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外排泵基因在白念珠菌生物膜耐药性产生中的作用
目的 观察白念珠菌在生物膜形成不同时期对氟康唑的敏感性,及外排泵基因在生物膜耐药性产生过程中的作用.方法 采用96孔微量培养皿进行白念珠茵生物膜的培养,用MTT法检测其对氟康唑的敏感性,并用半定量RT-PCR法测定生物膜形成不同时期CDR1、CDR2及MDR1基因表达的差异性.结果 白念珠菌生物膜在较早期(2h)对氟康唑仍然敏感(2～4μg/mL),随着白念珠茵生物膜的不断成熟,其耐药性不断增高;CDR1及CDR2基因在生物膜形成的早中期及成熟期的表达明显上调,尤其早期的高表达更为明显,而MDR1基因的表达只在生物膜形成早期有明显的高表达.结论 白念珠菌生物膜的耐药性随着其结构的成熟而不断增高;CDR1,CDR2及MDR1基因在生物膜形成早期有明显的高表达,但与生物膜耐药性的增加并不一致.因此,生物膜的耐药性可能是多种机制作用的结果.
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克拉霉素、多西环素对雌性BALB/c小鼠下生殖道解脲脲原体及其生物膜的影响
目的 探讨克拉霉素、多西环素对雌性BALB/c小鼠下生殖道解脲脲原体标准株血清4型(UU4)及其生物膜的清除作用.方法 构建UU4感染BALB/c小鼠下生殖道生物膜动物模型7d后,将小鼠分为空白组、感染组、克拉霉素组、多西环素组及两者联合用药组,除空白组、感染组小鼠外,分别用上述药物治疗7d和14d,并于治疗结束时及治疗结束后10d时取宫颈组织行扫描电镜(SEM)和荧光显微镜等检查.结果 SEM下克拉霉素、多西环素及两者联合治疗7d后小鼠宫颈仍可见游离的UU及其生物膜,治疗14d后无游离的UU,但生物膜结构仍然存在.结论 UU4形成的生物膜结构不能被常规剂量的克拉霉素和多西环素清除.
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TAC1与外排泵基因对白念珠菌生物膜形成的影响
目的 探究白念珠菌生物膜形成过程中不同时期的锌簇转录因子TAC1与外排泵基因MDR1,CDR1,CDR2与白念珠菌生物膜耐药的关系.方法9 6孔板培养白念珠菌生物膜,MTT法分别测定白念珠菌生物膜形成不同时期(4h,24h,48h)对氟康唑的敏感性.6孔板培养白念珠菌生物膜,分别在4h,24h,48h提取生物膜的总RNA,逆转录cDNA,RT-PCR检测TAC1,MDR1,CDR1,CDR2的基因表达量.结果 白念珠菌在生物膜的形成过程中TAC1,MDR1,CDR1,CDR2的基因表达差异具统计学意义,经过Bonferroni多重比较,结果显示标准株00889 TAC1,MDR1,CDR1,CDR2早期基因表达量比中、晚期高.临床敏感株359 TAC1,MDR1,CDR1,CDR2中期基因表达量比晚期高.结论 锌簇转录因子TAC1和外排泵基因可能在白念珠菌生物膜的早中期对氟康唑的耐药形成中发挥了一定作用.
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常见致病真菌生物膜研究进展
近年来,真菌生物膜日益受到研究人员的关注.生物膜已被证实与临床植入物的真菌感粢有关,认识真菌生物膜及其形成的影响因素和耐药机制对于防治临床真菌感染有着重大意义.本文从常见致病真菌生物膜的形成过程及结构、真菌生物膜形成的影响因素、生物膜形成对真菌药物敏感性的影响及可能机制、真菌生物膜的防治方法及可能的药物靶点等几个方面综述了目前对致病真菌生物膜的研究进展.
