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血府逐瘀胶囊调控EphB4/EphrinB2促血管适度生长的实验研究
目的 研究血府逐瘀胶囊适度促血管新生的作用及其对EphB4/EphrinB2表达的影响.方法 通过检测血府逐瘀胶囊含药血清对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line 1,HMEC-1)活性、细胞周期、迁移、黏附和体外成血管的影响,明确药物具有适度促血管新生的作用,并运用实时定量PCR、Western blot技术检测药物对EphB4/EphrinB2表达的影响.结果 血府逐瘀含药血清对内皮细胞活性及S期细胞比例均无影响.细胞迁移方面,1.25％含药血清作用24、48、72 h均显著增加细胞迁移能力;但2.50％含药血清在初24 h抑制细胞迁移,随后显著促进迁移,与5.00％含药血清的影响趋势正好相反.细胞黏附方面,1.25％含药血清作用72 h时显著减少黏附细胞数;2.50％药物血清在前两个时间段增加细胞黏附数,随后在72 h抑制细胞黏附;5％含药血清在24 h表现出抑制作用,而在48 h转为促进,随后作用消失.成血管方面,仅2.50％含药血清表现出促进作用,而5.00％含药血清作用48 h和72h均出现抑制现象.2.50％含药血清组的实时定量PCR和Western blot结果显示,药物作用12h上调EphB4的表达,作用24 h下调EphB4表达的同时上调EphrinB2的表达.结论 仅2.50％含药血清作用48 h对HMEC-1的迁移、黏附和体外成血管均有促进作用,为佳促血管生长条件,提示血府逐瘀胶囊促血管新生作用具有一定的条件限制,而药物调控EphB4/EphrinB2的表达是其重要因素之一.
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慢性髓系白血病疾病进展相关基因的生物信息学分析与初步实验验证
本研究探讨慢性髓系白血病(CML)的疾病进展机制,为该疾病临床转归的评估及治疗选择提供新的分子标志物.从NCBI数据库GEO下载一组与CML疾病进展相关的基因芯片数据,利用生物信息学工具分析并得到与加速期(AP)和急变期(BC)相关的基因集,将这两组基因集进行信号通路分析和网络图谱分析得到与进展相关的关键基因和信号通路,并应用荧光定量PCR方法对其中的关键基因进行初步实验验证.结果表明,将AP相关基因和BC相关基因交叉比较,得到在AP和BC都有异常表达的9个基因;信号通路分析发现,整合素介导的细胞黏附,黏着斑细胞粘附以及细胞骨架调节在AP和BC始终发生异常;网络构建分析发现,关键节点的基因分别是MLLT4,WDR35和EPHB4.应用荧光定量PCR方法对疾病进展期和慢性期的患者进行比较发现,EPHB4在进展期的表达水平显著高于慢性期.结论:发现了与CML进展相关的9个基因,其中MLLT4,WDR35,EPHB4基因可能是导致CML进展的关键基因.
关键词： 慢性髓系白血病 慢性髓系白血病进展基因 MLLT4 WDR35 EphB4 -
子宫内膜癌组织EphB4和EphrinB2蛋白表达临床意义的研究
目的:研究EphB4和EphrinB2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其意义.方法:用免疫组织化学SP法检测71例子宫内膜癌组织中EphB4和EphrinB2蛋白表达水平及其与临床病理因素的关系.结果:71例子宫内膜癌组织中,EphB4和EphrinB2蛋白的阳性表达率分别为69.3%和64.9%;EphB4蛋白的阳性表达与年龄、临床分期、淋巴结转移和组织学分级显著相关,P＜0.05.EphrinB2蛋白的阳性表达与淋巴结转移、组织学分级显著相关,P＜0.05.EphB4和EphrinB2蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达显著相关,P＜0.05.结论:EphB4和EphrinB2蛋白可能与子宫内膜癌的发生、发展有关,它们的联合检测有助于客观评估子宫内膜癌的生物学行为.
关键词： 子宫内膜肿瘤/病理学 膜附着型配体B2 受体 EphB4 免疫组织化学 -
鼻咽癌中EphB4、EphrinB2的表达及临床意义
目的 研究促红细胞生成素诱导的肝细胞受体EphB4及其配体EphrinB2在鼻咽癌组织中的表达情况及其与各临床病理因素之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测136例鼻咽癌组织标本及20例鼻咽黏膜慢性炎症组织中EphB4和EphrinB2的表达情况.结果 136例鼻咽癌组织中EphB4、EphrinB2的阳性表达率分别为65.4％和63.2％,二者的阳性表达均明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织,EphB4和EphrinB2蛋白的阳性表达分别与淋巴结转移、颅神经麻痹、颅底侵犯、临床分期相关,而与性别、年龄、病理类型、茎突前、后间隙侵犯均无显著相关性;EphB4与EphrinB2蛋白的表达显著相关.结论 EphB4、EphrinB2可能在鼻咽癌的浸润、转移和血管生成中起着重要作用,它们有望成为判断鼻咽癌发生、发展、预后及指导治疗的新的生物学指标.
