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二氮嗪后处理对缺氧/复氧成年大鼠心肌细胞存活率及磷酸化糖原合成激酶-3β、Bcl-2和Bax表达的影响
目的 研究线粒体ATP-敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,mitoKATP通道)开放剂二氮嗪(diazoxide,DZ)后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后细胞存活及对磷酸化糖原合成激酶-3β(phospho glycogen synthase kinase-3β,pGSK-3β),Bcl-2,Bax表达的影响. 方法 体外培养原代成年大鼠(30只)心肌细胞建立H/R损伤模型,按随机数字表法随机分为5组(每组6只):①Normal组:在二氧化碳(CO2)培养箱中持续培养6h组；②H/R组:缺氧3h复氧3h组；③DZ组:缺氧3h复氧3h,复氧5 min时给予100 μmol/L DZ组；④DZ+5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-羟葵酸盐(5-hydroxydecanoate,5-HD),复氧5 min时给予100μmol/L DZ组；⑤5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-HD组.复氧3h末通过计数细胞长杆率测定存活率,免疫印迹法测定心肌细胞内pGSK4β,Bcl-2和Bax的表达. 结果 复氧3h末,Normal组单个心肌细胞收缩幅度为(13.12±0.19)％,与Normal组比较,其他各组单个心肌细胞收缩幅度明显降低[H/R组为(7.97±0.22)％,DZ组为(10.48±0.20)％,DZ+5-HD组为(7.97±0.19)％,5-HD组为(8.22±0.22)％](P＞0.05),心肌细胞内Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高(P＜0.05).DZ后处理组心肌细胞存活率为(64±5)％,与H/R组比较明显增高(P＜0.05),心肌细胞内Bcl-2、pGSK4β表达水平升高,Bax表达水平降低,而缺氧末即刻给予5-HD可以逆转DZ后处理的这些作用(P＜0.05)；5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 DZ后处理可能通过激活mitoKATP通道、上调pGSK-3β及Bcl-2,下调Bax的表达增加H/R后成年大鼠心肌细胞的存活.
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线粒体KATP通道介导七氟醚后处理的脑保护作用
目的 观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤保护与线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channels,mitoKATP)的关系. 方法 将符合标准的海马脑片按随机数字表法分为4组(每组10片):缺氧无糖损伤对照组(oxygen-glucose deprivation,OGD组)、4％七氟醚(sevoflurane)后处理组(4％Sevo组)、mitoKATP通道阻滞剂5-羟葵酸盐(5-hydroxydeeanoate,5-HD)组(5-HD组)、4％七氟醚后处理+5-HD组(SHD组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(orthodromic population spike,OPS);利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度. 结果 与OGD组比较,4％Sevo组OPS恢复程度(68±9)％和恢复率(60％)升高,组织损伤百分率(0.40±0.05)降低.与4％Sevo组比较,5-HD组和SHD组OPS恢复程度(6±5)％、(7±7)％和恢复率(10％、20％)降低,组织损伤百分率(0.64±0.08、0.65±0.06)升高. 结论 七氟醚后处理可减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤,该保护作用与mitoKATP通道的激活有关.
关键词： 线粒体ATP敏感性钾通道 七氟醚后处理 海马脑片 缺氧无糖损伤 -
缺血后处理与线粒体通透性转运孔
背景 缺血后处理(ischemic postconditioning,IPo)能明显减轻器官缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI),动物实验和临床研究均已经得到证实,其机制可能与增强组织抗氧化能力和抑制细胞凋亡有关.然而近些年提出线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)在IPo减轻器官I/RI研究中发挥重要作用.现将从MPTP的角度探讨IPo的保护机制.目的 阐述MPTP在IPo器官保护机制中的作用.内容 MPTP是IPo发挥作用的终靶点.它是位于线粒体内外膜上的复合蛋白孔道,其开放程度与细胞钙离子超载、线粒体膜电位降低、氧活性物质增多、凋亡蛋白释放等关系密切.IPo可通过多条信号转导途径发挥器官保护作用,对MPTP的调节是其重要方面.趋向 MPTP的研究完善了IPo器官保护机制.
