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中药饮片耐热菌微生物类群的分析
探索污染中药饮片的耐热菌微生物组成和多样性特征.以9个品种中药饮片为研究对象,采用MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术和Illumina Miseq的16S rRNA宏基因组高通量测序技术对样品的耐热菌微生物群落进行分析.茎类饮片(鸡血藤、通草、小通草)的污染菌检出率高,种类多;而果实类饮片(南五味子)检出率低,污染菌种类少;根类饮片中,广山药和熟地黄的污染菌检出率和种类偏低.耐热菌微生物类群以芽胞杆菌科和类芽孢杆菌科为主;其中检出率高的菌属为芽孢杆菌属,还包括短小芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、土壤芽胞杆菌属,高通量测序注释的其他菌属为肠杆菌属、短波单胞菌属、明串珠菌属、甲基杆菌属、脱氯单胞菌、泛菌属、克雷伯菌属和欧文氏菌属等.中药饮片的耐热菌微生物群落潜在危害因子,应完善其微生物限度标准,严格控制产品中的致病菌,加强中药饮片在生产和流通环节的监督管理.
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炭疽芽孢杆菌基因分型的研究进展
炭疽芽孢杆菌按Bergey分类属于杆菌科需氧芽孢杆菌属(Cohn 1872)群Ⅰ中菌体在0.9?m以上的一簇.其中包括炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、腊样芽孢杆菌(B.cereus)、蕈状芽孢杆菌(B.mycoides)、假真菌样芽孢杆菌(B.pseudomycoides)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)和B.weihenstephanensis菌.
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8株杆菌的卫生安全性研究
利用细菌的生物学特性防治化学物质污染环境是当今世界的热门技术之一.早在80年代初期,美国科学家就成功地培养出能清除土壤污染的细菌,开创了利用细菌净化环境的先例[1].80年代中期,我国科技工作者利用细菌治理电镀工业废水污染环境取得成功[2],在利用细菌防治重金属污染环境方面有重要意义.国家"九五"科技攻关期间,中国科学院成都生物研究所在SBRK工艺基础上用新筛选的8株杆菌(产碱杆菌属1株,假单胞菌属1株,芽孢杆菌属1株,克雷伯氏菌属1株,邻单胞菌属4株)以及生物载体,降解石化废水中的难降解的磷氮等有机物,具有重要的环境保护意义.但是,这些治理环境污染的人工和天然的细菌以工业生产的方式大量地进入环境以后,是否会给环境带来新的污染,是人们十分关心的问题,也是该项微生物技术能否广泛运用的关键问题之一.迄今,有关环境微生物技术运用的工程菌的卫生安全性评价的有关法规、程序、方法及相关研究资料尚少[3～4].为了给该项微生物技术的推广应用提供依据,本文对8株杆菌以及8株杆菌处理过的工艺出水的毒理学进行了研究.现将研究方法及结果报告如下.
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泰泽病原体研究现状
泰泽病原体(Tyzzer's organism或Bacillus piliformis或Clostridium piliformis)是一种带鞭毛、菌毛、芽胞,专营细胞内寄生的革兰阴性杆菌.该菌广泛存在于实验动物、家禽、家畜、宠物及非人灵长类,引起动物的出血坏死性肠炎和粟粒状肝坏死.对人的潜在威胁已经引起了人们的关注.由于不能在无活细胞的人工培养基上生长、繁殖和自溶性,导致目前对该菌的生物学特性、致病机理、遗传学、诊断和检测方法以及泰泽病的预防始终没有突破性进展.本文就泰泽病原体的生物学特性、感染和传播、致病机理和病理变化等方面作一个简要的综述.
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北衙金矿矿石内部可培养细菌多样性初步研究
目的 对北衙金矿矿石样品内部的可培养细菌进行分离并对其多样性进行研究.方法 采集云南北衙金矿矿石样品,采用固体肉汤培养基、卵黄培养基及厌氧琼脂培养基分离矿石内部的可培养细菌,并利用16S rRNA基因序列构建系统发育树,初步评估细菌多样性.结果 北衙金矿矿石内部细菌的主要种群包括厚壁菌门和放线菌门的不同菌属,包括芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、考克菌属及节杆菌属的菌株,其中抗逆性较强的优势菌群为放线菌门的细菌.结论 本研究证实北衙金矿矿石内部的确存在大量可培养细菌,并具有种群多样性.
