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银杏叶提取物对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖及Survivin,TIP30基因表达的影响
探讨银杏叶提取物(EGB)对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖、凋亡的影响,并从基因和蛋白水平上分析EGB对Survivin和TIP30基因表达的影响.不同浓度EGB处理体外培养的人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞,应用MTT法检测细胞增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin,TIP30基因和蛋白的表达.结果发现EGB对ACC-2细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为88 mg·L-1.经流式细胞仪检测表明,EGB能使ACC-2细胞Go/G1期逐渐增加,G2/M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,ACC-2细胞凋亡率明显增加(P＜0.05或P＜0.01).RT-PCR与Western杂交结果一致表明随着EGB浓度的升高,Survivin基因表达明显减少(P＜0.01),而TIP30基因表达则显著提高(P＜0.01).因此,EGB能有效抑制人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞Survivin基因表达,并促进TIP30的表达,诱导ACC-2细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.该研究为中药成分在肿瘤治疗中的应用提供了一定的理论和实验依据.
关键词： 银杏叶提取物 ACC-2细胞 Survivin基因 TIP30基因 -
TIP30基因腺病毒载体的构建及体内外抑癌作用
目的利用缺陷型腺病毒载体表达TIP30基因,观察其体内外抑瘤作用.方法用AdEasyTM系统,在大肠杆菌同源重组,构建Ad-TIP30腺病毒载体,经在293细胞内成功包装并鉴定后,感染p53基因型不同的肝癌细胞株HepG2(p53-wt)、PLC/PRL/5(p53-mut)和骨肉瘤细胞株Saos-2(P53-null).用台盼蓝拒染法检测存活细胞,观察TIP30的体外抑瘤作用;用RT-PCR方法检测HepG2细胞p53基因的表达水平;通过裸鼠皮下肝癌移植瘤模型观察Ad-TIP30的体内抑瘤效果.结果Ad-TIP30对3种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用,但对p53基因野生型的肝癌细胞株HepG2抑制作用明显.经Ad-TIP30感染后,HepG2细胞p53基因表达水平显著升高.Ad-TIP30可显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,其抑瘤率达62.8%.结论腺病毒载体表达TIP30基因可通过p53基因依赖性或非依赖性途径抑制肿瘤细胞的增殖,是一种潜在的肿瘤生物治疗手段.
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TIP30蛋白在食管鳞癌中的表达
目的 探讨TIP30蛋白在食管鳞癌中的表达.方法 用免疫组化S-P法检测64例食管鳞癌组织中TIP30蛋白的表达.结果 72例正常食管组织中,有63例(87.5%)TIP30蛋白表达.64例食管鳞癌中有38例(59.38%)TIP30蛋白表达,差异具有显著性意义(P<0.05);TIP30蛋白在高分化、中分化、低分化食管鳞癌中的表达率分别为78.13%(25/32),42.11%(8/19),38.46%(5/13),比较差异有统计学意义(P<0.05):TIP30的表达在淋巴结转移组中为39.13%(9/23)明显低于未发生淋巴结转移组70.73%(29/41)(P<0.05).差异有统计学意义.结论 食管鳞癌TIF30蛋白的表达与肿瘤的侵袭性有关,可作为预后不良的指标.
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抑癌基因TIP30表达对大肠癌发生、发展的影响
目的 研究TIP30在大肠癌与配对正常大肠黏膜中的表达差异,分析TIP30蛋白表达与患者临床病理特征间的关系.方法 对我院2009~2010年收治的50例大肠癌患者手术切除标本和配对正常大肠黏膜组织采用免疫组化法进行TIP30蛋白表达检测.结果 50例大肠癌标本中有20例(40%)TIP30蛋白表达缺失,而50例配对正常大肠组织中仅有5例(10%)TIP30蛋白表达缺失,两者相比差异有统计学意义(P ＜ 0.05).分析TIP30表达缺失与患者临床病理特征的关系发现,TIP30表达缺失与患者不良预后因素间存在明显相关性,这些因素包括临床分期、血清CEA水平及有无淋巴结转移等.结论 TIP30是大肠癌中的一个重要肿瘤抑制基因,TIP30表达可抑制大肠癌的发生发展,TIP30表达缺失促进大肠癌的发生发展.
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抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用
目的:筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点.方法:采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳胞比例显著增加,S和G2-M期细胞比例降低(P＜0.01).结论:786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点.