关键词： 缺血后处理 线粒体通透性转换孔 线粒体ATP敏感性钾通道 -
线粒体ATP敏感性钾通道对缺血性脑损伤的保护作用
目的应用线粒体ATP敏感性钾通道(mito KATP)特异性的开放剂二氮嗪和阻断剂5-HD观察mito KATP对缺血性脑损伤的影响.方法成年健康雄性SD大鼠32只,随机分成四组:假手术组(n＝8),行大脑中动脉栓塞(MCAO)的手术操作,但不插线;脑缺血组(n＝8),MCAO前给予同等量生理盐水;二氮嗪组(n＝8),MCAO前30 min二氮嗪5 mg/kg腹腔注射;5-HD复合二氮嗪组(n＝8),5-HD 10 mg/kg静脉注射,15 min后二氮嗪5.0 mg/kg腹腔注射,30 min后再行MCAO.各组MCAO 2 h再灌注24 h后,应用Garcia评分法观察大鼠神经精神系统表现,大脑切片并行TTC染色,计算大脑梗死容积以及透射电镜观察线粒体超微结构的变化.结果应用二氮嗪后,相对脑缺血组大鼠的神经功能评分显著提高(P＜0.01),大脑梗死容积明显减小(P＜0.01).电镜下见脑缺血组线粒体肿胀混浊,呈空泡化,内嵴断裂,膜破损;二氮嗪组线粒体仅有轻度肿胀,基本结构完好,内膜间隙清晰.5-HD复合二氮嗪组表现与脑缺血组近似,二氮嗪的保护作用被取消.结论 mito KATP的开放可以对缺血性脑损伤产生保护作用.
关键词： 缺血性脑损伤 线粒体ATP敏感性钾通道 -
ST-1抗豚鼠和兔心肌缺血再灌注损伤的血流动力学研究
目的:拟证实双萜类化合物ST-1的抗心肌缺血再灌注损伤作用.方法:(1)Langendorff装置逆向豚鼠心脏灌注,预先灌注ST-1 1.0、5.0和10μmol·L-15min,停灌30min,再灌注20min,制成豚鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察药物对心脏舒缩功能、冠脉流出液量的影响;(2)结扎麻醉兔冠脉左前降支30min后再连续灌注60min,制成兔心肌缺血再灌注损伤模型,ST-125～100μg·kg -1静脉注射,动态观察其对血流动力学指标的影响.结果:ST-1预处理可有效减轻离体豚鼠缺血再灌注引起的左室舒缩功能下降;兔ST-1组左心室等容期压力大变化速率、左心室收缩压、左心室发展压、左心室压峰值时间的变化值明显小于模型对照组(P＜0.05),心率、舒张压、收缩压和平均动脉压变化不明显(P＞0.05).结论:ST-1预处理有抗离体豚鼠和在体家兔心肌缺血再灌注损伤的作用.