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痤疮丙酸杆菌抗生素耐药性研究进展
痤疮丙酸杆菌是皮肤共生菌,在痤疮炎性皮损的形成过程中占有重要地位.抑制或杀灭痤疮丙酸杆菌,能够有效控制及治疗痤疮.然而抗生素的广泛使用,使痤疮丙酸杆菌对痤疮常用抗生素产生耐药.耐药菌株的存在使得痤疮患者抗生素疗效降低,甚至引起其他耐药细菌出现,改变人类的微生物群组,增加机体其他细菌感染的机会.研究痤疮丙酸杆菌耐药情况及机制,有利于痤疮的治疗.
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铁离子对隐形眼镜上铜绿假单胞菌生物膜形成的影响
目的:观察游离铁、合成或生物铁螯合剂对隐形眼镜铜绿假单胞菌生物膜形成的影响.方法:铜绿假单胞菌生物膜中加入不同浓度的游离铁、不同浓度及不同种类的合成铁和螯合铁条件下定量检测生物膜上的菌落数.结果:低浓度游离铁离子的作用可以增强细菌的黏附量,以10μmol/L铁离子的作用明显.0.1μmol/L EDTA和乳铁蛋白可明显抑制铜绿假单胞菌生物膜的菌数.结论:低浓度游离铁离子的作用可以促进隐形眼镜铜绿假单胞菌生物膜形成,而一定浓度的乳铁蛋白及EDTA形成的缺铁情况下可阻止该生物膜的形成.
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五倍子不同组分对口腔细菌生物膜的清除效应
目的:研究五倍子不同提取组分对5 种主要与致龋密切相关的生物膜细菌生长抑制及清除的作用,为临床试验提供药物作用的浓度范围.方法: 选择与龋病发生密切相关的5 种口腔细菌,五倍子不同提取组分为五倍子多酚性化合物(GCE)、五倍子B(GCE-B,300 ml/L乙醇提取物1.80 g/L)、五倍子C(GCE-C,500 ml/L丙酮提取物4.67 g/L)、五倍子D(GCE-D,1 000 ml/L丙酮提取物0.80 g/L)、没食子酸、没食子酸甲酯.扫描电镜观察观察口腔细菌在MBECTM-Device上形成细菌生物膜的能力和形成情况;测定五倍子不同组分对5 种口腔细菌的小抑菌浓度MIC(minimal inhibitory concentration)和对5 种细菌生物膜的小生物膜清除浓度(minimal biofilm eradication concentration,MBEC).结果:在MBECTM-Device 提供的桩钉表面上口腔细菌能形成良好的生物膜结构,不同时段取出的样本可以观察到细菌从定植黏附到生物膜形成以及成熟生物膜结构.五倍子不同提取组分对5 种口腔浮游细菌均有良好的抑制作用.五倍子多酚性化合物、五倍子B对5种口腔生物膜细菌抑制作用的效果好,其次为五倍子C和五倍子D,没食子酸和没食子酸甲酯对口腔生物膜细菌的抑制作用较差.五倍子不同提取组分对5种口腔细菌生物膜的MBEC是MIC的2～16 倍左右.结论:中药五倍子不同提取组分中五倍子多酚性化合物和五倍子B对口腔生物膜细菌有很好的抑制和清除效应,MBEC比MIC能更客观的反映药物作用的浓度范围.
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人工口腔牙菌斑生物膜药敏实验模型的建立
目的:设计一种新的口腔保健品体外药敏实验模型.方法:以瑞典LKB2023液相层析系统的恒温操作箱为基础,建立一种新的口腔保健品体外药敏实验模型.以茶多酚、鞣酸、氟化钠为实验药物,比较了纸片法、琼脂稀释法和液体稀释法的药敏,再以人工口腔牙菌斑生物法比较这些药品对变形链球菌生物膜的敏感性.结果:纸片法抑菌实验结果全部阴性,琼脂稀释法和液体稀释法比较,液体稀释法比较敏感.而生物膜法则需要较高浓度的药品才能起到抑菌作用,与液体稀释法相比,对于NaF两者相差32倍,对于茶多酚和鞣酸相差16倍.结论:人工口腔牙菌斑生物膜药敏实验模型是一种较接近人口腔状况保健品基础实验模型.
