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镰形棘豆对SMMC-7721肝癌细胞增殖及MMP-2表达的影响
目的:观察镰形棘豆对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌量的影响.方法:以不同质量浓度(25,50,100,250,500 mg·L-1)的镰形棘豆挥发油、总多糖、总黄酮、总生物碱和总皂苷部位处理SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测各部位对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;采用ELISA法测定挥发油部位和总黄酮部位处理SMMC-7721肝癌细胞24 h后细胞上清中MMP-2的分泌量;Real-time PCR法检测处理24 h后MMP-2 mRNA的转录情况.结果:MTT实验结果表明,挥发油和总黄酮部位抑制SMMC-7721细胞的增殖,并表现出一定的浓度依赖性.ELISA实验表明挥发油部位显著性地抑制MMP-2分泌量;Real-time PCR实验表明挥发油和总黄酮均显著抑制MMP-2 mRNA的表达.结论:镰形棘豆挥发油和总黄酮部位抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖活性,可能与其下调MMP-2的分泌量和转录水平有关.
关键词： 镰形棘豆 SMMC-7721肝癌细胞 基质金属蛋白酶-2 -
镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究
目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.
关键词： 镰形棘豆 总黄酮 SMMC-7721肝癌细胞 细胞凋亡 -
芜菁汁对正常肝细胞及肝癌细胞株的影响
许多研究表明,某些蔬菜特别是十字花科蔬菜对致突变的活性有抑制作用[1,2].流行病学和动物资料表明,花椰菜、甘蓝、花菜等十字花科蔬菜具有肿瘤化学预防作用[3].芜菁(Brassica rapa Linn)属十字花科芸苔属蔬菜,其块根肥大、扁圆如盘,俗称盘菜.盘菜为温州特产,其块根肉质,洁白,脆嫩,营养丰富,颇受消费者喜爱.研究表明,温州产芜菁块根汁及叶汁对60Co-γ引起的辐射损伤均具有明显的防护和修复效应[4, 5];对环磷酰胺引起的突变有明显的抑制作用[6].本研究观察芜菁块根汁对L-02细胞与SMMC-7721细胞生长的影响,以探讨芜菁块根汁对肝癌细胞的作用.
关键词： 芜菁汁 L-02正常肝细胞 SMMC-7721肝癌细胞 细胞凋亡 -
多西他赛对人肝癌放疗增敏及其作用机制探讨
目的观察不同浓度多西他赛(Docetaxel)在体外对人肝癌细胞的放射增敏作用及其机制.方法用0.125、0.25、0.5 nmol/L多西他赛作用人SMMC-7721肝癌细胞株24 h和0.125、0.25 nmol/L多西他赛作用48h后分别给予0、2、4、6、8、10 Gy剂量照射,单纯照射组未给予多西他赛处理而接受同等剂量照射,用集落形成实验分析放射增敏效应.另外用流式细胞术检测上述不同浓度多西他赛分别作用不同时间SMMC-7721细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和用比色法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量的变化.结果用0.125、0.25、0.5 nmol/L多西他赛作用24h和0.125、0.25 nmol/L多西他赛作用48 h均能观察到各自的放射增敏作用,其放射增敏比(SERDq)分别为1.12、1.19、1.43和1.37、1.48.同时观察到上述剂量多西他赛作用不同时间导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低.结论上述剂量多西他赛在体外对SMMC-7721肝癌细胞具有放射增敏作用,其增敏机制与用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低有关.
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人端粒酶逆转录酶启动子介导的E1A和IL-24表达及其对肝癌细胞生长的抑制作用
目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子介导的E1A和IL-24双基因靶向腺病毒载体,获得Ad-h-E1A-IL-24靶向重组病毒子,并探索其体外抑瘤作用.方法 运用 PCR扩增MCF-7乳腺癌细胞的DNA,Xba Ⅰ和HindⅢ酶切获得280 hp hTERT启动子,插入空载体构建成pTrack-hTERT;运用PCR及HindⅢ和XhoⅠ酶切获得E1A,与pTrack-hTERT构成pAdTrack-hTERT-E1A；运用PCR及Not Ⅰ和SalⅠ酶切获得IL-24,插入pTrack-PP-1RES；XbaⅠ和XhoⅠ酶切获得hTERT-E1A,与pTrack-PP-IL-24-IRES形成pTrack-hTERT-E1 A-PP-IL-24-IRES,同源重组、包装和扩增获得Ad-h-E1 A-IL-24重组靶向病毒子.用25 MOI重组靶向腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-h-E1 A-IL-24的细胞生长抑制作用.结果 成功构建pTrack-hTERT-E1 A-PP-IL-24-IRES,并获得Ad-h-E1A-IL-24重组病毒于.与非靶向双基因比较,Ad-h-E1A-IL-24组可明显抑制肿瘤细胞生长(P ＜0.05或0.01).结论 Ad-h-E1 A-IL-24靶向腺病毒载体的体外抑瘤作用优于非靶向双基因载体.
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RMP基因在体内对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制作用
目的 探讨RMP基因在体内抑制肿瘤细胞生长的作用及其机制.方法 通过体外构建真核表达载体pGPU6一Neo-RMP-484、pFLAG-CMV-4-RMP以及稳定表达细胞株shRNA-SMMC-7721、RMP-SMMC-7721,并测定RMPmRNA表达的变化,荷瘤裸鼠皮下注射各组肝癌细胞,观察移植瘤的大小及病理变化.结果 成功构建了真核表达载体及稳定表达细胞系.实验组移植瘤体积、质量、病理及肿瘤相关蛋白的表达量均有明显变化.结论 RMP基因在体内能有效地抑制肝癌细胞的生长,为RMP对肝癌的基因治疗/基因干预提供了有价值的靶点及体内分子机制的实验依据,为深入研究奠定了基础.