关键词： 豚鼠 兔 心脏缺血再灌注 血流动力学 线粒体ATP敏感性钾通道 -
二氮嗪预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的延迟保护作用
目的探讨二氮嗪(DE)进行药物预处理能否模拟缺血预处理(IPC)对肝脏缺血再灌注损伤的延迟保护作用及其可能的作用机制.方法建立大鼠70%肝脏热缺血再灌注(IR)损伤模型.实验共分为5组:IPC组以肝缺血5 min作预处理;DE组以静脉注射DE作为预处理;DE+5-HD组是在DE组基础上再予静脉注射线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP通道)选择性阻滞剂5-HD进行预处理;对照组(C组)以静脉注射等量生理盐水作为预处理;上述4组均在预处理24h后行肝缺血1 h再灌注3 h;假手术组(S组)仅行二次开腹手术,不作处理.在完成预定实验操作后分别取下腔静脉血进行肝血清酶(ALT、LDH)检测,取肝组织进行超氧化物歧化酶(SOD)活力与丙二醛(MDA)含量及肝组织湿重/干重(W/D)的测定,并行肝组织的显微结构观察.结果C组ALT、LDH、MDA及W/D的水平明显高于S组(P＜O.01),而SOD活性明显低于S组(P＜O.01),肝脏在光镜下的显微结构损伤明显;IPC组与DE组的各项肝组织损伤指标均明显好于C组(P＜0.05及P＜O.01);而DE+5-HD组的肝损伤指标均差于DE组(P＜O.05及P＜0.01).结论使用DE进行药物预处理能够模拟出IPC效应,对大鼠肝脏IR损伤具有延迟保护作用,其发生机制可能与诱导肝脏SOD活性增加、提高肝脏的抗氧化能力,以及改善肝组织微循环、减轻肝脏水肿有关.
关键词： 缺血预处理 缺血再灌注 线粒体ATP敏感性钾通道 肝脏 二氮嗪 -
线粒体源性氧自由基参与二氮嗪预处理的心肌保护作用
目的研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理中氧自由基(ROS)的来源.方法传代培养的未成熟SD大鼠心肌细胞,随机分为对照组、二氮嗪(30 μmol/L)预处理组、二联苯碘(DPI,10 μmol/L)处理组、myxothiazol(0.2μmol/L)处理组.实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法测细胞内丙二醛(MDA)含量,台盼蓝染色法统计死亡率,电镜下观察线粒体的形态.结果二氮嗪预处理可降低细胞死亡率、细胞内MDA含量及培养液中LDH的释放量,减轻细胞内线粒体水肿程度.二氮嗪的这种保护作用可以被线粒体氧化呼吸链阻断剂myxothiazol阻断.结论二氮嗪预处理对心肌细胞的保护作用与线粒体电子传递链氧化产生的氧自由基有关.
关键词： 二氮嗪 线粒体ATP敏感性钾通道 线粒体电子传递链 氧自由基 大鼠 -
二氮嗪预处理在培养的未成熟鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用
目的研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对培养的未成熟心肌细胞的保护作用.方法传代培养的未成熟S-D大鼠心肌细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h、复氧3 h)、二氮嗪(30μmlo/L)组、格列本脲(10 μmol/L)组、超氧化物歧化酶(SOD,3×105U/L)/过氧化氢酶(CAT,4.5×105U/L)组、N-2乙酰丙酰基甘氨酸(MPG,100μmol/L)组.实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法计算细胞死亡率、硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量、铈化学染色法观察细胞线粒体结构.结果二氮嗪预处理后细胞死亡率、细胞内MDA含量、培养液中LDH活性较缺氧/复氧组降低(P《0.01),铈-氧自由基(Ce-ROS)形成减少;格列本脲、SOD/CAT和MPG可以阻断此保护作用.结论二氮嗪预处理对未成熟心肌有保护作用,这种保护作用与氧自由基有关.
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缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞NF-κB信号通路中二氮嗪对FKN表达的影响
目的 观察缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs) NF-κB信号通路中二氮嗪对fractalkine(FKN)表达的作用.方法 将培养的大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2 h+复氧2 h)、二氮嗪十缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2 h+复氧2 h)、NF-κB特异性阻断剂吡咯烷二硫基甲酸盐十二氮嗪十缺氧-复氧组(PDTC组,PDTC 100 μmol/L预处理2 h+二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2 h+复氧2 h).AnnexinV-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力,RT-PCR法检测FKN mRNA水平.结果 与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,增殖率降低,FKN mRNA表达增强(P＜0.01)；与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,增殖率升高,FKN mRNA表达降低(P＜0.01)；与DZ组比较,DTC组细胞凋亡率升高,增殖率降低,FKN mRNA表达增强(P＜0.01).结论 线粒体ATP敏感性钾通道开放通过NF-κB信号抑制MMECs的H-R损伤和FKN表达.
