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克罗诺杆菌分种方法研究进展
克罗诺杆菌,原名阪崎肠杆菌,是污染婴幼儿配方奶粉的主要致病菌,能感染新生儿,并导致严重的坏死性小肠结肠炎、菌血症和脑膜炎等疾病.随着对该菌认识的深入,阪崎肠杆菌被命名为肠杆菌科独立的新属——克罗诺杆菌属.新分类表明克罗诺杆菌属共包含7个种,每个种之间基因组构成和致病性存在差异,因此分种是克罗诺杆菌研究的基础,对进一步认识和了解克罗诺杆菌具有重要意义.近年来,除了传统生化方法分种,一系列分子生物学方法也应用于克罗诺杆菌的分种.本文综述了克罗诺杆菌的生物学特性和目前用于克罗诺杆菌分种的各种方法,以期增加对克罗诺杆菌分种方法的认识,为今后的研究工作提供依据.
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60株克罗诺杆菌的药敏分析
目的 研究国内分离于11个省(直辖市)婴幼儿配方奶粉或米粉等食品标本中的60株克罗诺杆菌的药物敏感性和耐药性.方法 采用Kirby-Bauer纸片扩散法测定菌株对7类14种抗生素的药敏情况.结果 菌株对头孢吡肟、亚胺培南、美罗陪南平、环丙沙星、复方新诺明5种抗生素的敏感率较高,达到93.5％.但有4株菌对14种抗生素全部耐药,4株菌对头孢呋辛耐药,1株菌对阿莫西林／克拉维酸耐药.结论 60株克罗诺杆菌中,56株菌对目前医院内治疗肠杆菌科感染的多数抗生素药物敏感；4株菌具有强耐药性,其耐药机制需要今后进一步研究证实.
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阪崎肠杆菌的分类变化及新种属生物学特性
阪崎肠杆菌是影响婴幼儿配方粉安全的主要致病菌之一,1980年被定义为一个种,然而,<国际系统与进化微生物学杂志>
在2008年58卷第6部分的通知单上公布了阪崎肠杆茵重新分类后的新名称和新组合.本文综述了该菌的分类关系、新属和新种生物学特性及其研究进展,以便于国内相关人员及时了解阪崎肠杆菌的新动态,也有助于中文名称的统一与规范. -
克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)分子分型技术研究进展
克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)是污染婴幼儿配方粉的主要致病菌.近年来克罗诺杆菌的分类地位已由早期的黄色阴沟肠杆菌被命名为肠杆菌科独立的新属——克罗诺杆菌属.对克罗诺杆菌进行分子分型研究,在监控、预警及预防克罗诺杆菌病的暴发和散发等方面具有重要意义.目前,克罗诺杆菌的分子分型技术主要有脉冲场凝胶电泳分型1多位点序列分型1多位点可变数目串联重复序列分型等.本文综述了该菌的生物学特征及分子分型技术的研究进展.
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2012-2014年中国婴儿配方食品和谷基辅食类食品及临床腹泻病例来源的克罗诺杆菌种水平鉴定研究
目的 建立一种基于细菌RNA聚合酶β亚基编码基因(rpoB)的克罗诺杆菌种鉴定PCR方法,对不同来源的克罗诺杆菌进行种水平鉴定.方法 通过rpoB基因设计针对克罗诺杆菌7个种的引物,以9株参考菌株作为参照,对261株2012-2014年收集的我国婴儿配方食品和谷基辅食类食品及临床腹泻病例来源的克罗诺杆菌进行种水平鉴定.结果 9株参考菌株PCR结果与对应大小一致,261株克罗诺杆菌中的179株为阪崎克罗诺杆菌,56株为丙二酸盐克罗诺杆菌,13株为尤尼沃斯克罗诺杆菌,11株为都柏林克罗诺杆菌,2株为苏黎世克罗诺杆菌,分别占总菌株数的68.58％、21.46％、4.98％、4.21％和0.77％.结论 建立的克罗诺杆菌PCR法种水平鉴定具有特异、便捷、灵敏等优势,可为我国食品安全克罗诺杆菌的风险监测和控制提供技术支持.
