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再治疗根管内粪肠球菌的分离鉴定及其相关特性研究
目的:研究粪肠球菌在再治疗根管内的检出率及其相关特性(生长情况、生物膜形成能力及耐药性).方法:收集临床病例样本54例,使用粪肠球菌选择性培养基和胆盐七叶苷琼脂进行分离培养.分离株通过16SrRNA测序法鉴定.将鉴定正确的粪肠球菌临床分菌株和作为对照的粪肠球菌标准株(EfATCC29212)用BHI培养基进行培养,分别对比其生长曲线、生物膜形成能力及耐药性.结果:收集临床病例样本54例,分离鉴定为粪肠球菌的有18例,检出率为33.33％.经统计分析:粪肠球菌在再治疗根管内的检出率在病人性别、年龄、患牙尖周稀疏大小及距离上次根管治疗时间长短等方面无统计学差异(P＞0.05)；但与上次根管治疗根充是否到位有关,欠填根管中粪肠球菌的检出率明显高于恰填根管(P＜O.05),但不同欠填长度组间粪肠球菌的检出率无统计学差异(P＞0.05).此外,粪肠球菌临床分离株与对照菌株在生长曲线、生物膜形成能力及耐药性等方面均无统计学差异(P＞0.05).结论:粪肠球菌在再治疗根管内的检出率为33.33％,其检出率与上次根管治疗根充情况有关.同时,粪肠球菌临床分离株与标准株的生长情况、生物膜形成能力及耐药性基本一致.
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密度感应拮抗剂C-30对变异链球菌生物膜的影响
目的:研究密度感应拮抗剂呋喃C-30对变异链球菌生物膜形成的影响.方法:将已合成的密度感应拮抗剂呋喃C-30用BHI培养基配制至终浓度分别为2.0,4.0 μg/mL,再加入新鲜培养的变异链球菌液,37℃微需氧培养24 h,在96孔板上形成体外生物膜,用MTT法检测生物膜的量.激光共聚焦显微镜观察不同浓度呋喃C-30处理后的生物膜结构.实验中以不含呋喃C-30的BHl培养基作为阴性对照.结果:实验发现呋喃C-30不会对变异链球菌的生长产生影响,但随着呋喃C-30的浓度增加,变异链球菌形成生物膜的量显著降低(P<0.05);激光共聚焦显微镜的结果也表明呋喃C-30浓度的增加使生物膜菌间结构变得稀疏,集聚程度明显减轻.结论:密度感应拮抗剂呋喃C-30能有效抑制变异链球菌生物膜的形成.
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激光扫描共聚焦显微镜观察碱性环境对粪肠球菌生物膜的影响
目的:比较不同碱性条件对生物膜状态粪肠球菌的影响.方法:制备粪肠球菌生物膜,分别用pH值为7、9和11的TSB培养液作用2h后,用激光扫描共聚焦显微镜观察粪肠球菌生物膜的变化.结果:pH值由7升到9时,生物膜内、中、外各层活菌比例虽有所减少,但差异无统计学意义(P＞0.05)；当pH值11时,各层活菌比例虽然均较pH值为7和9时明显减少(P＜0.05),但仍有大量活菌存在.结论:粪肠球菌对碱性环境具有强的耐受性,pH值为7～9时,对生物膜状态粪肠球菌无明显影响.
