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黄芪总黄酮大鼠30 d喂养试验
黄芪系豆科黄芪属植物,为中药传统的补气药.黄芪总黄酮(total flavonoids of astragalus,TFA)是从黄芪中分离出的有效活性成分之一,研究表明它具有抗损伤和清除自由基等多种作用[1,2],为探讨TFA作为保健食品长期服用可能对人体造成的潜在危害,我们对该产品进行了大鼠30 d喂养试验,结果如下.
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黄总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞凋亡的影响
目的:探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡的影响.方法:以在体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞为对象,分为正常对照组、高糖组(25 mmol/L)、干预组不同浓度黄芪总黄酮组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml),孵育6d,采用TUNEL法检测培养后周细胞凋亡率;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:与高糖组比较,黄芪总黄酮0.5、1.0、2.0mg/ml组周细胞MDA含量、SOD活力、MDA含量/SOD活力比值及凋亡率均降低(P＜0.01);MDA含量/SOD活力与周细胞凋亡率二者呈正相关(r=0.921,P＜0.01);黄芪总黄酮2.0 mg/ml组周细胞氧化应激水平及凋亡率明显低于其他各组(P<0.05).结论:一定浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡有明显的抑制作用,呈剂量依赖性.
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黄芪总黄酮对扑热息痛所致小鼠肝损伤防护作用的研究
目的：研究黄芪总黄酮(TFA) 对扑热息痛所致肝损伤的防护作用。方法：用1%羧甲基纤维素钠10 ml*kg-1, TFA100 mg*kg-1或维生素C (Ascorbic acid，VC)1 000 mg*kg-1给小鼠灌胃 1 h后，灌扑热息痛1 000 mg*kg-1，观察小鼠死亡率的变化；提前1 h用不同剂量的TFA或VC处理后，再灌400 mg*kg-1的扑热息痛，检测血清酶学和肝脏组织学的改变。结果：给小鼠扑热息痛1 000 mg*kg-1灌胃组，24 h后可致80%小鼠死亡；提前1 h 用TFA100 mg*kg-1或VC灌胃其死亡率可分别下降至20%和0%。血清转氨酶(ALT)和病理切片显示当给400 mg*kg-1扑热息痛灌胃24 h后即可引起严重肝损伤(ALT升高和肝组织大面积坏死，P<0.001)。 TFA或VC预防组(提前1 h给药)的肝损伤程度与对照组比较明显减轻，其作用强度与药物浓度成正比。结论：TFA对扑热息痛所致肝损伤有保护作用。
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黄芪总黄酮对扑热息痛所致肝损伤的防护机理探讨
目的:研究黄芪总黄酮对扑热息痛所致肝损伤的防护机理.方法:用高压液相测定扑热息痛及代谢产物和苯巴比妥诱导睡眠模型研究黄芪总黄酮(TFA)对扑热息痛的代谢及TFA抗扑热息痛所致损伤的机理.结果:TFA可明显降低尿中硫醚胺酸的浓度,其变化与TFA浓度成反比;但对其它代谢产物的影响无明显统计学差异.苯巴比妥诱导小鼠睡眠实验结果显示, TFA (100 mg*kg-1) 本身对苯巴比妥代谢无明显影响 (P》0.05), 扑热息痛 (400 mg*kg-1)可显著延长小鼠的睡眠时间 (P《0.001); 但TFA (100 mg*kg-1)明显缩短扑热息痛所延长的苯巴比妥诱导的睡眠时间(P《0.005).结论:TFA抗扑热息痛损伤的作用机理可能与TFA抑制扑热息痛某些代谢过程以及降低扑热息痛代谢过程中产生毒性代谢产物有关.
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黄芪总黄酮抗突变作用实验研究
目的:探讨黄芪总黄酮(TFA)是否具有抗突变作用.方法:设3个浓度的药物组和突变物对照组,采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验、小鼠睾丸精子畸变实验和体外哺乳类动物细胞V79/HGPRT基因突变试验.
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黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究
目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1；TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％；药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少；经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用；将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.
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黄芪总黄酮生物学活性作用研究进展
黄芪总黄酮是黄芪中分离的抗氧化清除自由基的主要活性成分,具有明显的抗肿瘤、抗损伤和抗突变的作用,本文通过文献综述考证黄芪总黄酮的生物学活性及其作用机制,为该类中药成分临床研究提供了理论依据,从而更好地对其进行开发利用.
