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银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关c-jun氨基末端激酶通路的影响
目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激相关c-jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制.方法:采用40％的CCl4皮下注射(3mL·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以低、中、高剂量(50、100、200mL·kg-1·d-1)GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR法检测JNK mRNA表达,Western blot技术检测大鼠肝组织中JNK通路关键分子凋亡信号调节激酶(ASK)及JNK的总蛋白及其磷酸化表达.结果:肝组织JNK mRNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较正常组明显增强(P＜0.05,P＜0.01);GbE低、中、高剂量组大鼠肝组织JNK mRNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较模型组不同程度下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关的JNK通路被激活,GbE可通过调节肝纤维化大鼠JNK通路防止肝纤维化的进展.
关键词： 肝纤维化 内质网 c-jun氨基末端激酶通路 银杏叶提取物 内质网应激 -
c-Jun氨基末端激酶通路参与雌激素对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察雌激素对皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用,初步研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路与雌激素保护作用的相关性.方法 取40只Wistar大鼠建立大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤模型,随机分为健康对照组(A组)、缺血再灌注损伤组(B组)、雌激素组(C组)、JNK抑制剂组(D组).术后第七天观察各组皮瓣大体情况,测量皮瓣成活面积并计算成活率,HE染色观察各组皮瓣组织学改变,测定皮瓣组织中JNK、p-JNK、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-5(MKP-5)的表达.分析皮瓣成活率与JNK表达量的相关性.结果 C组和D组皮瓣生长良好,皮瓣成活率较B组明显提高,皮瓣组织学改变较B组轻.C组、D组皮瓣JNK、p-JNK表达量较B组明显降低,C组、D组JNK负性调控因子MKP-5表达明显较B组增高.结论 雌激素能明显改善皮瓣缺血再灌注损伤,提高皮瓣成活率,其机制可能是雌激素通过调控JNK通路发挥了对皮瓣的缺血再灌注损伤保护作用.
关键词： 雌激素 外科皮瓣 缺血再灌注损伤 c-jun氨基末端激酶通路 -
Delta-catenin蛋白通过抑制JNK通路活性而减少肺癌细胞的凋亡
背景与目的：作为黏附蛋白catenin家族中的一员，Delta-catenin蛋白可以促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，然而其提高肿瘤细胞增殖能力的机制并不清楚。本研究检测了Delta-catenin对肺癌细胞凋亡的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein hinase，MAPK)信号通路蛋白的关系，并初步探索了Delta-catenin促进肿瘤细胞侵袭增殖的可能机制。方法：采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测肺癌细胞过表达Delta-catenin前后p38、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase，JNK)蛋白活性的变化，同时利用流式细胞术检测了肿瘤细胞凋亡数量的改变，还通过Matrigel基质胶侵袭实验检测了肿瘤细胞侵袭数量的变化。结果：与未处理组和空载体对照组相比，过表达Delta-catenin后肺癌细胞的p38蛋白活性没有变化(P＞0.05)，但JNK的蛋白活性却显著减少(P＜0.05)，与此同时，肿瘤细胞的凋亡比例显著下降(P＜0.05)，而肿瘤细胞的侵袭能力却明显增强(P＜0.05)。结论：Delta-catenin可能通过抑制肺癌细胞JNK通路的活性而减少肿瘤细胞的凋亡，进而促进肿瘤细胞的侵袭。
关键词： Delta-catenin 肺癌 细胞凋亡 c-jun氨基末端激酶通路 -
热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C/EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响
目的 观察热休克蛋白70 (HSP70)表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、C/EBP同源蛋白(CHOP)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响.方法 应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70(HSP70)基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达,建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型,测定细胞凋亡,提取内质网测定,采用免疫组织化学和Western blot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变.结果 对照组细胞凋亡率(9.28±0.83)％、晚期(28.60±1.83)％,HSP70基因转染组早期细胞凋亡率(4.30±0.72)％、晚期(11.6±1.66)％,HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率(29.3±2.54)％、晚期(34.4±2.43)％,免疫组织化学和Westem blot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达;HSP70表达抑制细胞凋亡,但HSP70反义寡核苷酸则促进;HSP70显著抑制Caspase-12和CHOP的表达,HSP70增加JNK的表达;HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达.结论 转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡.
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SP600125抑制UVA激活皮肤成纤维细胞JNK通路的佳浓度
[目的]研究抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞JNK通路的佳SP600125浓度,为研究JNK信号通路在光老化中的作用机制奠定基础.[方法]原代培养取自儿童包皮的皮肤成纤维细胞.用CCK-8法结合荧光倒置显微镜研究不同剂量UVA和不同浓度SP600125及两者联合对皮肤成纤维细胞活性和形态的影响,以选择非细胞毒性的UVA剂量和SP600125浓度.再用Western-blot检测UVA辐照后不同时间点皮肤成纤维细胞中磷酸化c-Jun(P-c-Jun)表达以确定其被诱导表达的时间点.后用Western-blot检测不同浓度SP600125对UVA上调的P-c-Jun表达的抑制.[结果]UVA和SP600125分别辐照细胞和孵育细胞时,UVA≤10 J/cm2和SP600125≤2μmol/L均能保持细胞活性在90％以上.10 J/cm2的UVA辐照不同浓度SP600125孵育的细胞时,≤800 nmol/L的SP600125孵育的细胞活性在90％以上;1μmol/L的SP600125使细胞活性明显下降至67.1％,镜下见部分细胞皱缩、碎裂、死亡;2μmol/L的SP600125使细胞活性进一步下降至7.6％,镜下见绝大部分细胞变形、碎裂、死亡.Western-blot结果显示P-c-Jun在UVA辐照后0.75 h、1.5 h均较0h升高,3h后恢复至0h水平.200 ～ 800 nmol/L SP600125呈剂量依赖性地抑制UVA上调的P-c-Jun表达,差异有统计学意义.[结论]低于常用浓度的200～ 800 nmol/L SP600125即可抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞的JNK通路.JNK通路可能在UVA辐照的皮肤成纤维细胞中起抗凋亡作用.
关键词： SP600125 c-jun氨基末端激酶通路 UVA 皮肤成纤维细胞 光老化 -
凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤
目的 研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制.方法 建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型.转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性.结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P＜0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P＜0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P＜0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P＜0.05)和增殖能力(P＜0.05)明显上升,RGC的凋亡(P＜O.01)和Caspase-3的活力(P＜0.01)明显降低.沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平.结论 抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关.