关键词： 粪肠球菌 生物膜 pH值 激光扫描共聚焦显微镜 -
茶多酚、MTAD和次氯酸钠液抑制粪肠球菌及其生物膜的作用比较
目的:检测中药茶多酚、MTAD、52.5 g/L次氯酸钠抑制根管壁粪肠球菌生物膜的能力,并分析中药茶多酚作为根管冲洗液的可行性.方法:采用微孔板滴定法检测茶多酚,MTAD和52.5 g/L次氯酸钠液对粪肠球菌的小抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC),采用琼脂扩散实验检测3种抗菌剂对粪肠球菌的抑菌圈.通过建立粪肠球菌感染根管3周和6周的模型,分别用茶多酚、MTAD和52.5 g/L次氯酸钠液对粪肠球菌感染后的根管进行处理,然后对根管壁生物膜中的细菌生存情况进行定性定量分析,比较这3种根管冲洗液抗粪肠球菌生物膜的能力.结果:MIC、MBC和琼脂扩散实验显示:3组冲洗剂对粪肠球菌均有抑制作用.在粪肠球菌感染根管3周的生物膜中,MTAD和次氯酸钠液可以完全抑制粪肠球菌生物膜,茶多酚处理后虽仍有粪肠球菌生长,但明显低于生理盐水处理组的细菌生存数,差异有统计学意义(P＜0.05).在粪肠球菌感染根管6周的生物膜中,次氯酸钠液可以完全抑制细菌生长,茶多酚和MTAD作用后仍有活菌生长,但与对照组相比,细菌生存数均显示了8个log值的下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:52.5 g/L次氯酸钠液具有很强的抑制根管内粪肠球菌生物膜作用,而茶多酚和MTAD也具有一定的抑制粪肠球菌生物膜的能力.
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强酸性电解质水对粪肠球菌生物膜杀菌作用的体外研究
目的:观察强酸性电解质水对粪肠球菌生物膜的体外杀菌作用.方法:将体外培养24 h的粪肠球菌生物膜随机分为3组,分别用强酸性电解质水、20 mL/L氯已定以及去离子水处理,于处理后5、10、15 min3个时间点进行荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察各组生物膜中活菌、死菌的变化.结果:强酸性电解质水处理5 min时生物膜中便大部分为死菌,处理10、15 min后,几乎完全由死菌构成,各时间点的死菌比例均明显高于20mL/L氯已定组、空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:强酸性电解质水处理后能有效杀灭生物膜中绝大部分粪肠球菌,杀菌作用优于20 mL/L氯已定.
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变异链球菌荧光报告株与野生菌株生长能力及生物膜形成能力的比较
目的:评价变异链球菌荧光报告株(UA140-mrfp)与野生菌株(UA140)生长能力、生物膜形成能力的差异.方法:测定报告株与野生菌株生长曲线,生物膜形成量,扫描电镜观察不同时间段生物膜结构,利用SPSS 10.0统计软件进行重复测量设计方差分析.结果:报告株与野生菌株的生长曲线可明显看出3个阶段,均是在0～2 h为迟缓期,2～6 h为对数生长期,6 h以后为稳定期;同期各时间点报告株相比野生菌株A_(600)值略低,但无明显差别.组间比较发现两菌株生物膜形成量无统计学意义(P>0.05).不同时间段生物膜结构相近,高倍镜下细菌形态无改变.结论:报告株与野生菌株生长能力,生物膜形成能力相近,可用报告株代替野生菌株在激光共聚焦显微镜下研究变异链球菌的生物膜结构.
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原位菌斑生物膜的一种完整获得方法和结构研究
目的:通过对一种方法获得原位牙菌斑生物膜的结构分析,证明这种方法的可行性.方法:选择安装有局部可摘义齿的志愿者在基托表面粘贴塑料片的方法,在塑料片上可获得1、4.24 h牙菌斑生物膜,并用激光共聚焦扫描显微镜进行结构的观察和分析.结果:牙菌斑生物膜的细菌、基质清楚可见,1、4,24 h菌斑生物膜的平均厚度分别是(21.41±0.03)μm,(34.03±0.02)μm,(58.53±0.03)μm.结论:这种方法获取的菌斑生物膜结构完整、简便可行,是一种很好的获取原位牙菌斑生物膜的方法,可为进一步的实验提供平台.
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白色念珠菌生物膜形成的定量分析和形态学观察
目的:XTT法定量分析并在激光共聚焦显微镜和荧光显微镜下观察白色念珠菌生物膜的动态形成过程.方法:经过血清处理的灭菌玻片在六孔板中形成生物膜,经过荧光染色后在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下,动态观察生物膜的形成过程,并利用XTT减低法定量分析生物膜的形成过程. 结果:形态学和定量分析都表明,白色念珠菌可以在玻片上形成典型的、成熟的生物膜结构,形成过程经过了几个明显的阶段. 结论:白色念珠菌形成的生物膜具备典型的微生物生物膜结构.