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扫描同聚焦显微镜观察血链菌和粘性放线菌生物膜的形成
目的:观察血链菌和粘放菌体外形成生物膜的动态过程.方法:采用同聚焦显微镜技术,原位、立体、动态观察血链菌和粘放菌体外形成的生物膜.结果:生物膜形成8 h厚度达15.4 μm,细菌已聚集成簇,菌细胞分布是表层和基底较少,中间层较厚并较密.生物膜形成16 h后已基本成熟,细菌成簇厚度增加达34.3 μm.48 h后生物膜已成熟成谷穗状.结论:血链菌和粘放菌具有相互作用促进体外形成生物膜.CLSM观察生物膜有其独到优越性.
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黄连素复合生物膜作小型猪牙直接盖髓的组织学观察
目的：研究应用黄连素复合生物膜对小型猪牙行直接盖髓术的作用。方法：用黄连素复合生物膜做小型猪牙直接盖髓术且与氢氧化钙对照。分别于术后2、4、12周将小型猪快速处死，拔除实验牙及对照牙经固定、脱钙做组织切片，光镜下观察。结果：术后2周，实验组有修复性牙本质团块形成，术后4、12周，有牙本质桥形成，在髓腔侧有排列整齐的成牙本质细胞，牙髓无明显炎症，无变性，牙周组织正常，牙髓保存了活力。结论：黄连素复合生物膜对小型猪牙有良好的直接盖髓作用。
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牙槽外科中采用异种脱细胞真皮基质修复口腔软组织浅层缺损的效果
目的:评价在牙槽外科中采用正海生物膜(一种异种脱细胞真皮基质)修复口腔软组织浅层缺损的效果.方法:选择28例口腔软组织浅层缺损患者应用正海生物膜进行治疗,术后进行随访,观察生物膜成活情况,颜色、质地以及对患者的影响等,并进行统计分析.结果:术后生物膜全部成活,术后2周成活面积达(97.10±6.20)%;1个月生物膜收缩率为(9.68±11.16)%.受植床表面颜色多为粉红,质地柔软,瘢痕轻微;患者进食不受影响,未出现明显局部或全身反应.术前术后实验室检查项目无显著性差异.结论:应用正海生物膜治疗牙槽外科中常见口腔内软组织浅层缺损安全有效,值得临床推广使用.
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等离子体对基托树脂表面白色念珠菌生物膜的杀灭研究
目的:评价氩气、30％ H2O2和50％ H2O2等离子体对基托树脂表面生物膜内白色念珠菌的杀灭效果.方法:将甲基丙烯酸甲酯材料制作成大小为9 mm×9 mm×2 mm试件68块,在试件表面培养48 h白色念珠菌生物膜.取64块试件随机分为对照组和15个处理组(n=4),对照组不做处理,氩气等离子体分别处理60、120、180、240、300 s,30％ H202和50％ H202等离子体分别处理20、40、60、80、100 s.处理后洗脱、系列稀释、涂板,采用菌落形成单位计数法评估杀菌效果.剩余4块试件:1块作为对照组,其余3块分别用氩气、30％ H2O2和50％H2O2等离子体处理300 s,扫描电镜观察细胞表面损伤.结果:氩气等离子体处理300 s、30％ H202等离子体处理100 s、50％ H2O2等离子体处理80 s,杀灭率均超过99.99％.电镜下处理后的细胞膜表面粗糙,有孔洞.结论:氩气、30％ H2O2和50％H2O2等离子体均能有效杀灭生物膜内的白色念珠菌.
关键词： 等离子体 聚甲基丙烯酸甲脂树脂(PMMA) 白色念珠茵 生物膜 -
光动力疗法和二极管激光对粪肠球菌生物膜作用的研究
目的:研究光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)和二极管激光对体外培养的粪肠球菌生物膜的灭菌作用.方法:建立体外培养24 h的粪肠球菌生物膜模型48 个,随机分为4 组(n=12),PDT组和975 nm二极管激光(diode laser,DL)作为实验组,2.5%的NaClO(NaClO)和生理盐水(normal saline,NS)分别作为阳性和阴性对照组,标本处理后激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察各组生物膜中活菌、死菌的变化,平板细菌计数法检测生物膜内粪肠球菌的活力.结果:NaClO组、PDT组和DL组处理后粪肠球菌的菌量显著下降(P<0.05),3 组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:光动力疗法和975 nm二极管激光可以有效地杀灭生物膜内的粪肠球菌,效果与2.5%的NaClO相似.