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浅谈EphrinB2/ephB4在骨重建中的作用
在颌骨骨重建研究中，破骨细胞骨与成骨细胞之间的相互作用中常伴有多种信号传导机制，近，越来越多的学者发现Eph-Ephrin双向信号传导系统在骨重建中发挥重要作用。破骨细胞上存在EphrinB2配体，成骨细胞前体上存在EphB4受体，以细胞直接接触的方式，在成骨细胞内产生正向信号同时在破骨细胞内产生反向信号，从而起到抑制骨吸收促进骨形成的作用。本文就EphrinB2/ephB4在骨重建中的作用等研究进展作一综述。
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EphB4、HIF-1α在胃癌中的表达及其生物学意义
目的 研究EphB4受体和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白在胃癌组织中的表达,并探讨其生物学意义及相互关系.方法 应用免疫组化法检测74例胃癌组织(胃癌组)和13例正常胃黏膜组织(对照组)中EphB4、HIF-1α的表达,并分析其表达与胃癌临床病理因素之间的关系.结果 胃癌组中EphB4和HIF-1α的高表达率分别为62.16%(46/74)和52.70%(39/74),在对照组中,EphB4和HIF-1α的高表达率分别为15.38%(2/13)和0%(0/13).胃癌组织中EphB4和HIF-1α的表达显著高于正常胃黏膜组织(P＜0.01).EphB4、HIF-1α的表达与胃癌的组织学分级及临床病理分期关系密切(P＜0.05),而与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移无关(P＞0.05).与HIF-1α不同,EphB4的表达还与肿瘤浸润深度有关(P＜0.05).此外,EphB4与HIF-1α的表达成显著正相关(r=0.209 1,P＜0.01).结论 在胃癌中EphB4、HIF-1α均高表达,其表达程度与胃癌的恶性程度有关,而且EphB4表达与HIF-1α的表达呈正相关.过表达的EphB4、HIF-1α在胃癌恶性进展中发挥重要作用.
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EphB4受体及其配体EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的:探讨红细胞生成素诱导的肝细胞受体EphB4及其配体EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及意义.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测33例子宫内膜癌和10例正常子宫内膜组织中EphB4、EphrinB2 mRNA的表达率及相对含量,并分析二者与子宫内膜癌临床病理特征的关系.结果:(1)EphB4 mRNA在子宫内膜癌组的表达率和相对含量均高于正常子宫内膜组(P<0.05,P<0.05).EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组的表达率和相对含量也均高于正常子宫内膜组(P<0.05,P<0.01).(2)EphB4、EphrinB2mRNA的表达与子宫内膜癌手术病理分期、组织学分级有密切关系(P<0.05).二者表达与子宫内膜癌不同组织学类型,肌层浸润程度以及有无淋巴结转移无关(P0.05).结论:EphB4和EphrinB2的异常表达与子宫内膜癌发生、进展以及恶性程度有关,二者表达趋势呈现一致性,检测EphB4/EphrinB2有助于判断子宫内膜癌预后.
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EphB4反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的作用
目的 观察EphB4反义寡核苷酸(ASODN)对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,探讨EphB4的生物学功能.方法 人工合成EphB4 ASODN,脂质体转染U87细胞.分别应用RT-PCR以及免疫组织化学染色方法检测EphB4 mRNA和蛋白质,评估阻抑效应;并应用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡;采用Boyden侵袭小室法检测细胞迁移和侵袭力.结果 (1)由脂质体转染的EphB4ASODN对U87细胞EphB4 mRNA和蛋白质表达具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的时间-剂量依赖性,600nmol/LASODN作用于U87细胞72 h,EphB4mRNA相对表达量为0.30±0.05,EphB4蛋白表达水平亦明显减弱.(2)各实验组EphB4 ASODN对U87细胞增殖均具有抑制作用,呈明显时间-剂量依赖性;以600nmol/LASODN作用72h,U87细胞生长抑制率达到68.70%,而对照组则无明显抑制作用.(3)EphB4 ASODN诱导U87细胞凋亡呈剂量依赖性.(4)EphB4 ASODN组U87细胞的跨膜数为17.82±2.35,与空白对照组及NSODN组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 EphB4在人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,可能成为脑胶质瘤基因治疗的一个新靶点.