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红树林细菌Bacillus sp.次生代谢产物研究
目的 研究红树林细菌Bacillus sp.发酵液中的化学成分.方法 采用各种色谱方法进行成分分离,综合运用多种波谱学手段确定单体化合物的结构.结果 从一株红树林细菌Bacillus sp.的发酵物中分离得到6个单体化合物和一个混合物,单体化合物分别鉴定为N-oleoyl-threonine(1)、大豆素(2)、尿嘧啶(3)、胸腺嘧啶(4)、腺嘌呤核苷(5)、腺嘌呤脱氧核苷(6),混合物鉴定为环(脯-甘)二肽(7)和1,5-dideoxy-3-C-methyl-arabini-tol(8).结论 化合物1、8为首次从该属菌株中分离得到.
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高产蛋白酶地衣芽孢杆菌株的紫外诱变
目的:紫外诱变提高地衣芽孢杆菌的产蛋白酶能力.方法:紫外线照射法诱变地衣芽孢杆菌,绘制诱变曲线,确定紫外诱变条件.采用福林酚法测定酶活力,经初筛和复筛筛选蛋白酶高产菌株,并对所选育的高产菌株进行遗传稳定性研究.结果:佳紫外线照射时间确定为120s,菌落的总致死率为65.58％;经过初筛和复筛,选育出蛋白酶高产菌株B-14,蛋白酶活力为2 922.90U/ml,比出发菌株B提高了23.81％;B-14菌株经5次传代,其蛋白酶活力在2 754.27～3 203.95U/ml之间,变化范围不超过10％.结论:该实验成功选育出遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株B-14.
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细菌表面展示纳米级白蛋白的实验研究
目的 建立细菌表面展示纳米级白蛋白的体系.方法 将球形芽孢杆菌表面层蛋白编码基因sllB的3 ′端截短后与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)编码基因融合,5′端与链霉抗生物素蛋白(Strep-tagI)的编码基因连接,置于大肠杆菌中表达.用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法验证蛋白表达结果,并在透射电镜下测量表达产物的粒径.结果 将合成的Strep-tagI/sllB1-2706 bp/Gly4Ser/HSA融合基因片段测序验证后插入原核表达质粒pET28a(+).转化宿主菌E.coli BL21诱导表达后,全蛋白和不溶性蛋白样品经SDS-PAGE鉴定,在相对分子质量约166 000处出现特异性条带,蛋白质印迹法表明重组蛋白可与抗His-Tag单克隆抗体结合.透射电镜下可见BL21表面有大量品格结构,平均粒径142.3 nm.结论 将球形芽孢杆菌表面层蛋白编码基因与HSA编码基因融合后进行原核表达获得了纳米级白蛋白,为采用基因工程方法生产纳米药物和疫苗提供了一条新途径.
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凝结芽孢杆菌TBC-169菌株治疗抗原诱导大鼠结肠炎的实验研究
背景:开发新的溃疡性结肠炎(UC)治疗药物是当前研究的热点.目的:探讨凝结芽孢杆菌(B.coagulans)TBC-169菌株对抗原诱导的大鼠结肠炎的疗效和作用机制.方法:以牛结肠黏膜蛋白多次免疫建立大鼠结肠炎模型,予B.coagulans TBC-169菌株制剂和美沙拉秦单独或联合治疗.21 d后处死大鼠,评定结肠湿重指数、溃疡指数和组织学评分,测定肠系膜淋巴细胞转化率和血清白细胞介素(IL)-8,肿瘤坏死因子(TNF)-a、IgG水平.结果:美沙拉秦组、大剂量B.coagulans组和联合治疗组结肠湿重指数较模型对照组显著降低(P＜0.05).各治疗组结肠溃疡指数和结肠中上段组织学评分较模型对照组显著降低,T细胞转化率显著升高,血清IL-8水平显著降低(P＜0.05).与模型对照组相比,大剂量B.coagulans组和联合治疗组血清TNF-α水平显著降低(P＜0.01),小剂量B.coagulans组血清lgG水平显著降低(P＜0.01),单用美沙拉秦则无类似作用.结论:B.coagulans TBC-169菌株可明显改善模型大鼠的结肠黏膜损伤,其机制与调控炎症因子表达、恢复机体免疫功能等有关.