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广西市售婴儿食品中克罗诺菌分离株基因特征及进化分类鉴定
目的 分析广西市售婴儿食品中的克罗诺菌分离株的种类、表型和基因特性.方法 将保存的试验菌株进行复苏,通过API 20E生化条和ompA基因扩增检测进行初步鉴定,扩增16S rRNA基因后进行测序,将获得的全16S rRNA基因序列在GeneBank数据库上比对,构建进化树,确认是否为克罗诺菌.将试验菌接种于显色平板观察其表型和黄色素的产生情况,通过手工生化进行分型,确定其种属.结果 9株分离菌确定为克罗诺菌,有5种生化型,属于4个克罗诺种.检出Cronobacter sakazakii 6株菌,C.malonaticus、C.muytjensii和C.dublinensis各有1株;7株菌符合API 20E鉴定结果,9株分离菌均可检测到ompA基因.结论 广西市售婴儿食品中克罗诺菌的污染以C.sakazakii为主,生化表型、种属及基因型具有多样性;鉴定时仅以单一的生化或其他表型作为判别依据存在很大的局限,需辅以分子生物学手段加以鉴别.
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营养面条生产过程中克罗诺杆菌污染状况与溯源研究
目的 调查营养面条生产加工环节中肠杆菌科和克罗诺杆菌的污染状况,对克罗诺杆菌进行溯源研究.方法 采集某营养面条生产企业的生产原料、中间产品、环境、设备、人员和终产品等共101份样品,进行肠杆菌科和克罗诺杆菌检测.利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对克罗诺杆菌进行分子分型和溯源研究.结果 在整个生产过程的样品中,肠杆菌科检出率为53.5％ (54/101),其中环境样品的肠杆菌科检出率高(72.7％,16/22);克罗诺杆菌检出率为29.7％(30/101),其中终产品的克罗诺杆菌检出率高(50.0％,5/10).31株克罗诺杆菌分离株共获得20个PFGE带型,多样性较高,经聚类分析可划分为6个簇型.结论 营养面条生产加工环节中存在克罗诺杆菌的污染状况,该致病菌污染可能与原料污染有关.克罗诺杆菌的污染问题需要引起食品安全管理部门重视,加强生产加工过程监测,制定有效措施予以控制.
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我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌脉冲场凝胶电泳分子分型和多位点序列分型研究
目的 探讨我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌的主要分子分型特征,分析不同地区间菌株亲缘相关性,为我国克罗诺杆菌引起的疾病溯源提供技术支撑.方法 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法,对全国19个省/自治区/直辖市婴儿配方粉来源的49株克罗诺杆菌进行分型研究.结果 49株克罗诺杆菌PFGE分型得到38个带型,未发现有明显的优势分型和聚集现象.MLST共获得15个已知序列型(ST型)和2个新ST型,ST4、ST1和ST64为优势型别,分别占菌株总数的20.4％ (10/49)、18.4％ (9/49)、10.2％ (5/49).PFGE型和MLST型结果分析表明,具有相同PFGE型的菌株也有相同的MLST型,而相同MLST型却不一定具有较高的亲缘关系.结论 我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌图谱具有高多态性和离散性,据此预测我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌导致婴儿患病以散发为主,出现多人患病的暴发事件几率较低..
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2010-2014年及2016年四川省婴幼儿食品及临床分离克罗诺杆菌耐药分析
目的 了解四川省市售婴幼儿奶粉、婴幼儿谷物辅助食品及临床病例中分离的克罗诺杆菌药物敏感性特征.方法 采用微量肉汤稀释法测定109株克罗诺杆菌的低抑菌浓度(M IC),使用6类8种抗生素进行药物敏感性试验.结果 109株克罗诺杆菌对环丙沙星、萘啶酸、头孢噻肟、庆大霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、氯霉素、四环素等7种抗生素均敏感,53株对头孢西丁耐药,耐药率达48.6％ (53/109);甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和氯霉素的MIC值呈逐年上升趋势.结论 克罗诺杆菌对二代头孢类药物耐受性较高,可进一步研究其耐药分子机理,为促进临床合理用药提供参考,以控制克罗诺杆菌多重耐药菌株的产生.