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生物膜变形链球菌对反义寡核苷酸的摄取率检测
目的:探讨阳离子聚合物So-fast提高生物膜中变形链球菌对反义寡核苷酸摄取率的效果.方法:制备变形链球国际标准株GS5生物膜,在无载体和用阳离子聚合物作载体So-fastTM情况下用变形链球菌gtfB基因的反义脱氧寡核苷酸PS-ODN转化生物膜中变形链球菌,采用流式细胞仪检测生物膜中变形链球菌细菌对PS-ODN的摄取效率.结果:生物膜中的变形链球菌对裸反义寡核苷酸的摄取效率为16％,采用So-fastTM作为转化载体,摄取效率为71.7％.结论:阳离子聚合物可促进反义寡核苷酸通过变形链球菌细胞膜,使其摄取效率明显提高.
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饥饿期粪肠球菌生物膜毒力因子明胶酶E表达研究
目的:研究粪肠球菌生物膜形成相关毒力因子明胶酶E(gelE)在饥饿期及药物作用后的表达情况.方法:体外建立对数期、稳定期、饥饿期粪肠球菌生物膜模型,分别以1%、2.5%、5.25%次氯酸钠溶液作用于各时期粪肠球菌生物膜后,用Real-time PCR对gelE的基因表达相对量进行检测.结果:gelE基因表达相对量,饥饿期高于稳定期及对数期(P<0.05);用药后,3个期gelE基因表达相对量,5.25%次氯酸钠溶液组低于2.5%次氯酸钠溶液组和1%次氯酸钠溶液组(P<0.05).结论:饥饿期粪肠球菌生物膜形成相关毒力因子gelE较对数期及稳定期表达增强.次氯酸钠浓度依赖性可抑制粪肠球菌毒力因子gelE的表达.
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BLB种植体周骨缺损修复的体视显微镜观察
目的:探讨有生物膜覆盖和无生物膜覆盖2种情况下种植体周围骨缺损新骨组织再生修复情况.方法:在犬2侧股骨种植体一侧形成水平宽度3 mm,垂直深度5 mm,水平长度分别为1、2、3、4 mm的标准梯度骨缺损;一侧覆盖生物膜后缝合,另一侧直接拉拢缝合.术后3个月处死动物,取含种植体的骨段进行体视显微镜观察.结果:水平长度为1、2、3 mm骨缺损,缺损区完全被新骨充填,主要为致密的皮质骨.4 mm缺损区新生骨组织主要为小梁骨,在无膜组新生骨处可见较大的腔隙.结论:3 mm以下的骨缺损无论有无生物膜覆盖均获得很好的骨性修复.较大范围的骨缺损应采取适当措施促进骨再生修复.
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BLB种植体周骨缺损修复的影像学研究
目的:探讨生物膜对不同范围骨缺损再生修复的影响.方法:在犬两侧股骨内植入种植体并形成水平宽度3 mm、垂直深度5 mm、水平长度分别为0、1、2、3、4mm的标准梯度骨缺损,实验侧直接拉拢缝合,对照侧覆盖生物膜后缝合.术后3个月处死动物,取含种植体的骨段进行影像学观察.结果:3 mm以下缺损区无论有无生物膜骨密度与周围骨组织密度无明显差异;4 mm缺损骨密度有膜组高于无膜组.结论:生物膜对3mm以下骨缺损骨组织的再生修复无明显影响,对较大范围骨缺损的修复有重要作用.
