者血清性激素水平、BiP、CTGF表达水平以及卵巢功能和妊娠情况进行评估.结果 连续3个疗程治疗结束后,相比对照组,观察组FSH水平显著升高(P<0.05),血清LH、T水平显著降低(P<0.05).两组HCG日内膜厚度、卵泡成熟时间无明显差异(P>0.05);相比对照组,观察组HCG日优势卵泡个数、2年内妊娠率均显著提高(P<0.05).治疗后观察组血清CTGF及BiP表达水平较对照组显著降低(P<0.05).结论 克罗米芬联合炔雌醇环丙孕酮可有效治疗多囊卵巢综合征,提高患者妊娠率,降低患者BiP和CTGF的表达水平.
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未折叠蛋白应答在强直性脊柱炎发病机制中的意义探讨
目的:通过研究强直性脊柱炎(AS)病人的外周血单个核细胞(PBMC)/关节液单个核细胞(SFMC)的基因谱,了解有无支持UPR假说的转录物以及那些细胞参与未折叠蛋白应答(UPR),UPR在AS病人的变化及其在关节炎发病机制中的作用和意义.方法:AS病人的PBMC/SFMC基因表达谱通过含1176基因的cDNA微阵列扫描得到,结果中比较AS与健康自愿者和RA病人有差异表达的基因C2、C3、C8、LMP-2、LMP-7和BiP(UPR的标志物)再以RT-PCR验证.结果:AS患者的SFMC中的BiP表达显著高于RA患者SFMC组(RT-PCR的均数和标准差为86.4±111.3和18.5±13.0,两者比较,P=0.044),AS和RA患者SFMC组的C2分别为91.6±36.7和18.5±3.6(两者比较,P＜0.037),而且AS患者的SFMC中BiP和UPR相关的蛋白酶体C2的增高水平密切相关(相关系数r=0.9).另外,研究还发现,AS患者SFMC过度表达BiP的细胞是单核/巨噬细胞.结论:内质网UPR确实发生在AS患者SFMC中的巨噬细胞.结果显示UPR应答在AS病人关节炎症的初期和延续中起重要的作用.
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UPR在人胆管癌细胞株QBC939中的作用
目的:研究UPR(未折叠蛋白反应,unfolded protein response)在QBC939细胞中的作用,为临床治疗胆管癌提供新思路.方法:低剂量过氧化氢(H2O2、顺铂(DDP)作用于人胆管癌QBC939细胞系,MTT法测定不同处理组细胞生长曲线,western-blot法测定不同处理组IRElα、BiP蛋白表达情况.结果:低剂量过氧化氢诱导QBC939增殖,顺铂抑制QBC939细胞增殖,IREloα、BiP蛋白在过氧化氢组表达强阳性.结论:UPR促进细胞增殖,对细胞起保护作用,降低顺铂的抑制细胞作用.
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人类胚胎干细胞分化研究
目的 分别观察神经分化培养液和视黄酸对人类胚胎干细胞分化的作用.方法 采用无滋养层细胞方法培养H9细胞,用化学成分确定的神经分化培养液诱导H9细胞神经分化,检测神经细胞特征蛋白表达;用视黄酸(RA)培养液诱导H9细胞分化,检测分化过程中内质网应激蛋白BIP蛋白表达变化.结果 神经分化培养液诱导H9细胞分化成神经细胞;RA诱导的H9细胞分化过程中,BIP的表达随分化上调.结论 人类胚胎干细胞分化提供了衍生神经细胞的潜在细胞来源和发育研究的平台.
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奥曲肽联合NSAIDs对结肠癌细胞生长的影响及作用机制
目的 研究奥曲肽与非甾体类抗炎药物(NSAIDs)塞来昔布联合用药对人结肠癌细胞生长的影响及作用机制.方法 CCK-8法测定塞来昔布、奥曲肽单用及两者联合应用对人结肠癌细胞SW480增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化及细胞凋亡率的变化;Western blot 检测未折叠蛋白反应(UPR)的标志分子BiP蛋白的表达.结果 奥曲肽与塞来昔布联合应用与各自单用相比,细胞增殖减少,凋亡增加(P＜0.05),各细胞时相的比例G2M期无明显变化(P＞0.05),G0G1期增加(P＜0.05),S期减少(P＜0.05).0、20、40、60、80 μmol/L塞来昔布作用后细胞BiP表达量逐渐增加,80 μmol/L 塞来昔布与0、0.25、0.5、1、2 mg/L奥曲肽作用后细胞BiP的表达量均减少.结论 奥曲肽与塞来昔布联合应用能增强塞来昔布的抗肿瘤作用,其作用机制与奥曲肽抑制塞来昔布引起的UPR相关.
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p-ERK1/2在缺血预处理大鼠大脑皮层的表达和作用
目的:探讨p - ERK1/2在缺血预处理大鼠大脑皮层的表达及作用.方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血预处理模型,将大鼠随机分为假预处理组(Sham)、预处理组(BIP)和MAPK抑制剂组(U0126),各组又分4个亚组.其中3个亚组分别于假预处理或预处理后15min、2h、24h用western blot检测大脑皮层p-ERK1/2的表达,另外1个亚组在假预处理或预处理后24h栓塞左大脑中动脉2h,24h后行神经功能缺损评分,TTC染色法测脑梗死体积.结果:预处理后15min、2h大脑皮层p-ERK1/2表达较强,与假预处理组相比有统计学意义(P＜0.05),预处理后24h大脑皮层p-ERK1/2表达回落,与假预处理组相比无统计学差别(P＞0.05),MAPK抑制剂几乎完全抑制预处理后p-ER.K1/2表达,与假预处理组相比无统计学差别(P＞0.05);与假预处理组相比,预处理显著减少大脑中动脉栓塞导致的脑梗死体积(P＜0.05),MAPK抑制剂U0126明显削弱该保护作用(P＜0.05);预处理减少神经功能缺损.结论:脑缺血预处理可能通过增强大脑皮层p-ERK1/2表达而保护皮层,减少脑梗死体积及神经功能缺损.