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二氮嗪预处理对肝硬化大鼠肝脏的保护作用
目的 探讨采用线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP通道)选择性开放剂二氮嗪(DE)进行预处理能否模拟缺血预处理(IP)对硬化肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法 雄性肝硬化SD大鼠随机分为5组(每组8只).IP组以肝缺血5 min作预处理;DE组以静脉注射DE作为预处理;DE+5-HD组是在DE组基础上再予静注mitoKATP通道选择性阻滞剂5-hydroxydecanoate(5-HD)进行预处理;对照组(C组)以静注等量生理盐水作为预处理;上述4组均在预处理后行肝缺血45 min再灌注60 min;缺血方式均为70%肝脏热缺血.假手术组(S组)仅行开腹,不作任何其他处理.完成预定实验操作后分别取血用于血清谷丙转氨酶(ALT)与乳酸脱氢酶(LDH)检测,切取肝组织用于测定ATP酶活力、湿重/干重(W/D)的测定及观察显微、超微结构变化.结果 C组ALT,LDH,ATP酶及W/D的水平明显高于S组(P＜0.01),肝脏的显微及超微结构损伤明显;IP组与DE组的各项肝组织损伤指标均明显好于C组,ATP酶活性低于C组(P＜0.05及P＜0.01);而DE+5-HD组的肝损伤指标均差于DE组,ATP酶活性高于DE组(P＜0.05及P＜0.01).结论 使用DE进行药物预处理能够模拟出IP效应,对肝硬化大鼠肝脏I/R损伤具有保护作用,其作用可能与下调肝组织ATP酶活性,减少ATP大量分解,使肝组织ATP含量升高,改善肝能量代谢,增加能量储备;改善肝组织微循环,减轻肝脏水肿有关.
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ATP敏感性钾通道参与HO-1对缺血-复灌心肌保护的作用
目的:研究线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)参与血红素氧化酶1(HO-1)对抗心肌缺血-复灌损伤.方法:SD大鼠腹腔注射HO-1的诱导剂hemin(50 mg/kg)、抑制剂ZnPP(25 μg/kg)和mitoKATP通道阻断剂5-HD,24 h后取离体心脏给予30 min缺血和120 min复灌.检测心室收缩功能、LDH、CK和心肌梗死面积.结果:①hemin诱导HO-1活性增加可改善缺血-复灌心脏的收缩功能,缩小心肌梗死面积,而ZnPP可抑制其作用.②在腹腔注射hemin前给予mitoKATP通道阻断剂5-HD(5 mg/kg),与Hemin+IS组相比,心脏的收缩功能明显下降,心肌梗死面积增大,LDH和CK释放增加.而在hemin预处理后24 h与30 min缺血前给予5-HD灌流(100 μmol/L)同样可阻断hemin诱导的心肌保护作用.结论:hemin可诱导心肌HO-1增加保护心肌缺血-复灌性损伤,而mitoKATP通道在hemin诱导的心肌保护作用中扮演了启动因子和终末效应器双重角色.
关键词： 心肌 缺血 血红素氧化酶-1 线粒体ATP敏感性钾通道 -
靶向心肌线粒体ATP敏感性钾通道苯并噻二嗪类新衍生物的药理学特征
目的:设计合成苯并噻二嗪类新衍生物,研究其激活心肌线粒体ATP敏感性钾通道的药理学活性并与二氮嗪进行对比分析.方法:采用氧电极法评价新衍生物对心肌线粒体态3呼吸(R3)、态4呼吸(R4)以及呼吸控制率(RCR)等呼吸功能参数的影响.戊巴比妥钠麻醉Wistar大鼠,颈总动脉插管,连接八导生理记录仪记录二氮嗪及新衍生物对大鼠血压的影响.结果:100 μmol/L衍生物16和17可同时降低心肌线粒体琥珀酸氧化呼吸链中的R3和R4,但不影响RcR,作用与二氮嗪类似;衍生物15在降低心肌线粒体R3和R4的同时可显著提高线粒体RCR.静脉注射10 mg/kg二氮嗪具有迅速的降压作用,与对照组对比,在3 min时血压下降约为28%,而20种衍生物均无降压作用.结论:衍生物15可激活心肌线粒体ATP敏感性钾通道,提高线粒体RCR,且无降压作用,其心血管选择性优于二氮嗪.
