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丹参脂溶性成分的HPLC指纹图谱及模式识别研究
目的:建立丹参脂溶性成分HPLC指纹图谱,为丹参质量控制提供依据.方法:采用HPLC法,建立丹参脂溶性成分HPLC指纹图谱,并对其进行相似度分析、聚类分析和主成分分析.结果:建立了丹参脂溶性成分HPLC对照指纹图谱,色谱图展现的各峰分离度较好,特征明显,各样品图谱与对照图谱的相似度均＞0.95,聚类分析在距离标尺为3时将样品分为3类,与主成分分析结果一致.结论:HPLC法建立丹参脂溶性成分指纹图谱,方法稳定、可靠、简便,选用的分析方法能准确对丹参脂溶性样品作出分析,可为丹参的质量评价提供参考.
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丹参脂溶性成分抑制体外血管新生及机制研究
该研究利用人脐静脉内皮细胞模型研究丹参脂溶性成分对血管新生的调节作用,并探讨其可能的作用机制.通过建立的细胞模型,确定丹参脂溶性成分对内皮细胞增殖活性和迁移能力的影响;随后利用实时荧光定量PCR技术检测药物作用后血管新生相关细胞因子VEGF-A,VEGF-C和MMP-9的基因表达变化.结果表明,5 mg· L-1的丹参脂溶性成分抑制内皮细胞的增殖和迁移,同时VEGF-A,VEGF-C和MMP-9基因的表达被抑制.表明丹参脂溶性成分可能通过抑制VEGF-A和MMP-9基因的表达来抑制内皮细胞的增殖和迁移,从而达到抑制血管新生的作用.
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正交设计法优选丹参脂溶性成分的纤维素酶酶解工艺
中药的化学成分存在于植物细胞中,而植物的细胞壁主要由纤维素(β-D-葡萄糖以1,4-β-葡萄糖苷键连接)组成,β-纤维素酶在适当的条件下,通过破坏细胞壁上纤维素的β-葡萄糖甙键,增加有效成分的溶出率,进而提高提取率.纤维素酶在国外已广泛用于食品、化工等领域,而在中药中的应用尚不多见.鉴于此,作者选用丹参药材,以脂溶性有效成分丹参酮ⅡA为指标考察其酶解的佳工艺,从而为纤维素酶在中药提取中的应用提供实验依据.
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精制冠心片中丹参脂溶性成分的HPLC含量测定
目的 建立精制冠心片中丹参脂溶性多种丹参酮成分的高效液相测定方法.方法 采用HP Hypersil ODS柱(250×4.0 nm,5 μm),丹参酮ⅡA洗脱流动相为甲醇-水(75:25),二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I为乙腈-水(50:50),流速0.8 ml/min,柱温控制37°C,丹参酮IIA检测波长为280 nm,二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I为254 nm.结果 四种丹参酮在各自浓度范围内线性关系良好(r>0.999);方法精密度、重复性良好;平均加样回收率大于98%,RSD小于3.02%.该方法下,样品在4 h内稳定.三批精制冠心片的测定结果显示四种丹参酮成分的含量相对稳定.结论 方法具有灵敏度高、可靠、准确和简便的特点,可用于精制冠心片中丹参脂溶性成分的测定.
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丹参提取物中脂溶性成分检测及体外溶出行为考察
目的 建立丹参脂溶性成分丹参酮Ⅰ、丹参酮 ⅡA及隐丹参酮高效液相色谱(HPLC)同步测定方法,并考察其体外溶出行为.方法 选用Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相梯度洗脱,同时测定丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA及隐丹参酮含量,考察十二烷基硫酸钠(SDS)浓度、溶出液pH值和溶出仪转速对3种成分溶出行为的影响.结果 丹参酮Ⅰ回归方程为Y=0.2023X+0.2967(R2=0.9992),线性范围为1.45～93.00μg?mL-1;丹参酮ⅡA回归方程为Y=0.4456X+0.5272(R2=0.9994),线性范围1.29～82.50μg?mL-1;隐丹参酮回归方程为Y=0.1318X+0.0002(R2=1.000),线性范围0.90～57.50μg?mL-1,方法精密度和回收率均良好,随着溶出液中SDS浓度的增加,3种脂溶性成分溶出度逐渐增加,溶出液pH值及溶出仪转速对3种成分的体外溶出均无显著影响.结论 所建立的HPLC方法能准确、灵敏地同时检测丹参3种脂溶性成分,SDS的加入能促进丹参3种脂溶性成分的溶出,溶出液的pH值和溶出仪转速对3种成分的体外溶出无影响.
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丹参脂溶性成分对AGEs条件下视网膜Müller细胞HIF-1及谷氨酰胺合成酶表达的影响
目的:研究丹参脂溶性成分对体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞在糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)及谷氨酰胺合成酶表达的影响.方法:以5μg/rnl的丹参脂溶性成分及5 μg/ml丹参酮ⅡA分别干预视网膜Müller细胞,以ELISA法分别测定在正常及高、低浓度AGEs(150 μg/ml、75 μg/ml)条件下LDH漏出量以及HIF-1、谷氨酰胺合成酶的表达情况.结果:在正常及AGEs条件下,各组Müller细胞LDH的漏出量48 h较24 h明显减少,72 h较48 h明显增多,丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA组LDH漏出量较空白对照组小;在AGEs条件下,空白对照组HIF-1表达量较正常条件下显著增高;谷氨酰胺合成酶的表达量显著低于正常条件.丹参酮ⅡA、丹参脂溶性成分组与空白对照组相比,均能显著抑制HIF-1表达,增加谷氨酰胺合成酶的表达.结论:各实验组Müller细胞活力均呈现先升高、后降低,在48 h时Müller细胞膜活力高.因此选择48 h作为佳干预时间.AGEs能明显提高大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,抑制谷氨酰胺合成酶的表达.丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA均能抑制AGEs条件下大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,增强谷氨酰胺合成酶的表达,从而降低血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的生成量以及谷氨酸(Glutamate,Glu)的浓度,研究结果为进一步探讨丹参脂溶性成分治疗糖尿病性视网膜病变作用机制提供了一定的实验依据.