关键词： RMP基因 SMMC-7721肝癌细胞 移植瘤 裸鼠 生长抑制 -
3-溴丙酮酸对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用
目的 观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用.方法 对经0.25mmol/L～8.00mmol/L 3-BrPA溶液处理的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,并在荧光显微镜和电镜下观察细胞内部结构的变化.结果 3-BrPA对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,其中在0.75mmol/L浓度下的抑制作用强;经处理后的细胞,在荧光染色下显示坏死细胞增多,在电镜下显示细胞染色质分散,少量核染色质凝聚.结论 3-BrPA对SMMC-7721肝癌细胞有抑制作用.
关键词： SMMC-7721肝癌细胞 3-溴丙酮酸 增生 -
丹红注射液对SMMC-7721肝癌细胞的促凋亡作用
目的：研究丹红注射液对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的作用。方法将0,2,4,8μL·mL-1丹红注射液分别作用人肝癌细胞系SMMC-7721,在显微镜下观察不同浓度丹红注射液对细胞形态的影响,选择2μL·mL-1作用后,0,6,12,24 h流式细胞仪检测细胞凋亡指数变化；以噻唑蓝( MTT)法检测不同浓度丹红注射液对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响；逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测p53、Bax、Bcl-2在含不同浓度药物的SMMC-7721细胞中表达。结果随着药物浓度增大,SMMC-7721的凋亡形态越明显,并且随作用时间的延长,细胞凋亡指数也增加；不同浓度丹红注射液对SMMC-7721细胞均有明显的剂量和时间依赖性；不同浓度药物可诱导SMMC-7721肝癌细胞细胞凋亡；随着丹红注射液浓度增加,Bcl-2在SMMC-7721细胞中的表达降低,p53和Bax的表达增高。结论丹红注射液能促进SMMC-7721细胞的凋亡,且具有一定的剂量和时间依赖性。
关键词： 丹红注射液 SMMC-7721肝癌细胞 凋亡 -
多西他赛体外抗肝癌作用及对细胞内氧化还原状态的影响
目的:研究多西他赛(docetaxel)体外抗肝癌作用及其与氧化还原状态的关系.方法:用不同浓度的多西他赛处理肝癌细胞株(SMMC-7721细胞),用集落形成试验检测多西他赛对SMMC-7721细胞生长抑制作用,通过流式细胞术测定多西他赛对SMMC-7721细胞株细胞周期及凋亡的影响.用DCF/DA作为活性氧(reactive oxygen species,ROS)捕获剂检测用药后细胞内ROS产生.用试剂盒测定细胞谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平.结果:多西他赛能抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈浓度依赖性;诱导SMMC-7721细胞凋亡和G2/M期阻滞;导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低.结论:多西他赛能通过诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞而抑制SMMC-7721细胞增殖,用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低可能在多西他赛体外抑制SMMC-7721细胞增殖和促进细胞凋亡中起重要作用.
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热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响
目的 探讨热疗对SMMC-7721肝癌细胞的影响.方法 将SMMC-7721肝癌细胞置恒温循环水浴锅中(42.5±0.5)℃孵育1h,然后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养,分别于热处理后0、6、12、24h采用倒置显微镜(LM ×400)观察细胞形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,予Annexin V/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡,予366EC和FITC-羊抗鼠IgG处理细胞后用流式细胞仪检测细胞DR5表达,用Fluo-3/AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度的变化.结果 热疗可导致肿瘤细胞形态改变,表现为细胞变小,变圆,脱落,出现空泡;热疗可抑制细胞增殖,细胞热疗后0、6、12、24h细胞抑制率分别为22.18%、26.76%、31.30%、36.62%.热疗后0h细胞凋亡率为15.00%,其中早期凋亡率为2.00%,晚期凋亡率为13.00%;热疗后6h细胞凋亡率为65.45%,其中早期凋亡率为43.23%,晚期凋亡率为22.22%;热疗后12h细胞凋亡率为12.32%,其中早期凋亡率为4.60%,晚期凋亡率为7.72%;热疗后24h细胞凋亡率为22.58%,其中早期凋亡率为7.15%,晚期凋亡率为15.43%.热疗后0、4、8、12、24h细胞内钙离子浓度分别为18.13、7.87、13.01、37.23μmol/L,对照组为14.28μmol/L.热疗后0、6、12、24h细胞膜DR5表达率分别为79.74%、83.22%、91.28%、92.52%,对照组为83.02%. 结论热疗导致肿瘤细胞凋亡的因素是复杂的,DR5表达增加和细胞内Ca2+增加是原因之一;热疗可增加肿瘤细胞DR5的表达,提示热疗加化疗或其他治疗可能会增加疗效.
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斑蝥素酸镁阻断MAPK信号通路抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖
目的 观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制.方法 使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响.实时定量PCR检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721人肝癌细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38MAPK、c-Jun N末端激酶1/2(JNK1/2) mRNA表达水平的影响;Western blot法检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721细胞ERK1/2、p38MAPK、JNK蛋白表达以及蛋白磷酸化水平的影响.结果 0.283 μmol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用,0.567μmol/L斑蝥素酸镁能显著抑制PP2A活性,且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用.与空白对照组比较,0.283 μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2mRNA表达量无明显变化,当浓度为0.567 μmol/L时,ERK1、ERK2mRNA表达量显著下降,且随着药物浓度的增加下降更明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2mRNA表达量却显著升高.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK1、JNK2 mRNA表达量均显著升高.与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化,高于0.567 μmol/L斑蝥素酸镁处理显著下调ERK1/2磷酸化水平,其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调.结论 斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路来实现对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用.