关键词： 苯并噻二嗪 二氮嗪 线粒体ATP敏感性钾通道 心肌缺血 -
开放线粒体KATP通道对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用
目的:观察ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂二氮嗪对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:采用过氧化氢(500 μmol·L-1)诱导法制备大鼠培养心肌细胞氧化应激损伤模型,通过检测培养液中乳酸脱氢酶以及用流式细胞仪结合罗丹明-123和碘化丙啶双标记法检测线粒体膜电位和细胞存活状态,观察二氮嗪(100 μmol·L-1)对氧化应激损伤的保护作用.结果:二氮嗪预处理后,细胞培养液中乳酸脱氢酶活性较过氧化氢处理组显著降低(P＜0.01),细胞存活率升高,并可减少氧化应激造成的线粒体膜电位的丢失,其作用可被线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸酯所拮抗.结论:二氮嗪对过氧化氢造成的培养心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用,其可能通过激活线粒体KATP通道介导.
关键词： 二氮嗪 线粒体ATP敏感性钾通道 心肌细胞 氧化应激损伤 -
线粒体KATP开放剂二氮嗪促进星形胶质细胞摄取谷氨酸
目的:研究线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP)开放剂二氮嗪(diazoxide)对星形胶质细胞摄取谷氨酸(glutamate)的影响.方法:取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养,用液体闪烁计数仪测定[3H]-D,L-谷氨酸的摄入量判断细胞的谷氨酸摄取功能.结果:二氮嗪呈浓度依赖性地促进星形胶质细胞摄取谷氨酸,且能抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)对星形胶质细胞摄取谷氨酸的损伤作用;浓度在100μmol·L-1以上时,二氮嗪可完全逆转MPP+对星形胶质细胞摄取谷氨酸的抑制作用;二氮嗪的上述作用可被选择性mito KATP 阻断剂5-羟基癸酸 (5-hydroxydecanoate,5-HD)拮抗.结论:二氮嗪通过开放mitoKATP增强星形胶质细胞谷氨酸转运体(glutamate transporters, GluTs)的功能.
关键词： 线粒体ATP敏感性钾通道 二氮嗪 星形胶质细胞 谷氨酸转运体 -
RISK途径在二氮嗪后处理离体大鼠心肌中的保护作用
目的：探讨特异性线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪(DZ)后处理能否激活再灌注损伤挽救激酶(RISK)信号通路减轻离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤( IRI)。方法采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血/再灌注模型,将SD大鼠随机分为正常组( NOR)、对照组( CON)、二氮嗪后处理组( DZ)、LY拮抗二氮嗪组( DZ+ LY),每组8例。对比观察：①平衡末、再灌注末各组不同时点心功能的变化；于再灌注末取心肌组织并分离、提取蛋白,用Western blot分析蛋白激酶B (PKB/Akt),P70S6激酶(P70S6K),内皮型一氧化氮合酶(eNOS),细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平的表达。结果①心功能指标的变化：DZ组再灌注末心率(HR)、冠脉流量(CF)、左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压( LVEDP )、左心室内压上升大速率(+ dp/dtmax )、左心室内压下降大速率(-dp/dtmax )优于CON组、DZ+LY组(P<0.01),但差于NOR组(P<0.01)；平衡末心脏功能指标差异无统计学意义( P>0.05)。于再灌注末DZ组Akt、P70S6K、eNOS磷酸化水平的表达明显高于NOR组、CON组、DZ+LY组(P<0.01),各组ERK1/2磷酸化水平的表达差异无统计学意义( P>0.05)。结论二氮嗪后处理能够通过激活RISK信号通路减轻离体大鼠心脏IRI。
