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黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究
目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1；TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％；药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少；经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用；将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.
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小干扰RNA抑制MG-63细胞cyclin A2基因的表达
目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制骨肉瘤及正常成纤维细胞中cyclin A2基因的表达,并观察其对细胞生物活性的影响.方法 设计并化学合成3对针对cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分别将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞HSF中,以无义siRNA转染作为阴性对照;以real-time PCR、Western blot检测cyclin A2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、克隆培养等方法评价抑制cyclin A2基因表达后细胞的生长状态,同时检测PCNA及cyclin B1表达的改变.结果 3对siRNA均能使cyclin A2 mRNA的表达降低,其中siRNA1抑制率高.在骨肉瘤细胞MG-63中,转染50 nmol/L的siRNA1 48 h后,cyclin A2的mRNA及蛋白表达被抑制近80%,这导致细胞增殖抑制,80.1%的细胞被阻滞在G0/G1期,克隆形成能力下降至45.5%,同时,PCNA及cyclin B1的mRNA表达明显降低.对正常成纤维细胞HSF,虽然siRNA1能抑制近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白表达,但细胞的增殖及克隆形成能力未受影响.结论 针对cyclin A2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的生长,而对正常细胞影响不大.表明cyclin A2是骨肉瘤细胞增殖所依赖的关键基因,抑制其表达有望成为治疗骨肉瘤的新途径.
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丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究
目的 研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用.方法 MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;Annexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用.结果 丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11 μmol·L-1,且分别在2.5～10 μmol·L-1和10～40 μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100 μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多.结论 丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期.
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鬼针草提取物对Hela细胞及A549细胞增殖及细胞周期的影响
目的 研究鬼针草提取物(BPE)对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用及对细胞周期的影响.方法 常规MTT法分析BPE对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用并计算IC50;Hochest33342染色分析10 μg/mL BPE对肿瘤细胞的凋亡诱导作用;流式细胞术分析BPE对肿瘤细胞周期的影响.结果 BPE能抑制Hela细胞及A549细胞的体外增殖并呈剂量依赖性,IC50分别为10.34 μg/mL及8.31 μg/mL;Hochest染色证实BPE能诱导肿瘤细胞凋亡;流式细胞术分析证实BPE能将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期.结论 鬼针草能使细胞停滞于G0/G1期,并能诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖.
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网脊衣酸上调p21CIP1蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析
目的 探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制.方法 细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用.结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达.同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平.阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性.而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加.结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖.
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杠柳毒苷体外抑制肝癌细胞和乳腺癌细胞增殖的实验研究
目的 探讨杠柳毒苷在体外对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法 MTT法观察杠柳毒苷对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察杠柳毒苷对两种肿瘤细胞的细胞增殖周期作用.结果 与对照组比较,杠柳毒苷能明显抑制两种肿瘤细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.流式细胞仪检测发现,杠柳毒苷对乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞持续作用24 h后,可以使G0/G1期细胞增多,G2/M期细胞减少.结论 杠柳毒苷具有抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞增殖的作用,并可将乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞的细胞生长周期阻滞在G0/G1期.
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EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251抑制作用的研究
背景与目的:使用小分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点.本文探讨EGFR抑制剂gefitinib对人胶质瘤细胞U251的抑制作用.方法:用不同浓度gefitinib作用于U251细胞72h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度gefitinib作用后细胞的生存率;流式细胞术分析不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后细胞周期的变化；Western blotting法检测不同浓度gefitinib作用后,U251细胞周期相关蛋白表达量的变化.结果:MTT结果显示与对照相比,不同浓度gefitinib作用U251细胞72h后,细胞增殖抑制率均具有显著性差异(P＜0.05),并呈浓度依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01 μmol/L.细胞周期检测结果显示,随着gefitinib 浓度的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,而S+G2/M期细胞的比例明显降低,说明gefitinib阻滞U251细胞于G0/G1期.Western blotting分析结果显示gefitinib对U251细胞的G0/G1期阻滞主要通过下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2 、CDK4与细胞周期素cyclin E的表达,同时上调p21的表达,介导周期阻滞来实现.结论:gefitinib可能通过细胞周期的G0/G1期阻滞,体外抑制人胶质瘤细胞的生长,这为gefitinib治疗恶性脑胶质瘤提供了一定的理论基础.但对于gefitinib的研究还需进一步深入,以明确其治疗机制及疗效.