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乙醇/无机盐双水相体系分离纯化黄芪总黄酮的研究
目的:研究乙醇/无机盐双水相体系对黄芪黄酮的分离和纯化.方法:以分相能力差异和目标萃取物在其中的分配为考察指标,分析乙醇与几种常用盐的组成双水相体系的及其相图,筛选出乙醇(EtOH)/磷酸氢二钾(K2HP04)体系为萃取黄芪总黄酮的佳体系,并研究EtOH/K2HPO4体系中各成分的配比对黄芪黄酮的分配系数和相比的影响.结果与结论:分离纯化黄芪黄酮的佳条件为:ωTion为36.05％,ωκ2HPO4为18.20％的EtOH/K2 HPO4体系.黄芪黄酮在体系中的分配系数为10.33,萃取率高达96.6％,同时对该体系萃取后上下相中黄芪皂苷和多糖含量进行测定,上相中黄芪皂苷去除率达到92.01％；黄芪多糖全部富集在下相水相,即去除率高达100％.这有利于黄芪粗提取液中总黄酮的分离和纯化.
关键词： 双水相萃取 EtOH/K2HPO4体系 黄芪 黄芪总黄酮 分离 -
黄芪总黄酮对豚鼠心室肌细胞动作电位和延迟整流钾电流的作用
目的:研究黄芪总黄酮(TFA)对豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)和延迟整流钾电流(IK)的作用.方法:实验采用标准玻璃微电极细胞内记录心室肌细胞AP和全细胞膜片钳技术记录IK.结果:应用TFA 20 mg/kg后心室肌AP的幅度从给药前的(70.25±5.97)mV降低到(58.73±4.86)mV(n=6,P＜0.05);AP时程(APD90)从给药前的(236.08±17.63)ms延长到(282.13±22.01)ms(n=6,P＜0.05).应用TFA 40 mg/kg后心室肌AP的幅度从给药前的(72.65±5.12)mV降低到(48.32±8.76)mV(n=6,P＜0.05);AP时程(APD90)的从给药前的(265.34±14.82)ms延长到(315.46±24.33)ms(n=6,P＜0.05).而应用TFA 20 mg/kg后,在+50 mV指令电压下,心室肌细胞的IK从(1.21±0.24)nA降至(0.96±0.27)nA(n=6 P＜0.01),应用TFA 40 mg/kg后心室肌细胞的IK从(1.45±0.36)nA下降到(1.01±0.27)nA,差异有显著性(n=6 P＜0.01).结论:TFA可以降低心室肌AP幅值,延长AP时程,抑制心室肌细胞的IK幅值,并且有一定的剂量依赖性.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内向整流钾电流的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞内向整流钾电流的作用,以明确TFA降低病毒性心肌炎小鼠心律失常发生率作用机制.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞内向整流钾电流(IK1).结果 应用黄芪总黄酮(TFA))组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,IK1峰值从(-10.11±1.57) nA增加到(-12.25±1.64)nA,差异有统计学意义(P＜0.05,n=6).结论 黄芪总黄酮可增加柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内向整流钾电流(IK1)的幅值,这可能是黄芪总黄酮降低病毒性心肌炎小鼠心律失常发生率作用机制之一.
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黄芪总黄酮对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流及钠电流的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)及钠电流(INa)的作用.方法 实验用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞, 利用全细胞膜片钳的方法记录心室肌细胞的ICa-L及INa.结果 (1)应用TFA(20 mg*kg–1) 后ICa-L从(-0.313±0.14)nA 下降到(-0.402±0.27)nA ,差异有统计学意义( P< 0.01).(2)应用TFA(20 mg*kg -1)后与对照组比较, INa峰值从(-8.43±2.03)nA升高到(-6.37±1.58) nA,差异有统计学意义(P<0.01) .结论 TFA可以增加豚鼠心室肌细胞ICa-L的幅值, TFA可显著降低豚鼠心室肌细胞INa的幅值.
