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4'-去甲基表鬼臼毒素的酶法糖基化
4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战.该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶(glycosyltransferase, GT)基因AbGT5,并成功进行了外源表达及蛋白纯化.重组AbGT5能够催化4'-去甲基表鬼臼毒素进行糖基化,获得的产物经MS,1H-NMR,13C-NMR,HSQC以及HMBC等波谱技术鉴定为4'-去甲基表鬼臼毒素-4'-O-β-D-葡萄糖苷.酶学性质研究发现AbGT5的适反应温度为20 ℃,适pH 9.0,且不依赖金属离子.在适反应条件下,4'-去甲基表鬼臼毒素的转化率可达80%.该研究表明利用新颖糖基转移酶AbGT5可实现4'-去甲基表鬼臼毒素的高效酶法糖基化,为其糖基化提供新方法.
关键词: 糖基转移酶 酶法糖基化 工具酶 4'-去甲基表鬼臼毒素 库拉索芦荟 -
谈维生素C对甘油三酯(TG)测定结果的干扰
近年来,在临床生物化学检验中,酶比色测定法的应用越来越广泛.许多项目的测定都使用工具酶参与的反应,常用的是利用葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶等测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的酶法Trinder反应,即H2O2偶联过氧化物酶反应.是利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢(H2O2),再加氧化发色剂比色.该酶法的单试剂一步终点法,操作简便、快速准确、微量、试剂稳定,在半自动生化分析仪上的使用更是普及.但在实际工作中,却存在一些物质对该反应的干扰,给测定结果带来一定的分析误差.本文作者对一定浓度的维生素C对氧化酶(GPO)法测定甘油三酯(TG)做干扰试验,讨论维生素C对Trinder反应的干扰.
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人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性
目的 获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶.方法 通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达.表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化,获得的3C蛋白酶在4℃条件下,酶切融合蛋白IL-11,进行活性测定.结果 3C蛋白酶在大肠杆菌中获得了稳定、高效表达,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在.经过纯化、复性,纯度达90%以上,获得的3C蛋白酶能够有效切割含3C酶切位点的融合蛋白.结论 已成功开发了一种新型的基因工程工具酶.
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血清GGT、ALP和LDH联检测定对癌症患者的诊断及意义
癌症的发病率、死亡率逐年增高,是危害人类健康的常见病、多发病.因其复发率和转移率较高,加之大部分患者确诊时已处肿瘤中、晚期,严重影响预后.血清酶作为一种工具酶可用于了解体内成份的变化.也可作为有关器官是否正常的特异性生化指标.近年来国外资料报道血清中γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)可作为检测癌症患者的三种标志物.为了进一步探讨其对癌症诊断价值,笔者对176例癌症患者进行了此三种酶的测定分析及探讨,现将结果报告分析如下.
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自剪切重组麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C 蛋白酶融合蛋白在大肠杆菌表达系统中表达、纯化及活性检测
目的:利用大肠杆菌表达系统高效表达一种可以自剪切的重组的麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白酶,获得一种可溶性好、酶切特异性强,且在低温下仍保持酶活性的新型基因工程工具酶。方法将编码人鼻病毒3C 蛋白酶的遗传微粒克隆入表达载体 pRSF-duet,转化大肠杆菌 BL21(DE3),经镍柱亲和层析纯化得到人鼻病毒3C 蛋白酶。通过自身体内酶切实验进行活性检测。结果人鼻病毒3C 蛋白酶在大肠杆菌表达系统中得到了高效的表达,并可特异性识别及剪切人鼻病毒3C蛋白酶酶切位点。结论获得了新型的基因工程工具酶。
关键词: 人鼻病毒 3C 蛋白酶 表达 工具酶 -
临床生化检验工具酶的基因克隆
近年来,临床生化检验技术发生了深刻的变化,其显著特征之一是酶学测定方法的应用越来越广泛.酶法具有特异性好、反应条件温和、无毒性等优点,现建立的酶学测定方法已不下200种.
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诊断用酶的研究进展
试剂方法中决定试剂质量的关键是工具酶的质量,而工具酶的生产工艺又是决定其质量和产率的关键因素,因而国内外学者付出了辛勤的劳动,力求选育高产菌株(包括构建基因工程菌),探索优化的发酵工艺和后提取纯化技术,以提高酶的产率,保证原酶质量.工具酶的发酵生产和纯化技术涉及微生物工程、酶工程和分子生物学工程领域的专门知识和技术经验,需精密仪器设备,具技术垄断的特点,技术难度相当大.为便于诊断用酶研究生产和临床化学工作者了解医学检验诊断试剂中工具酶的研究现状和进展,现将近10年来有关技术资料作一综述,以供参考.