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不同年龄人群粪便样本中克罗诺杆菌分离情况的研究
目的 初步了解不同年龄人群可能感染克罗诺杆菌的情况,并比较从粪便样本中分离培养和鉴定克罗诺杆菌的方法.方法 采用直接涂板和增菌后涂板的两种分离培养方法,生化实验和荧光定量PCR进行进一步鉴定,分种则用基因usA序列分析的方法实现.结果 本研究在1 285份不同年龄人群的粪便样本中分离得到克罗诺杆菌27株,阳性率为2.10％.各年龄组的阳性率,经过x2检验差异无统计学意义.27株克罗诺杆菌分为4个种,主要为阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐克罗诺杆菌.用CSB增菌液和CCI选择性培养基要比用mLST/Van增菌液和EIA选择性培养基敏感性高(P＜0.05).结论 克罗诺杆菌对不同年龄组的人群都有潜在的危害性,但主要为婴幼儿,因此要加强监测,提高防范意识.
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我国部分地区克罗诺杆菌分离株分种及其方法的比较研究
目的 比较研究克罗诺杆菌分离株的分种方法,探讨其中准确、快速有效分种方法.方法 采用生化实验和对基因16S rRNA,fusA序列聚类分析的方法.结果 105株菌的4项生化结果呈现6种情况,但无法将C.turicensis和C.universalis两个种分开;基于16S rRNA基因分析分种结果将105株菌分为5组,无法将C.sakazakii和C.malonaticus这两个种的菌株有效地分开;而基于fusA基因分析分种结果可将所有菌株分为C.sakazakii(58株)、C.malonaticus(30株)、C.dublinensis(11株)、C.turicensis(5株)、C.muytjensii(1株).结论 目前采用fusA序列分种相对简捷有效,但缺乏直观,需再研究达到快速检测目的的其他方法.
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我国克罗诺杆菌污染现状与预防控制措施研究进展
克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)是一种能够引起新生儿及婴幼儿脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎等疾病的食源性条件致病菌.克罗诺杆菌在自然界中广泛存在,已从临床、食品及环境样本中被分离出来.了解食品及环境中克罗诺杆菌的污染状况,将有助于建立有效的预防控制措施以降低克罗诺杆菌爆发的风险.本文对2008年以来我国克罗诺杆菌的污染状况和预防控制措施进行了综述.
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克罗诺杆菌种间鉴定recN基因方法建立
目的 建立一种基于重组和修复蛋白基因(recN)的克罗诺杆菌种间鉴定方法,将不同来源的克罗诺杆菌分离株鉴定到种.方法 扩增recN基因全长序列,选取不同长度的recN基因片段,用MEGA 4.0软件对克罗诺杆菌8个参考菌株进行聚类分析,确定克罗诺杆菌种间鉴定可信度高、序列较短的片段;设计并合成该片段的引物,以8株参考菌株作为参照,构建44株克罗诺杆菌实验菌株的聚类分析图,并用生化反应鉴定对聚类结果进行佐证.结果 基于recN基因上一段640 bp的片段可对克罗诺杆菌不同种的菌株进行区分;以8株参考菌株在聚类图上的位置作为参考,根据遗传距离的远近,44株分离菌中有37株阪崎克罗诺杆菌,3株丙二酸盐阳性克罗诺杆菌,3株苏黎世克罗诺杆菌,1株尤尼沃斯克罗诺杆菌,与生化反应鉴定结果一致.结论 该方法与生化鉴定和基于recN全基因方法相比简便快速,PCR扩增后,一次测序反应就可以将克罗诺杆菌鉴定到种.
关键词： 克罗诺杆菌 重组和修复蛋白基因(recN) 种间鉴定 -
关于《GB 4789.40-2010阪崎肠杆菌检验》的商榷
《GB 4789.40-2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》[1](以下简称《GB4789.40》),自2010年颁布(替代国家推荐标准《GB/T 4789.40-2008食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》)并实施以来,对于强化和规范阪崎肠杆菌检验,起到了其应有的作用.但随着国际上对阪崎肠杆菌的研究进展和对阪崎肠杆菌检验的改进,《GB 4789.40》存在的问题日益突出.本文拟探讨《GB 4789.40》存在的主要问题并提出相应的建议,以供商榷.