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应用蛋白质组学方法研究黄芪总黄酮对人肝癌细胞的影响
目的:应用蛋白质组学方法研究黄芪总黄酮(TFA)对人肝癌细胞的影响.方法:随机将BEL-7402人肝癌细胞分成两组,一组为对照组,另一组以黄芪总黄酮(剂量为半数抑制率)处理48 h.用双向凝胶电泳建立黄芪总黄酮组和对照组对人肝癌细胞蛋白质组影响的二维凝胶电泳图谱,用MALDI-TOF-MS生物质谱对差异的蛋白质进行鉴定分析.结果:黄芪总黄酮作用于人肝癌细胞的蛋白质组,质谱鉴定出10个差异蛋白:胆绿素还原酶B、转胶蛋白2、抗氧化蛋白1、磷酸化应激诱导蛋白1、内质网蛋白29、磷酸甘油酸变位酶1、胆绿素还原酶B、ABHD14B蛋白、LASP-1和NM23A;其中磷酸化应激诱导蛋白1表达下调,其他蛋白均上调.结论:黄芪总黄酮中的某些蛋白如转胶蛋白2、磷酸化应激诱导蛋白1、抗氧化蛋白1、内质网蛋白29、磷酸甘油酸变位酶1、胆绿素还原酶B等可能与黄芪总黄酮抗肿瘤作用机制相关.
关键词： 黄芪总黄酮 Bel-7402细胞 蛋白质组 二维凝胶电泳 质谱技术 -
黄芪总黄酮对人体正常细胞和肿瘤细胞辐射防护作用的差异性研究
目的 研究黄芪总黄酮(total flayonoids of astragalus,TFA)对60°Co γ射线辐射损伤的人体正常骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)和肝癌细胞HepG-2辐射防护作用的差异性.方法 MTT法检测TFA处理组与单纯照射组hMSCs和HepG-2的细胞活性;HepG-2细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性;流式细胞技术分析细胞凋亡率;Western blot技术分析凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2,Bax的表达.结果 MTT检测结果显示,当给予6 Gy γ射线一次性照射后,TFA预处理组hMSCs细胞活性分别比单纯照射组提高了1.15～1.95倍;经相同浓度TFA预处理的肝癌细胞HepG-2的细胞活性仅为单纯照射组的53%～23%;TFA的给药浓度与细胞存活率(survival rate)之间显现出良好的量效关系.细胞克隆形成实验结果显示:TFA+照射组能够明显抑制HepG-2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组.流式细胞分析表明,经6 Gy γ射线一次性照射6、24和48 h后,TFA预处理组hMSCs的细胞凋亡率分别为23.3%,11.2%和2.9%.单纯照射组hMSCs的细胞凋亡率相应为29.3%,24.9%和13.6%;TFA预处理组肝癌细胞HepG-2的细胞凋亡率分别为11.6%,17.3%和20.1%,单纯照射组HepG-2的细胞凋亡率分别为6.9%、9.3%和15.8%.Western blot分析显示,在肝癌细胞HepG-2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax 的表达量显著高于单纯照射组和对照组(t=11.17～-2.8,-12.35～3.4,P＜0.05);凋亡抑制蛋白Bel-2的表达量,TFA预处理照射组明显低于单纯照射组和对照组(f<6.36～17.61.P<0.05).结论 TFA对人正常骨髓间充质细胞具有明显的放射防护作用,对肝癌细胞不仅没有放射防护作用反而具有凋亡促进作用;TFA对肝癌细胞的促凋亡作用,主要通过上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达与下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,从而大大增强了60 Co γ射线对肝癌细胞的凋亡诱导作用.
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基于网络药理学的黄芪总黄酮治疗肾病综合征的机制研究
构建黄芪总黄酮活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,对靶点涉及的功能和通路进行分析,探讨黄芪总黄酮治疗肾病综合征的作用机制.采用1HNMR和LC-MS辨识黄芪总黄酮化学成分,检索TCMSP与TCMID数据库获取黄芪总黄酮主要活性成分,利用Pharm Mapper服务器、SEA、SIB、HOME-NCBI-GENE、Gene Cards和OMIM数据库预测和筛选黄芪总黄酮治疗肾病综合征的作用靶点.采用Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络与蛋白相互作用网络图,采用Clue GO软件对靶点进行GO富集分析及KEGG通路分析,通过Bio GPS数据库对靶点所属的组织分布进行归属,并通过SystemsDockWebSite对成分与靶点进行分子对接验证.筛选得到黄芪总黄酮29个活性成分,涉及50个作用靶点.网络分析结果表明,黄芪总黄酮主要涉及炎症反应过程、氧化应激过程、凋亡与自噬等生物过程,通过调节AGE-RAGE、PI3K/Akt、VEGF、IL-17和MAPK等信号通路来发挥治疗肾病综合征的作用.本研究体现了黄芪总黄酮多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步开展黄芪总黄酮治疗肾病综合征作用机制的研究提供了新思路和新方法.
