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益气化瘀清热方及其拆方对IgA肾病大鼠肾组织mTOR信号通路的影响
目的:探讨益气化瘀清热方及其拆方干预IgA肾病的作用机制及IgA肾病的发生发展机制.方法:将90只雄性Wistar大鼠随机分为6组,即空白组、模型组、益气组、化瘀组、清热组、复方组,采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法制备IgA肾病模型;运用免疫组化技术检测mTOR信号通路下游信号蛋白磷酸化核糖体蛋白S6(pS6)、磷酸化真核细胞启动因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)的表达部位,并对其进行半定量分析;运用Western blot检测各组大鼠肾皮质pS6、p-4EBP1的蛋白表达量.结果:pS6、p-4EBP1主要在IgA肾病模型大鼠肾组织中肾小球足细胞及壁层上皮细胞中表达,肾小管中散在表达.免疫组化结果显示,pS6表达量模型组高(P＜0.05),益气组次之(P＜0.05).各实验组p-4EBP1蛋白表达量模型组高(P＜0.05),复方组、空白组低(P＜0.05).Western blot结果同免疫组化结果一致.结论:益气化瘀清热方及其拆方可通过抑制mTOR下游信号蛋白pS6、p-4EBP1的表达发挥治疗作用.
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益气化瘀清热方及其拆方对体外培养大鼠肾小球系膜细胞产生Ⅲ型胶原蛋白的影响
目的:观察益气化瘀清热方及拆方的含药血清对脂多糖刺激的体外培养大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,MsC)产生Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)的影响.方法:采用ELISA法检测上清Col-Ⅲ的含量.结果:各类含药血清均能减少Col-Ⅲ的生成,化瘀组与清热组、复方组、雷公藤组作用强于益气组(P＜0.05),中药复方组作用强于雷公藤组(P＜0.05).结论:益气化瘀清热方及拆方后的各类中药均能降低Col-Ⅲ的生成.
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益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾系膜细胞IκB-α mRNA及蛋白信号通路的影响
目的:对益气化瘀清热方进行拆方,观察各类含药血清对脂多糖(LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)表达IκB-α mRNA及其蛋白的影响,探讨不同中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制.方法:采用RT-PCR法检测各组含药血清对MsC表达IκB-α mRNA的影响,Wersten blot法检测各组含药血清对大鼠MsC表达IκB-α蛋白的影响.结果:各组含药血清均能上调体外培养的MsC表达IκB-αmRNA及蛋白,清热组作用大于化瘀组、益气组,其中益气组作用弱,三者之间的差异均有统计学意义(P＜0.05);与雷公藤多苷组比较复方组作用较强(P＜0.05),清热组无显著性差异.结论:益气化瘀清热方及其拆方均能上调体外培养的大鼠MsC表达IκB-αmRNA及其蛋白,复方组作用明显优于其他组,清热组、雷公藤多苷组次之,益气组弱.
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益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-βRⅠmRNA及其蛋白的影响
目的:观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,MsC)表达转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor β,TGF-β-RⅠ) mRNA及其蛋白的影响.方法:采用RT-PCR法检测各组合药血清对MsC表达TGF-βRⅠ mRNA的影响;采用Wersten Blot法检测各组合药血清对大鼠MsC表达TGF-βRⅠ蛋白的影响.结果:①RT-PCR结果显示:各组合药血清均能抑制体外培养的MsC表达TGF-βRⅠ mRNA(P ＜0.01),复方组作用强,与其他含药血清组比较差异显著(P＜0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P＞0.05),但优于益气组(P＜0.01).②Wersten印迹结果显示:各组合药血清均能抑制体外培养的MsC表达TGF-βRⅠ蛋白,复方组作用强,与其他含药血清组比较差异显著(P＜0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P＞0.05),但优于益气组(P＜0.01).结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷的含药血清均能抑制体外培养的大鼠MsC表达TGF-βRⅠmRNA及其蛋白.复方组作用较强,清热组及化瘀组次之,益气组弱.
关键词： 肾小球系膜细胞 TGF-βRⅠmRNA 益气化瘀清热方 -
益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响
目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度.方法:应用PAN(50 μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响.结果:①RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P＜0.01)和益气组(P＜0.05),而3组之间无显著差异(P＞0.05),益气组与对照组也无显著差异(P＞0.05).含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P＜0.05),且4组之间无明显差别(P＞0.05).②Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P＞0.05),且4组间差异不明显(P＞0.05).各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P＞0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P＞0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P =0.008 ＜0.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P＞0.05).结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同.
关键词： 益气化瘀清热方 蛋白尿 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 -
益气化瘀清热方及其拆方影响体外培养大鼠MsC增殖、产生Col-Ⅰ的实验研究
目的 观察益气化瘀清热方及拆方的含药血清对脂多糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)增殖、生成Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的影响.方法 MTT法检测MsC增殖;ELISA法检测Col-Ⅰ的含量.结果 各类含药血清均能抑制MsC增殖、减少Col-Ⅰ的生成,化瘀组与清热组作用强于益气组,中药复方组作用强于雷公藤组.结论 益气化瘀清热方及拆方后的各类中药均能抑制MsC增殖、减少Col-Ⅰ的生成.