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羟基磷灰石与生物膜合用于自体埋伏牙移植15例报告
目的:探讨羟基磷灰石人工骨与生物膜联合应用于自体牙移植术的效果.方法:先将供区牙齿移植于受区位置,在牙根周边骨缺损区植入适量羟基磷灰石(HA),然后采用医用生物膜行引导组织再生术(GTR),钢丝或夹板固定,术后定期复查.结果:本组共15例患者接受自体埋伏牙移植手术,并在手术中联合应用HA植骨与膜引导组织再生术.术后患牙牙周组织愈合好,1个月后X线片即可见植牙区新骨形成,3个月后牙周骨质明显再生,牙根未见吸收;随访3～8年,移植牙均不松动,牙冠色泽无异常,牙髓活力基本正常.结论:在自体牙移植术中植入HA及生物膜可引导成骨,加快新骨形成,有助于移植牙成活,提高牙移植术成功率.
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复合重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球的引导组织再生膜的制备
目的:设计制备包含活性生长因子的引导组织再生生物膜(以下称功能性复合膜).方法:利用天然材料右旋糖酐(dextran,dex)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dextran-glycidyl methacrylate,dex -GMA)作为重组人骨形态发生蛋白-2(recombined human bone morphogenetic protein-2,rhBMP2)新型缓释载体,采用乳化交联技术制备dex-GMA凝胶微球,考察其形态、溶胀系数、载药、释药及降解性能;以壳聚糖为材料,复合载rhBMP2的dex-GMA凝胶微球制备生物膜并对其进行生物学评价.结果:dex-GMA在一定条件下可以成球;该凝胶微球溶胀、载药和降解性能良好,体外释药可达20 d以上,利用简单的工艺就可以制备复合rhBMP2缓释载体的功能性复合膜,其理化性能与没有复合该缓释载体的生物膜没有变化.结论:利用生长因子缓释载体可以制备功能性复合膜,其生物学性能有待进一步研究.
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口腔生物膜体外模型的建立和应用评估
目的:通过建立体外生物膜模型,模拟口腔内生态环境以探索生物膜在龋病发生发展中的作用.方法:利用发酵罐与恒流培养室的组合构建简易的体外生物膜模型,通过恒流培养室内液体培养基连续的流动循环,模拟出口腔内液体持续冲刷的生态环境.在羟磷灰石片上定植4种口腔常驻菌,以形成实验性生物膜,并通过每12 h 定时给以蔗糖底物,模拟致龋环境,观察系统中实验菌CFU计数、pH动态变化等各项反应及不同环境下所形成生物膜的微结构变化.结果:本研究建立的系统能较好的控制各项实验参数,加入蔗糖底物后表现出明显的致龋反应.结论:本组建立的体外模型有着良好的可靠性与可重复性,可用于对口腔生物膜的各项体外研究.
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电解质水对粪肠球菌生物膜杀菌机制的初步探索
目的:研究强酸性电解质水(SAEW)和碱性电解质水(AEW)对粪肠球菌生物膜的作用.方法:体外培养粪肠球菌生物膜,分为SAEW处理组、AEW处理组及52.5 g/L次氯酸钠(NaClO)处理组,各组分别处理0、1、2、3、4、5、10、15、30、60 min后,采用菌落计数法测定各冲洗液对粪肠球菌生物膜的杀菌率;另取培养24 h的粪肠球菌生物膜,分别用SAEW、AEW、52.5 g/L NaClO、生理盐水处理1、5、10 min后,用扫描电镜观察粪肠球菌生物膜的形态变化.结果:SAEW和52.5 g/L NaClO对粪肠球菌各时间点的杀菌率显著高于AEW (P＜0.05),而SAEW和52.5 g/L NaClO的杀菌率无统计学差异(P＞0.05);扫描电镜观察结果显示,随着处理时间的延长,SAEW、AEW及52.5 g/L NaClO处理后粪肠球菌的形态变化类似,均表现为生物膜中粪肠球菌减少,细菌表面粗糙且菌体开始皱缩.结论:电解质水对粪肠球菌生物膜中的菌株具有杀灭作用,且其作用机制类似于NaClO.