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黄芪总黄酮生物学活性作用的化学成分基础研究
目的:通过分离黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus, TFA)所含主要化学成分和分析其组合比例,探讨TFA生物学活性的作用机制.方法:应用不同柱层析分离和光谱鉴定等技术对TFA进行分离,鉴定所得化合物的化学结构,计算各主要成分的组合比例.结果:从TFA中分离得到6个化合物,经光谱分析分别鉴定为β-谷甾醇(1)、芒柄花素(2)、毛蕊异黄酮(3)、β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),经计算这六种化合物在TFA分离出的单体化合物中重量组合比例为23:11:12:3:22:29.结论:TFA中主要含有6种化合物,这6种化合物的有机组合比例可能是TFA具有多种生物学活性的物质基础.
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黄芪总黄酮对辐射肝癌细胞的促凋亡作用
目的 从细胞和蛋白水平研究黄芪总黄酮(total flavonoids of astragalus,TFA)对辐射肝癌细胞的促凋亡作用.方法 以对数生长期的HepG-2肝癌细胞为实验对象,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性；流式细胞技术分析细胞凋亡率；Western blot技术分析凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表达.结果 细胞克隆形成实验结果显示,TFA给药照射组能够明显抑制HepG-2细胞增殖,作用强于单纯TFA给药组和单纯照射组.流式分析结果也提示,经6Gyγ射线一次性照射6、24 h和48 h后,TFA预处理组肝癌细胞HepG-2的细胞凋亡率分别为(11.6±2.2)％、(17.3±1.5)％和(20.1±2.8)％,单纯照射组HepG-2的细胞凋亡率分别为(6.9±2.3)％、(9.3±3.5)％和(15.8±2.1)％.Western blot分析结果提示,在肝癌细胞HepG-2中,TFA预处理照射组促凋亡蛋白Fas和Bax的表达量显著高于单纯照射组和对照组；凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达量正好与此相反,TFA预处理照射组Bcl-2的表达量明显低于单纯照射组和对照组.结论 TFA对肝癌细胞不仅没有辐射保护作用,而且能够增强辐射对肝癌细胞的毒性作用.
关键词： 黄芪总黄酮 辐射 肝癌细胞HepG-2 凋亡 -
平行试验法优选黄芪总黄酮提取条件
目的 筛选黄芪总黄酮的佳回流提取温度.方法 以芦丁的收率为指标,采用平行试验法对黄芪总黄酮提取温度进行优选.结果 乙醇回流提取黄芪总黄酮的佳温度为80℃.结论 该提取温度符合大生产的要求,可为黄芪总黄酮的提取工艺研究提供科学依据.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织连接蛋白43表达的影响
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对柯萨奇B3病毒性心肌炎(VMC)小鼠急性期心肌组织连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒感染建立VMC小鼠模型,给予TFA 40 mg/L灌胃治疗,第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏.免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行定量分析.结果 ①VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).②TFA组Cx43蛋白表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 VMC心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达下降.TFA能明显提高CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达.
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黄芪总黄酮对急性心肌梗死大鼠心室肌细胞L-型钙电流及钠电流的作用
目的 研究黄芪总黄酮(TFA)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心室肌细胞L-型钙电流(L-ICa)及钠电流(I Na)的作用.方法 设正常对照组、AMI组及TFA实验组.大鼠开胸左前降支结扎造成AMI,开胸前5 min实验组大鼠舌静脉注射剂量为20 mg/kg的TFA溶液50 μl.用胶原酶酶解法急性分离AMI模型大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术记录左前降支供血区心外膜细胞的L-ICa及I Na的作用.结果 ①应用TFA(20 mg/kg)后,L-ICa从(0.313±0.14)nA增加到(0.402±0.27)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n=6).②应用TFA(20 mg/kg)后与对照组比较,峰值从(-8.43±2.03)nA下降到(-6.37±1.58)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n=6).结论 TFA可以增加AMI大鼠心室肌细胞L-ICa的幅值,TFA可显著降低AMI大鼠心室肌细胞I Na的幅值.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞钠电流的作用.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞钠电流(ⅠNa).结果 应用黄芪总黄酮(TFA)组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,ⅠNa峰值从(-7.79±1.53)nA下降到(-5.64±1.67)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n＝6).结论 黄芪总黄酮可显著降低柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的幅值.