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MALDI Biotyper与API20E对克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的鉴定结果比较
目的:评价MALDI-TOF MS Biotyper鉴定克罗诺杆菌的效果.方法:应用MALDI-TOF MS Biotyper与API20E分别对32株克罗诺杆菌(28株分离株,4株参考菌株)与相近菌株阴沟肠杆菌、产气肠杆菌进行鉴定,并对鉴定结果分析比较.结果:MALDI-TOF MS Biotyper2.0将32株克罗诺杆菌鉴定到种、属水平分别为56.2%和37.5%;API20E为75%、21.9%.3株菌未获得鉴定结果,其余29株菌的鉴定结果相符.结论:MALDI-TOF MS Biotyper作为一种新的细菌鉴定手段,可用于克罗诺杆菌的鉴定.
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婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌DNA快速提取方法的应用
目的 探讨婴幼儿奶粉前增菌液中克罗诺杆菌快速、简便、高效、经济的DNA提取方法.方法 制备克罗诺杆菌人工污染奶粉前增菌液,比较高速离心和氯仿振荡低速离心去除蛋白和脂质效果及简便性,应用煮沸法(去离子水、TE、TE-SDS)、异硫氰酸胍和硅胶膜吸附试剂盒法提取DNA,以本实验室建立的TaqMan-MGB实时荧光PCR评价效果.结果 氯仿振荡3000 rpm离心前处理效果比高速离心法好,TE-SDS煮沸法仅需3步骤、19 min完成DNA提取,比试剂盒提取法更快速,实时荧光PCR效果与试剂盒法基本一致,并优于去离子水和TE煮沸法.结论 氯仿振荡3000 rpm离心后TE-SDS煮沸提取DNA,能满足TaqMan-MGB实时荧光PCR对婴幼儿奶粉前增菌液克罗诺杆菌的检测需求,提高食品安全风险监测的灵敏度和速度.
关键词： 克罗诺杆菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 煮沸法 -
克罗诺杆菌致病性研究进展及流行现状
克罗诺杆菌是一种重要的食源性条件致病菌,可通过污染婴幼儿配方奶粉等食品导致新生儿的脑膜炎和小肠结肠炎等疾病.为了更加全面地了解这种新出现的病原菌,降低婴儿和潜在人群的感染,本文综述了克罗诺杆菌在鉴定与分型、致病机理、临床症状、感染来源和新研究进展,并介绍我国克罗诺杆菌的分离情况.
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克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在食品安全风险监测中的应用
目的 探讨克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在婴幼儿奶粉食品安全监测中的应用效果.方法 制备克罗诺杆菌染菌量为1.5×100～106 CFU/25g奶粉的样品,在增菌48 h内每隔4h各取1 ml提取DNA,进行TaqMan-MGB探针实时荧光PCR,并在婴幼儿奶粉食品安全风险监测中应用,同步进行细菌分离、TaqMan探针实时荧光PCR(美国FDA推荐),比较3种方法的敏感性和符合率.结果 3种方法可检测到1.5 CFU/25 g奶粉染菌量样本所需增菌培养的时间不一样,TaqMan-MGB探针实时荧光PCR需18h,美国FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR需24 h,分离培养则需要36 h.TaqMan-MGB探针实时荧光PCR从293份样本的前增菌液中检出15份阳性,从77个可疑菌落中检出23个阳性菌落,鉴定结果与另2种方法一致.结论 克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏,可用于婴幼儿奶粉筛查和辅助鉴定,提高食品安全风险监测的速度和灵敏度.
关键词： 克罗诺杆菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针 -
奶粉中克罗诺杆菌的检测技术与进展
克罗诺杆菌是目前影响范围比较广的致病菌,其污染的奶粉与幼儿致病问题已经被大众广泛关注.伴随有关人员对此菌的分析与当代相关科技的持续进步,此菌的分类出现了明显的变动.目前,奶粉中克罗诺杆菌的致病原理尚不清楚,为预防大众感染,对于此菌的检查与预防显得非常关键.本文主要对奶粉中克罗诺杆菌检测技术的发展历程以及出现的问题展开全面分析,以便为后续探究相应的凭证.