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尼可地尔后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂尼可地尔后处理在减轻大鼠在体肺缺血再灌注损伤(LIRI)的作用及其可能的机制.方法 建立大鼠在体LIRI模型,将50只SD大鼠随机均分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、尼可地尔(Nicorandil)后处理组(Nic组)及尼可地尔+5-羟基葵酸(5-HD)后处理组(Nic+5-HD组).检测各组肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、湿/干比值(W/D);原位缺口末端标记(TUNEL)测定肺组织细胞的凋亡指数(AI);免疫组化染色法检测肺组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的表达;光镜及电镜观察肺组织的病理形态学变化.结果 与Sham组比较,I/R组和Nic+5-HD组肺组织MDA含量明显增加、SOD活性显著降低、W/D明显升高、AI明显增大、Caspase-3的表达明显增加(P<0.05);与I/R组和Nic+5-HD组比较IPO组和Nic组肺组织MDA含量明显减少、SOD活性显著增高、W/D明显降低、AI明显减小、Caspase-3的表达明显降低(P<0.05);I/R组各指标与Nic+5-HD组、IPO组各指标与Nic组比较差异无统计学意义.结论 尼可地尔后处理可以通过模拟缺血后处理减轻LIRI,其肺保护的机制可能涉及mitoKATP开放,使MDA含量减少、SOD活性增高、下调Caspase-3的表达有关.
关键词： 肺损伤 缺血后处理 线粒体ATP敏感性钾通道 尼可地尔 -
二氮嗪对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元超微结构及自由基的影响
目的 观察线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元超微结构及自由基的影响,探讨mitoK
开放剂对癫痫发作后神经元的保护机制.方法 随机将成年雄性Wistar大鼠80只,分为对照组、癫痫组(PILO组)、DZ组(DZ组)、DZ+5-羟基癸酸(5-HD)组(DZ+5-HD组).后两组用氯化锂-匹鲁卡品制作癫痫持续状态模型之前,DZ组用DZ 5 mg/kg,DZ+5-HD组先用5-HD8 mg/kg,再用DZ 5 mg/kg,皆腹腔内注射.观察各组大鼠行为学变化,分别在致痫后4、24、48 h断头取脑,分离海马,电镜观察海马神经元的超微结构,检测海马中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力.结果 与对照组比较,PILO组与DZ+5-HD组可见神经元数目明显减少,细胞肿胀,细胞器减少,胞核内染色质凝聚,线粒体肿胀,嵴缺失,重者线粒体明显空泡化,以癫痫发作后48 h显著:DZ组大鼠癫痫发作的潜伏期延长,神经元损伤明显减轻,癫痫发作急性期的死亡率降低,DZ能明显降低大鼠癫痫发作后海马中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px的活力,其作用能被5-HD阻断.结论 DZ可能通过降低大鼠癫痫发作后自由基的水平,提高抗氧化系统的反应性,减轻氧化应激损伤,从而减轻神经元的损伤,起到神经保护作用. -
二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究
目的 观察线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元线粒体凋亡通路相关凋亡因子的影响,探讨DZ对癫痫大鼠神经保护作用的机制.方法 采用腹腔注射的方法,建立氯化锂-匹鲁卡品( PILO)诱导的大鼠癫痫持续状态(SE)模型.在检测大鼠海马凋亡相关蛋白水平变化时分为对照组,SE后24h、72 h、5d组；在检测DZ对海马神经元保护作用时分为对照组、PILO致痫72 h组(PILO组)、DZ预处理组(PILO+ DZ组)、DZ +5-羟基癸酸(5-HD)预处理组(PILO+ DZ+ 5-HD组).SE后分别在相应时间点灌注取脑,采用TUNEL法检测细胞的凋亡；采用Western blot法检测大鼠海马Bcl-2、Bax、活性半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3( Caspase-3)蛋白的水平及细胞色素C(cytC)由线粒体到胞浆的释放.