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应用组织芯片技术研究人类肺癌中EphB4、HIF-1α和IGF-Ⅱ表达的生物学意义
目的 应用组织芯片技术探讨人类肺癌中EphB4、HIF-1α和IGF-Ⅱ的表达情况以及三者表达的生物学意义.方法 构建一个包含54例肺癌和10例正常肺组织的组织芯片蜡块,应用免疫组化SP法检测其EphB4、 HIF-1α和IGF-Ⅱ蛋白的表达情况.结果 病例组中EphB4、HIF-1α和IGF-Ⅱ蛋白的阳性率分别是44.4%、46.3%和42.6%, 显著高于正常对照组(P<0.05);这三种蛋白的表达与肿瘤的大体类型、分化程度和TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、有无淋巴结转移无关(P>0.05). 三种蛋白的表达彼此之间存在显著正相关关系(P<0.01).结论 EphB4、HIF-1α和IGF-Ⅱ蛋白的表达可能与肿瘤的发生和恶性行为有关,三者之间存在着相互作用.
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EphB4/EphrinB2对血管生成的影响及中医药作用研究进展
血管相关性疾病已经成为危害人类健康的重大疾病之一,促血管新生和抗血管新生机制的研究也已成为中医药研究领域的热点问题.EphB4和EphrinB2均属于膜结合型蛋白,相对于其他酪氨酸激酶受体,EphB4和EphrinB2在自身活化和信号转导方面表现出独特的方式,在信号转导过程中二者均可被对方激活,产生"正向信号"和"反向信号".已有研究发现,EphB4/EphrinB2独特的双向信号在血管生成过程中起着重要的双向调节作用,并且有可能成为中医药影响血管生长的新的研究方向.
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血管生成因子对先天性食管闭锁大鼠肺发育的影响
目的 研究血管生成因子Efnb2和Ephb4在先天性食管闭锁并食管气管瘘(esophageal atresia and tracheoesophageal fistula,EA-TEF)大鼠肺组织中的表达情况,探讨血管调控因子Efnb2及其受体Ephb4对EA-TEF大鼠肺组织发育的影响.方法 24只雌性Wistar大鼠随机分成实验组(EA-TEF组)和对照组(CON组),每组各12只,妊娠第7～9天实验组给予阿霉素1.75 mg/kg腹腔灌注建立EA-TEF大鼠模型,分别在胚胎第15天(El5)、18天(El8)和21天(E21)剖宫产取胎鼠肺组织,采用Q-PCR和免疫组织化学检测Efnb2、Ephb4的表达情况.结果 (1)两组胎鼠肺发育过程中Efnb2 mRNA与Ephb4的变化趋势基本一致,小管期(El8)含量高,囊泡期(E21)降低并恢复至假腺体期(El5)水平.胎肺小管期Efnb2mRNA表达水平EA-TEF组(50.65±12.65)明显高于对照组(23.63±11.31) (P ＜0.05),假腺体期和囊泡期两组比较无统计学意义;假腺体期Ephb4 mRNA表达水平EA-TEF组(4.32±2.88)明显高于对照组(1.01±0.19) (P ＜0.05),小管期和囊泡期两组无统计学意义.(2)胎肺不同发育时期,Efnb2、Ephb4蛋白在血管上皮、肺泡及支气管上皮表面均有表达,分布模式无统计学意义.EA-TEF组小管期Efnb2(162.70±10.04)和Ephb4(152.20±12.32)蛋白表达量增多,而囊泡期回复至正常水平.结论 血管生成因子Efnb2及其受体Ephb4可调控胎肺组织的分支发育,阿霉素诱导的EA-TEF模型鼠胎肺发育小管期两者同时升高可能是对肺发育不良的代偿机制.
关键词： 食管闭锁并食管气管瘘 胎肺 大鼠 EphB4 Efnb2 -
缺氧缺血致脑白质损伤的新生大鼠脑中ephrinB2和EphB4表达的研究
目的 评估缺氧缺血诱导的脑白质损伤大鼠模型脑组织中的微血管密度和ephrinB2及其受体EphB4表达的水平.方法 将新生3日龄Wistar大鼠60只随机分为实验组和假手术组各30只.实验组行右侧颈总动脉永久性结扎后给予氮氧混合气体(94％ N2+6％ O2)4 h;假手术组只分离右侧颈总动脉但不结扎并常规给氧.4d后分别测定第7日龄大鼠脑组织中微血管密度以及ephrinB2和EphB4表达的水平.结果 实验组大鼠脑组织中的微血管密度、ephrinB2和EphB4的水平高于假手术组;假手术组大鼠脑组织中表达的ephrinB2和EphB4的百分比相近,实验组大鼠脑组织中ephrinB2的表达高于EphB4.结论 缺氧缺血诱导的脑白质损伤后有新生血管生成,并且动脉多于静脉.