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右旋氨基酸对粪肠球菌生物膜形成和离散的影响
目的:探讨不同右旋氨基酸(D-AA)及D-AA混合物对粪肠球菌生物膜形成和离散的影响.方法:首先将不同浓度的右旋色氨酸(D-Trp)、右旋蛋氨酸(D-Met)、右旋亮氨酸(D-Leu)、D-AA混合物-1(D-Trp、D-Met、D-Leu、D-酪氨酸)及不含药物的BHI液体培养基(阴性对照组)与粪肠球菌共同培养,并于培养24 h后采用结晶紫染色法检测各组的生物膜形成量.然后再建立24 h粪肠球菌生物膜模型,并按上述分组加入相应浓度的D-Trp、D-Met、D-Leu、D-AA混合物2及不含药物的BHI液体培养基;继续培养2 h后用结晶紫染色法检测各组对粪肠球菌生物膜的离散作用.结果:不同浓度D-AA与粪肠球菌共培养24 h后,除2.5 mmol/L的D-Leu组生物膜的总生物量与阴性对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,其余各实验组生物膜的总生物量均显著低于阴性对照组(P<0.05);不同种类D-AA处理粪肠球菌生物膜2 h后,单一种类D-AA组可显著降低生物膜的总生物量(P<0.05),D-AA混合物组生物膜总生物量与阴性对照组相比无统计学差异(P>0.05);不同种类D-AA影响生物膜形成及离散的适浓度各不相同.结论:适当浓度的D-Trp、D-Met、D-Leu及D-AA混合物均具有抑制粪肠球菌生物膜形成的作用,单独应用D-Trp、D-Met、D-Leu可促进24 h粪肠球菌生物膜的离散.
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五味子甲素对粪肠球菌毒力因子作用的初步研究
目的：研究五味子甲素对粪肠球菌生物膜的抑菌效果及其对某些毒力因子表达的影响。方法：体外建立粪肠球菌生物膜模型，分别与31．25、62．5、125、250、500μg／mL五味子甲素、仅含菌液不含药物的BHI培养基（阴性对照）、仅含BHI液体培养基的空白对照组共同培养12 h后，MTT法检测各组抑菌效果；根据抑菌效果选取适宜药物浓度（125、250、500μg／mL）与粪肠球菌共同培养24 h后，RT－PCR法检测各组粪肠球菌毒力因子srtC、esp、ebpR mRNA的表达水平。结果：五味子甲素对粪肠球菌生物膜的抑菌作用随药物浓度的增加而升高（P＜0．05），其中以500μg／mL组的抑菌效果好；125、250、500μg／mL的五味子甲素均能明显抑制srtC、esp、ebpR各毒力因子mRNA的表达，且其抑制程度均随着药物浓度的增加而增加（P＜0．05），当药物浓度为500μg／mL时，可完全抑制srtC、ebpR mRNA的表达。结论：一定浓度的五味子甲素不仅能抑制生物膜状态的粪肠球菌，同时还能抑制其毒力因子srtC、esp、ebpR的表达。
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黄芩苷对粪肠球菌毒力因子作用的体外研究
目的：研究黄芩苷对体外粪肠球菌生物膜的抑菌效果，并探讨黄芩苷对粪肠球菌毒力因子asal、EfaA、ebpA基因转录表达水平的影响。方法：6孔板建立粪肠球菌体外生物膜模型，利用激光共聚焦显微镜观察不同浓度黄芩苷作用24 h后的抑菌效果；然后再根据抑菌效果，选择适宜浓度（2、4、8 mg/mL）的黄芩苷分别与粪肠球菌共同培养12 h，并利用RT-PCR技术检测各组粪肠球菌毒力因子asal、EfaA、ebpA的表达水平。结果：激光共聚焦显微镜观察显示：黄芩苷对粪肠球菌生物膜的抑菌作用随药物浓度的增加而增加，8 mg/mL时，生物膜内的活菌比例下降明显；RT-PCR检测显示：与阴性对照组相比，2、4、8 mg/mL的黄芩苷均能明显抑制asal、EfaA、ebpA基因的表达（P＜0．05），其抑制作用随浓度增加而增加，各浓度组两两相比均有统计学差异（P＜0．05）。结论：黄芩苷对粪肠球菌生物膜及其毒力因子asal、EfaA、ebpA均有明显的抑制作用。