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Tip30基因修饰的ACC-M细胞裸鼠体内致瘤性观察
目的:观察肿瘤抑制基因Tip30修饰后的人涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC-M)所致裸鼠移植瘤体内生长的变化.方法:BALB/C nu/nu鼠30只(4周龄,体重18～20g),随机分3组,各10只;Tip30基因修饰的ACC-M细胞(AdTIP30/ACC-M)、野生型ACC-M细胞(wt/ACC-M)及对照基因LacZ修饰的ACC-M细胞(AdLacZ/ACC-M)分别注射小鼠颌下区皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间.结果:(1)经TIP30基因修饰组肿瘤出现的时间比野生型对照组及基因对照组晚3 d,且肿瘤生长缓慢(P＜0.01);(2)存活时间显示,基因修饰组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;野生型对照组(26±2.2)d;对照基因组(29±2.4)d.结论:抑癌基因Tip30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内的生长,延长荷瘤小鼠存活期.
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Tip30调节EGFR核内化及其与核内EGFR靶分子或基因的关联性研究
目的 探讨肿瘤转移抑制基因(Tip30)调节表皮生长因子受体(EGFR)核内化及与核内化EGFR靶分子或基因的关联性,为针对EGFR分子靶向治疗提供依据.方法 采用野生型Balb/c小鼠(Tip30+/+小鼠,对照组)和Tip30基因敲除、Balb/c纯背景的小鼠(Tip30-/-小鼠)作为动物模型(每组6只),饲养18个月后处死,取肺组织,福尔马林固定,酒精脱水,石蜡包埋,组织切片后,进行组织学检查、免疫组化检测、组织免疫荧光检测、体外培养细胞免疫荧光/激光共聚焦检测、免疫印迹检测、细胞计数试剂盒-8方法体外细胞抑制实验、荧光定量PCR检测和基因芯片数据库分析.结果 Tip30基因敲除促进肺上皮细胞增殖、上调细胞周期蛋白cyclin DI表达;基因转染后Tip30-SH1、Tip30-SH2细胞抑制Tip30表达;Tip基因抑制致EGFR在早期内涵体滞留;表皮生长因子(EGF)处理可诱导Tip30细胞核内化;Tip30基因抑制可促进EGF诱导EGFR细胞核内化,Tip30蛋白可在早期内涵体内聚集.结论 Tip30基因抑制干扰EGFR分选,抑制EGF诱导EGFR降解,延迟EGFR下游信号分子激活时间,同时促进EGF诱导的EGFR细胞核内化,促进肺癌细胞生长,而与细胞膜或细胞浆内EGFR信号通路激活的关联性较小.
关键词： 肺癌 TIP30基因 表皮生长因子受体 表皮生长因子受体核内化 核内化 -
TIP30/CC3基因与肿瘤转移的研究进展
肿瘤转移是恶性细胞与宿主防御系统间相互作用的终结果,也是导致恶性肿瘤患者死亡的一个重要因素.TIP30基因是美国学者Shtivelman等[1]利用RNA差异显示技术首先发现的一种与小细胞肺癌转移抑制相关的基因,初命名为CC3.它能显著抑制变异性高转移小细胞肺癌(v-SCLC)细胞在人胚肺-联合免疫缺陷鼠移植物动物模型中的转移力,是一种潜在的转移抑制基因.本文对TIP30/CC3基因及其编码产物的结构、功能、抑制肿瘤转移的可能机制及其与各种肿瘤的关系作一综述.
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DAC及TSA对结肠癌细胞系中TIP30基因表达的影响及伊立替康敏感性探讨
目的 探讨DAC及TSA对结肠癌细胞系中抑癌基因TIP30表达的影响,以及与伊立替康敏感性的关系.方法 DAC及TSA处理体外培养的结肠癌细胞系HCT116及HT29,RT-PCR法检测结肠癌细胞系HCT116及HT29药物干预前后抑癌基因TIP30表达情况的变化.MTT法检测结肠癌细胞株HCT116和HT29在不同浓度CPT-11下的凋亡情况,绘制生长抑制曲线并计算半数抑制浓度.结果 HCT116及HT29细胞系经DAC及DAC和TSA联合作用后使原来不表达或低表达的抑癌基因TIP30重新表达或表达增强；结肠癌细胞系HT29与HCT116相比伊立替康敏感性较强,DAC处理后2个细胞系伊立替康敏感性均增强.结论 TIP30基因的异常甲基化是结肠癌发生发展中的常见现象,结肠癌细胞系中TIP30启动子甲基化可能是基因失活的主要调控机制,DAC单独干预和DAC及TSA联合干预效果相似,均能显著增加高甲基化抑癌基因的重新表达.基因甲基化水平可能与化疗敏感性相关.