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ZnSO4对变异链球菌生长及生物膜形成影响的研究
目的:观察不同浓度ZnSO4对浮游状态变异链球菌生长、产酸及其生物膜形成的影响.方法:将变异链球菌UA159分别接种于含ZnSO40、1、2、5、10 mmol/L的BHI培养液中,37℃、厌氧培养.分别于培养4、8、12、18、24h检测各组培养液的OD值、pH值,并进行CFU(Colony-Forming Units)计数.同时,将变异链球菌分别于上述各浓度ZnSO4共同培养24 h,使之在盖玻片上形成生物膜；采用CUF计数法观察各组生物膜中细菌数,并运用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察各组生物膜中活菌数及其厚度.实验数据用t检验法进行统计分析.结果:1～10 mmoL/L不同浓度ZnSO4均能抑制浮游态变异链球菌的生长、产酸；并使其生物膜变薄,活菌数减少,且其作用随ZnSO4浓度的增加而增加,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).但是,虽然ZnSO4的浓度为10 mmol/L时能使变异链球菌处于生长停滞状态,却仍有一定的产酸能力,且生物膜内的细菌也未被全部杀死.结论:ZnSO4仅能抑制变异链球菌的生长,无法将其彻底杀灭并阻断其产酸.
关键词： 变异链球菌 ZnSO4 生物膜 激光共聚焦扫描显微镜 -
粪肠球菌毒力基因与生物膜形成关系的研究
目的:探讨粪肠球菌毒力基因gelE、ebpR、srtA、srtC对粪肠球菌生物膜形成能力及结构的影响.方法:用革兰染色和镜检观察粪肠球菌野生株和gelE突变株、ebpR突变株、srtA突变株、srtC突变株菌落形态及镜下形态；分光光度计检测粪肠球菌野生株OG1RF与各毒力基因突变株细菌的生长状况；将粪肠球菌野生株和各毒力基因突变株接种于BHI培养基,厌氧培养4、8、12、16、20、24、36 h形成生物膜,结晶紫染色后在酶标仪595 nm波长下测其吸光度(OD)值,比较各菌株生物膜的形成量；将粪肠球菌野生株和各毒力基因突变株接种于牙本质片,用BHI厌氧培养16h时形成生物膜,扫描电镜观察各菌株生物膜的形态和结构.结果:除粪肠球菌毒力基因gelE突变株细胞链长与野生株有差异外,各毒力突变株与野生株形态上无差异,且其生长速度相似；12h至20 h间,4种突变株生物膜形成量均明显低于野生株(P＜0.05)；各突变株生物膜形成量以srtA突变株高,geIE、ebpR突变株次之,srtC突变株低,差异有统计学意义(P＜0.05)；扫描电镜观察显示,野生株形成密集、多层融合成片的生物膜结构,而突变株仅可见堆积的微菌落,未形成网络状结构.结论:毒力基因gelE、ebpR、srtA、srtC均能不同程度影响粪肠球菌生物膜的形成量及其空间结构.
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变异链球菌LuxS基因缺陷突变株的构建及其生物膜结构的初步观察研究
目的:通过同源重组法构建变异链球菌LuxS基因缺陷突变菌株,比较其与变异链球菌UA159标准株在生物膜形成上的差异.方法:运用基因同源重组方法将氯霉素抗性基因(Cmr)与LuxS基因上下游区域的2个基因片段按一定顺序重组到PUC载体的多克隆位点中,构建出带氯霉素抗性标志的重组质粒,将载体质粒转化到含完整LuxS基因的变异链球菌UA159中,利用氯霉素抗性筛选出LuxS基因缺陷的突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验进行检测.以釉质磨片为载体,在扫描电镜下观察上述两菌株含有20g/L葡萄糖、20g/L蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中形成24h的生物膜.结果:PCR基因扩增结果显示:突变株LuxS基因已被Cmr基因完全替换,成功的构建了变异链球菌LuxS基因突变株,并且突变株不能诱导哈氏弧菌BB170的生物发光.当用葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌UA159标准株和LuxS基因突变株所形成的生物膜表现型未见明显差异；而用蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物膜有明显不同,UA159生物膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株生物膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落.结论:成功构建出LuxS基因缺陷的变异链球菌突变株,与变异链球菌UA159标准株其生物膜结构发生改变,提示LuxS会影响变异链球菌生物膜的形成.