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视网膜母细胞瘤中EphB4和EphrinB2的表达及意义
目的 探讨EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学SP法测定10例正常视网膜组织和40例视网膜母细胞瘤标本中EphB4和EphrinB2的表达水平,分析其与性别、临床分期、分化程度和视神经浸润的关系.结果(1)EphB4和EphrinB2蛋白表达的阳性率,在正常视网膜组织中分别为5％和2.5％,40例视网膜母细胞瘤标本中分别为77.5％和67.5％.EphB4和EphrinB2在视网膜母细胞瘤组织中的阳性率与显著高于正常视网膜组织中的阳性率(P＜0.05).(2)EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤的阳性表达率与肿瘤组织的临床分期、分化程度及视神经浸润显著相关(P＜0.05).(3)EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤组织中的阳性表达显著相关(P＜0.05).结论 EphB4和EphrinB2可能在视网膜母细胞瘤的发生和发展过程中起重要作用,可作为评价视网膜母细胞瘤的浸润及预后的标志物.
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EphB4受体在胰腺癌组织中表达及与肿瘤血管生成的关系
[目的]探讨EphB4受体在胰腺导管腺癌中的表达及与临床病理及血管生成的关系.[方法]采用免疫组化SP法检测27例胰腺导管腺癌和8例正常胰腺组织中EphB4受体的表达,并根据CD34染色结果计数微血管密度(MVD).采用RT-PCR检测5例新鲜胰腺癌标本的EphB4受体mRNA.[结果]EphB4受体主要表达于肿瘤细胞的胞质,呈异质性分布,表达率为66.7%(18/27),正常胰腺组织阴性,两者之间差异有显著性意义(P<0.01);低分化导管细胞癌EphB4受体表达、MVD明显高于中高分化导管细胞癌(P<0.05);TNM分期为III、Ⅳ期胰腺导管细胞癌EphB4受体表达、MVD明显高于Ⅰ、Ⅱ期胰腺导管细胞癌(P<0.05).胰腺导管细胞癌中EphB4受体表达、MVD与肿瘤部位、患者年龄、性别无明显相关性.5例新鲜标本中EphB4受体mRNA均高表达且与MVD成正相关(P<0.05).[结论]胰腺癌细胞的EphB4受体表达与肿瘤血管生成及肿瘤侵袭性有关.
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慢病毒介导的EphrinB2基因转染大鼠骨髓间充质干细胞表达的实验研究
目的 将携带EphrinB2基因慢病毒转染至骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测其过表达水平及细胞形态学变化,并探讨EphB4/EphrinB2是否具有促进大鼠BMSCs体外迁移活性的作用.方法 单纯贴壁法分离大鼠BMSCs,倒置显微镜观察细胞生长形态.携带EphrinB2慢病毒以感染复数3和10感染BMSCs分为低浓度转染组(MOI=3)和高浓度转染组(MOI=10),对照组采用未转染组、阴性转染组,利用qPCR检测EphrinB2基因表达及Western blot检测EphrinB2蛋白水平.观察EphrinB2基因转染后BMSCs形态学变化.15 d后通过免疫荧光检测MAP2表达了解细胞分化.进一步Transwell实验检测细胞迁移能力来了解EphB4/EphrinB2在调节干细胞迁移的作用.结果 培养BMSCs为多角形或棱形呈漩涡状排列生长.EphrinB2-BMSCs经qPCR和Western blot检测证实有外源性EphrinB2表达.EphrinB2基因转染后BMSCs 24 h,BMSCs胞体开始收缩细胞有突起伸出,72 h后可见典型的神经样细胞形态改变.15 d后,BMSCs分化成为MAP2神经元,与阴性转染组相比,低浓度转染组和高浓度转染组MAP2表达率上升(P< 0.05).Transwell实验结果显示:低浓度转染组与高浓度转染组较未转染组及阴性转染组穿膜细胞数量明显增加(P<0.05).结论 慢病毒介导EphrinB2能高效感染BMSCs,并随着时间延长分化成神经样细胞,同时EphB4/EphrinB2在调节BMSCs迁移具有重要作用.