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游离氨基酸对变异链球菌生长及生物膜形成的影响
目的：观察D-和L-游离氨基酸对变异链球菌生长及生物膜形成的影响。方法：将浓度为40 mmol/L的D-或L-半胱氨酸、酪氨酸、缬氨酸等20种游离氨基酸分别与变异链球菌UA159共同培养，分别于培养4、8、12、24 h各时间点对细菌进行活菌计数，以时间杀死（Tme-kill）法观察其对变异链球菌生长的影响；用结晶紫（Crystal violet，CV）染色法观察40 mmol/L游离氨基酸对变异链球菌生物膜形成的影响。结果：不同的氨基酸处理24 h后，D-半胱氨酸、D-精氨酸、L-赖氨酸可明显降低变异链球菌生存率（P＜0．05）；D-和L-天冬氨酸、谷氨酸可抑制变异链球菌的生长（P＜0．05）；D-苯丙氨酸、L-组氨酸、L-半胱氨酸处理组变异链球菌生存率呈现先下降后上升的趋势；D-和L-丝氨酸、酪氨酸、L-缬氨酸可延缓变异链球菌进入对数生长期；D-和L-谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、D-精氨酸、D-色氨酸可明显抑制变异链球菌生物膜的形成（P＜0．05）。结论：部分游离氨基酸对变异链球菌生长及生物膜的形成具有一定的抑制作用。
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根尖生物膜细菌组成及干扰措施
根尖生物膜是难治性根尖周炎迁延不愈的重要原因,目前关于根尖生物膜的细菌种类及其去除方法的研究较多,但有关细菌种类的研究结果不尽相同;其去除方法仅限于根尖显微手术.本文就根尖生物膜的形成及其干扰措施的研究现状作一综述.
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牙科综合治疗台水路污染及其对策
牙科综合治疗台水路(dental unit waterline,DUWL)的主要功能是在治疗过程中为手机和三用枪等设备提供治疗用水,起冲洗和冷却作用.DUWL由狭窄、细长的管道组成,易被污染导致生物膜形成.定植于DUWL中的病原菌可随水流进入患者口腔,或通过由超声洁牙机、高速涡轮手机产生的气溶胶被患者或医务人员吸入呼吸道,从而增加牙科治疗感染的危险性.因此,DUWL污染被认为是导致牙科交叉感染的重要途径之一,并引起广泛关注.近年来,关于DUWL污染及对策已有大量研究,本文就其污染的影响因素、污染病原菌种类以及DUWL污染的对策作一综述.
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变形链球菌生物膜形成相关基因的研究进展
变形链球菌是公认的主要致龋菌,其重要的毒力因子之一就是在牙表面形成生物膜.生物膜的形成是变形链球菌在牙面聚集生存以及致龋所必需的结构.本文综述了变形链球菌当中与生物膜形成相关的基因,以期为防龋研究提供新的思路.
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生长因子复合生物膜引导牙周组织再生
随着引导组织再生术(guided tissue regeneration,GTR)研究的不断深入,传统的生物膜已经逐渐被复合生长因子的功能性生物膜所替代.功能性复合膜的研制、开发和应用,已成为GTR研究的热点,越来越多的研究表明生长因子缓释生物膜将是未来GTR研究的趋势.