结果 与正常对照组比较,SE组大鼠在SE后备相应时间点TUNEL染色阳性细胞明显增加(P＜0.05),海马Bcl-2蛋白、线粒体中的细胞色素C(mito-cytC)的表达显著降低(P＜0.05),海马Bax、活性Caspase-3蛋白及胞浆中的细胞色素C(cyto-cytC)的表达明显增高(P＜0.05).与PILO组及PILO+ DZ+ 5-HD组比较,PILO+ DZ组降低的海马Bcl-2蛋白水平显著升高(P＜0.05),而升高的海马Bax、活性Caspase-3蛋白的水平明显降低(P＜0.05),cytC由线粒体到胞浆的释放减少(P＜0.05),TUNEL染色阳性细胞明显减少(P＜0.05).DZ的保护作用能被5-HD阻断.结论 DZ可通过上调Bcl-2/Bax水平,减少cytC的释放,抑制Caspase-3的激活,从而通过线粒体凋亡通路抑制氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠SE后海马神经元的凋亡,对癫痫发作所致的脑损伤具有神经保护作用,为癫痫的神经保护治疗提供新的治疗靶点.
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Mito-KATP对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制
目的 探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放影响缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡的作用机制.方法 培养大鼠心肌微血管内皮细胞,随机分为四组:对照组(N组)、模型组(H/R组)、开放剂组(DZ组)、阻断剂组(5-HD组).DZ组加入100 μmol/L二氮嗪预处理2h,5-HD组在加入100μmol/L二氮嗪前,先用100 μmol/L 5-羟葵酸预处理2h,然后上述两组和H/R组同样进行缺氧2h复氧2h.Hoechst染色方法观察凋亡细胞形态,Annexin V-FITC/PI双标记法测定各组细胞凋亡率、RT-PCR法检测各组NF-κB、FKN和p53 mRNA转录水平.结果 与N组比较,H/R组可见大量细胞坏死、脱落,细胞凋亡率升高(P＜0.01),NF-κB、FKN和p53 mRNA表达上调(P＜0.01)；与H/R组比较,DZ组可见部分细胞坏死脱落,细胞凋亡率降低(P＜0.01),NF-κB、FKN和p53 mRNA表达下调(P＜0.01)；5-HD组与H/R组比较无显著差异.结论 mito-KATP开放可抑制缺氧复氧所致MMECs凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、FKN及p53 mRNA表达有关.
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硫化氢延迟预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞的保护作用
目的：观察硫化氢(H2S)延迟预处理对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤后细胞的保护作用及可能机制。方法：雄性SD大鼠32只，分为4组：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、H2S延迟预处理组(H2S组)和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)阻滞剂5-HD+H2S组(5-HD组)，每组8只。除假手术组，余3组通过结扎在体心脏冠状动脉前降支30 min，松开复灌120 min进行IR模型制备。再灌注末电镜下观察各组大鼠心肌细胞超微结构的变化，采用免疫印迹法检测各组心肌细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：4组间Bcl-2和Bax蛋白的表达，差异有统计学意义(F=31.937和11.681，P＜0.001)。与IR组相比，H2S组Bcl-2蛋白上调和Bax蛋白下调(P均＜0.05)，5-HD组差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论：H2S延迟预处理具有心肌保护作用，其机制可能与调节细胞凋亡及激活mitoKATP有关。
关键词： 硫化氢 缺血再灌注 凋亡 线粒体ATP敏感性钾通道 大鼠