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非小细胞肺癌组织中EphB4的表达及临床意义
目的:探讨EphB4在非小细胞肺癌组织中的表达规律,评价其在非小细胞肺癌发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测34例非小细胞肺癌组织及16例癌旁正常肺组织中EphB4的表达.结果:EphB4在34例非小细胞肺癌中的阳性表达率为41.2%(14/34),在16例癌旁正常肺组织均为阴性,二者比较差异有显著性(P<0.01);EphB4的表达与非小细胞肺癌的组织学分级、临床分期有关联性(P<0.05),与性别、年龄、组织学分型及淋巴结转移无关联性(P>0.05).结论:EphB4可能在非小细胞肺癌的发生、发展中起重要促进作用.
关键词： EphB4 受体蛋白质酪氨酸激酶类 癌 非小细胞肺 免疫组织化学 -
EphrinB2/EphB4在血管生长中的作用及中医药研究展望
近年来,有关ephrin及其Eph受体的作用研究已从神经系统方面逐步向血管生长扩展.已有研究表明ephrinB2/EphB4及其独特的双向信号转导几乎参与血管生长的每个方面,涉及血管发育过程中的动静脉分化、胚胎后血管新生包括内皮细胞增殖、迁移、粘附和分化等过程,且与VEGF、Notch等血管新生调控因子关系密切.另外,实验表明活血化瘀名方血府逐瘀汤显著的促血管新生作用与ephrinB2/EphB4相关,说明中医药促血管新生中ephrinB2/EphB4具有重要作用.本文部分总结了ephrinB2/EDhB4在血管生长中的作用,并提出中医药在这方面的展望.
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RNA干扰介导EphB4基因表达下调对胶质瘤细胞系U251生长的影响
目的:探讨靶向EphB4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对胶质瘤细胞EphB4 mRNA表达及细胞生长的影响.方法:体外化学合成针对人EphB4基因的小干扰RNA并转染恶性胶质瘤U251细胞系后,RT-PCR法检测EphtM mRNA表达的变化,CCK-8检测法观察RNA干扰对肿瘤细胞增殖活性的影响,FCM检测细胞周期变化,划痕实验观察细胞的迁移能力,采用Transwell小室穿膜细胞的数量来反应细胞的侵袭能力.结果:U251细胞转染siRNA-EphB4100 nmol/L后,EphB4 mRNA的表达水平下降了75.0%,细胞增殖抑制表现为剂量依赖性,FCM检测与阴性对照相比,细胞周期不同程度阻滞于亚G1期;并且细胞的迁移能力与对照组比较有所下降,Transwell小室穿膜细胞与对照组比较明显减少.结论:siRNA-EphB4能够明显靶向并抑制U251细胞中EphB4基因的表达,而EphB4基因表达下调可使U251细胞增殖受到影响,细胞周期出现凋亡峰.转染siRNA-EphB4后U251细胞的迁移和侵袭能力受到不同程度的抑制.提示抑制EphB4基因表达有可能成为胶质瘤治疗的新方法.
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EphB4-EphrinB2通路的研究进展及应用
近年来,EphB4-EphrinB2通路引起了各学科的广泛关注.研究表明EphB4-EphrinB2通路在血管分化、重塑和新生中发挥着关键作用,与肿瘤的进展和预后密切相关,在眼科中有可能成为未来抗视网膜病的药物作用靶点,并且维持着骨质平衡和参与调节骨质改建.该文阐述了该通路的基本特征及其在基础研究和应用研究中的新进展.
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骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞共培养时EphB4/ephrinB2表达异常
目的:研究正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226共培养过程中,骨髓瘤细胞对MSC EphB4/ephrinB2表达的影响.方法:应用Transwell培养体系,将正常骨髓MSC分别与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞共培养7、12 d后分别应用实时定量RT-PCR和细胞免疫化学方法检测骨髓MSC的EphB4/ephrinB2mRNA和蛋白表达水平.结果:骨髓MSC与U266、RPMI8226共培养后,与对照组MSC相比,生长和形态未见明显改变,应用实时定量RT-PCR方法检测骨髓MSC EphB4/ephrinB2的mRNA水平较对照组均降低,在共培养7d的时间点上除EphB4在RPMI8226共培养组与对照组差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义(P＜0.05),在12 d上差异无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫化学结果显示共培养组MSC胞膜胞浆EphB4/ephrinB2表达下降.结论:骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226在与正常骨髓MSC共培养后,诱导骨髓MSC EphB4/ephrinB2表达的下调,可能通过MSC成骨-破骨活动的脱耦合,参与骨髓瘤骨病的发生.