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TIP30基因对大肠癌细胞HCT116生物学特性的影响
目的 通过构建基因真核表达载体分析TIP30对大肠癌细胞HCT116生物学特性的影响,为TIP30在大肠癌基因治疗中的应用提供依据.方法 构建pCMV4-flag-TIP30真核表达载体并转染HCT116细胞,RT-PCR和Western blot检测TIP30基因表达,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,软琼脂实验检测细胞成瘤性.结果 成功构建稳定表达TIP30的HCT116细胞模型,转染TIP30的HCT116细胞增殖受抑,侵袭能力及克隆形成能力均减弱.结论 大肠癌HCT116细胞TIP30过表达不仅能抑制其生长、诱导其凋亡,并能降低其侵袭、迁移能力,为TIP30基因治疗提供依据.
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抑癌基因TIP30启动子甲基化对大肠癌诊断及预后的影响
目的 研究TIP30启动子甲基化在大肠癌与配对正常大肠黏膜中的表达差异,分析TIP30启动子甲基化状态与患者临床病理特征间的关系.方法 对我院2009-2010年收治的50例大肠癌患者的手术切除标本和配对正常大肠黏膜组织,采用甲基化特异性PCR方法检测TIP30基因启动子甲基化状态.结果 大肠癌TIP30启动子高甲基化与患者淋巴结转移情况(P=0.003)、CEA水平(P=0.005)及临床分期(P=0.048)之间存在显著相关性,与病变部位(结肠与直肠)之间未见显著相关性(P=0.309).此外,TIP30启动子高甲基化在血清CEA水平较高(＞15 ng/ml)的患者中比血清CEA水平较低(＜15 ng/ml)的患者中更常见(P=0.005).结论 TIP30启动子高甲基化与大肠癌淋巴结转移、CEA水平及临床分期呈正相关,与病变部位无明显相关性.TIP30启动子甲基化有望成为一种新的大肠癌分子诊断肿瘤标志物,用于大肠癌患者的早期诊断与预后判断.
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TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤细胞生物学功能的影响
目的 研究TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡等生物学功能的影响,以期为多发性骨髓瘤临床防治及药物研制提供新的靶点.方法 人多发性骨髓瘤U266细胞中TIP30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证TIP30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 TIP30过表达腺病毒转染后,过表达组中U266细胞TIP30基因mRNA和蛋白表达水平均显著上升.与对照组比较,TIP30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);TIP30过表达后U266细胞凋亡率较对照组显著增大,TIP30过表达促进U266细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关.结论 TIP30基因过表达可抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖活性与体外迁移能力,并促进多发性骨髓瘤细胞凋亡.
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Tip30基因过表达对人胃癌细胞生长的影响及分子机制
目的 探讨Tip30基因过表达对人胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及相关分子机制.方法 人胃癌AGS细胞中Tip30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证Tip30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达. 结果 过表达组AGS细胞Tip30基因mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,Tip30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P＜0.05);Tip30过表达后AGS细胞凋亡率相比对照组显著增大,Tip30过表达促进AGS细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关. 结论 Tip30基因过表达可抑制人胃癌AGS细胞增殖活性、体外迁移能力,且促进胃癌细胞凋亡.
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Tip30基因甲基化与肝细胞癌临床预后的关系
肿瘤细胞DNA甲基化紊乱常表现为癌基因去甲基化和抑癌基因高甲基化,即抑癌基因功能失活是通过表观遗传调控抑制,而不是通过基因缺失或突变.既往研究在肝细胞癌中p16、SOCS-1、TFPI-2、E-cadherin、RASSFIA和NOREIB等抑癌基因常常表现为高甲基化状态,这些基因的高甲基化状态与肝细胞癌的发生、发展关系密切.
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骨桥蛋白与TIP30基因在口腔鳞癌中的表达
目的:研究口腔鳞状细胞癌(Oscc)中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和TIP30基因的表达及意义.方法:用实时荧光定量PCR法检测OSCC(n =18)组织和癌旁正常口腔黏膜(n=18)OPN及TIP30 mRNA的表达；用免疫组织化学En VisionTM法检测OSCC组织石蜡切片(n=70)和正常口腔黏膜(n=20)中OPN和TIP30蛋白的表达.用SPSS 17.0软件进行统计分析.结果:OPN在OSCC组织中的mRNA和蛋白表达水平高于正常组织(P＜0.01)；TIP30基因在正常组织中mRNA和蛋白表达水平高于OSCC组织(P＜0.01).OPN、TIP30基因的表达呈负相关性(P＜0.05).结论:OPN可能参与了OSCC的发生发展；TIP30基因对OSCC的作用可能与OPN相反.