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难辨梭状芽孢杆菌与炎症性肠病关系的初步研究
目的 通过对炎症性肠病(IBD)患者粪便中难辨梭状芽孢杆菌(Cd)的检测,了解IBD患者中该菌的感染情况及其与IBD的关系.方法 收集2009年12月至2011年1月上海交通大学医学院附属瑞金医院消化科确诊的IBD患者130例,包括溃疡性结肠炎(UC)患者60例及克罗恩病(CD)患者70例.同时收集肠易激综合征(IBS)患者及无肠道疾患的健康人群各60例为对照.通过聚合酶链反应( PCR)和Cd毒素快速测试试剂盒(CDTK)方法对粪便样本中毒素A、毒素B基因进行检测,采用SPSS软件进行统计分析.结果 纳入研究的130例IBD患者中,Cd感染者16例(12.3％),其中UC 10例(16.7％),CD 6例(8.6％)；对照组中未发现Cd感染者(x2=15.779,P=0.000).处于活动期的IBD患者Cd感染率显著高于非活动期患者(x2=10.092,P=0.001).结肠型CD患者的感染率为4/14,显著高于其他类型的CD患者(x2=13.125,P=0.001).轻度UC患者Cd感染率为4.5％、中度为14.3％、重度为6/17(x2=6.667,P=0.037)；轻度CD患者的Cd感染率为0％、中度为4.2％、重度为5/16,感染率随疾病严重程度的上升而增高(x2=13.907,P=0.000).使用广谱抗生素的患者与未使用者其Cd感染率差异无统计学意义(x2=1.414,p=0.378);免疫抑制剂与广谱抗生素同时使用者和单用广谱抗生素者Cd感染率差异亦无统计学意义(x2=0.330,P=0.962).结论 IBD患者中存在着一定的Cd感染率,尤其是处于疾病活动期的患者,感染率随IBD疾病严重程度的上升而增高.
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一株海洋芽孢杆菌的鉴定及抗菌活性研究
目的:对一株编号为ZJ8112的分离自东海海域海泥样品的细菌进行鉴定和抗菌活性研究.方法:采用传统的分类学方法观察菌株ZJ8112的形态、耐盐度,结合16S rDNA 序列分析在GenBank上进行比对以确立其进化地位.利用稻瘟霉菌(Pyricularia oryzae)P-2b、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、白念珠菌(Candida albicans)和黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)作为抗菌活性指示菌,检验ZJ8112的抗菌活性.结果:枯草芽孢杆菌ZJ8112革兰染色阳性,芽孢中生.其佳生长盐度为10%,属于中等嗜盐菌.通过16S rDNA序列分析发现其与Bacillus subtilis F121112在进化位置上为接近.该菌株的16S rDNA序列已经提交GenBank,接受号为EU100745.综合ZJ8112菌株的培养特性和形态特征,可认为ZJ8112是一株海洋芽孢杆菌.抗菌活性研究的结果表明其具有很强的抗稻瘟霉菌和抗大肠埃希菌活性.结论:ZJ8112为中等嗜盐的海洋细菌,其适盐度为10%.生物学活性研究的结果表明,其发酵液具有很强的抗稻瘟霉活性和抗大肠埃希菌活性,具有潜在的抗生素研究的价值.
关键词： 芽孢杆菌属 16S rDNA序列分析 嗜盐性 抗菌活性 -
芽孢杆菌TF18的鉴定以及系统发育分析
目的 对一株透明质酸酶高产菌株进行鉴定及系统发育分析.方法 收集本公司空气沉降菌分离得到一株产透明质酸酶细菌TF18,对此菌株进行鉴定及系统发育分析.利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,以获得该菌株的16S rDNA基因序列,并进行序列分析及系统发育分析;结合其形态特征、培养特征、生理生化特征,确定其种属.结果 菌株TF18菌体杆状、好氧、产芽孢,应属于芽孢杆菌属,生理生化实验及系统发育分析结果也表明,此菌株属于芽孢杆菌属,但又不同于该属的其他己知菌种,故判定为新种.结论 从自然界筛选得到的透明质酸酶高产菌株Bacillus sp.TF 18为芽孢杆菌属一新种,为开发利用此菌种生产制备透明质酸酶及寡聚透明质酸(o-HA)提供了理论基础.
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利用厌氧菌突破肿瘤放化疗抵抗的研究进展
肿瘤内部乏氧区的存在降低了放化疗的治疗效果,因此成为肿瘤的防线,而厌氧菌凭借其自身的特性成为可能突破这一防线的中坚力量.现综述有关厌氧菌的肿瘤靶向性及其抗瘤作用的研究进展、主要作用机制、与其他手段的联合应用及其在影像学诊断中的应用前景.
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解淀粉芽孢杆菌的流行状况及毒素作用
解淀粉芽孢杆菌污染医院75%酒精消毒液、潮湿损坏的房屋和食品,造成免疫抑制及免疫缺陷等特殊人群感染和引起房屋污染相关性健康综合征.现概述此细菌的流行状况及细菌多种毒素作用机制,以期引起临床重视.
