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CREB磷酸化水平在慢性应激模型大鼠中表达研究
目的：探讨慢性应激状态下，以及持续给予盐酸氟西汀后，大鼠海马及前额叶部位环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein，CREB）水平和磷酸化CREB（p-CREB）表达的变化。方法成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只随机分为三组：应激组26只，药物组12只，对照组12只。应激组与药物组大鼠均经过8周慢性应激刺激，药物组在第1周开始给予盐酸氟西汀（10mg/g，I.P.），直到8周末。8周后行糖水偏好实验和旷场实验，根据8周末糖水偏爱率将应激组大鼠分为应激敏感组和应激适应组。应激结束后将四组大鼠断头处死，采用蛋白免疫印记技术检测大鼠海马、额叶部位CREB和p-CREB水平。结果8周末应激敏感组糖水偏爱率低于应激适应组、药物组及对照组（均P<0.05）；应激敏感组的跨格次数、中心格时间和直立次数低于药物组和对照组（均P<0.05），与应激适应组无统计学差异（均P>0.05）。应激敏感组海马及前额叶中p-CREB水平明显低于应激适应组、药物组及对照组（均P<0.05）；四组大鼠海马部位、前额叶CREB表达水平无明显差异。结论海马和额叶部位CREB磷酸化水平可能与应激导致的情绪障碍发生机制相关。
关键词： 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 慢性应激 抑郁症 盐酸氟西汀 -
环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控转化生长因子β1对人根尖牙乳头干细胞分化的作用
目的 观察过表达第二信使环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein,CREB)调控转化生长因子 β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)对人根尖牙乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)分化的作用.方法 通过采用酶消化法培养hSCAPs,实验分成4组:①Control组,即正常矿化诱导液(α-MEM、10%FBS、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml维生素C、10 nmol/L地塞米松);②TGF-β1组,加入正常矿化诱导液后,加入5μg/mL TGF-β1;③TGF-β1+LV-empty组,除正常矿化诱导液外,加入转染空病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/mL;④TGF-β1+ov-CREB组,除正常矿化诱导液外,加入转染过表达CREB病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/mL.矿化培养2周后,通过茜素红染色观察各组矿化结节形成情况,实时荧光定量PCR法检测各组矿化相关基因,Runt相关基因2(runt-related tran-scription factor 2,RUNX2)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)mRNA的表达.结果 TGF-β1作用SCAPs后,与Control组(1.12±0.11)相比,抑制矿化结节的形成(0.67±0.12)(P<0.05);下调矿化基因RUNX2(0.60±0.03)、DSPP(0.43±0.12)、ALP(0.69±0.05)的mRNA表达(P<0.05).过表达CREB后逆转TGF-β1对SCAPs分化的抑制作用,与TGF-β1组相比,促进矿化结节的形成(1.27±0.10)(P<0.01)并上调RUNX2(1.33±0.07)、DSPP(1.32±0.11)和ALP(1.26±0.03)mRNA的表达(P<0.05).结论 过表达转录因子CREB能够逆转TGF-β1对hSCAPs分化的抑制作用,促进其分化.
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cAMP/CREB/BDNF信号通路在沃替西汀抗小鼠抑郁样行为中的作用
目的：研究新型抗抑郁药沃替西汀对环磷酸腺苷/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子（cAMP/CREB/BDNF）信号转导通路的影响。方法将昆明小鼠随机分为对照组和慢性不可预知性温和应激（CUMS）造模组进行造模，采用糖水偏爱试验考察模型是否成功建立。造模结束后将CUMS组小鼠随机分为模型组、氟西汀组和沃替西汀组。采用悬尾试验、强迫游泳试验和旷场试验，考察沃替西汀对抑郁小鼠的抗抑郁作用。采用ELISA试剂盒检测小鼠海马组织中cAMP的含量。采用蛋白免疫印迹法检测小鼠海马组织中磷酸化CREB（pCREB）和BDNF的蛋白表达。结果沃替西汀显著缩短小鼠在悬尾和强迫游泳试验中的不动时间（P<0.01），而对其在旷场试验中的自主活动行为没有影响（P>0.05），表明沃替西汀可改善抑郁小鼠的抑郁样行为；ELISA结果显示沃替西汀能显著增加小鼠海马组织内cAMP的含量（P<0.01）；蛋白免疫印迹结果表明沃替西汀可以促进pCREB和BDNF的蛋白表达（P<0.01）。结论沃替西汀产生抗抑郁作用机制可能与影响cAMP/CREB/BDNF信号转导通路有关。
关键词： 沃替西汀 环磷酸腺苷 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 脑源性神经营养因子 抑郁症 -
丙泊酚或依托咪酯对大鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响
目的 观察丙泊酚或依托咪酯对出生28 d大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic AMP response element binding protein,CREB)表达的影响.方法 选取雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、丙泊酚组和依托咪酯组,每组20只.丙泊酚组腹腔注射丙泊酚总量为200 mg/kg,依托咪酯组腹腔注射依托咪酯总量为60mg/kg,对照组不注射任何药物.血气分析仪检测大鼠动脉血呼吸和代谢指标的变化,免疫组织化学染色法检测大鼠海马组织中GFAP的表达,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马组织中PKA和CREB mRNA的表达.结果 各组大鼠动脉血pH值、氧分压、二氧化碳分压、HCO-3、BE、氧饱和度之间比较差异无统计学意义(P>0.05);丙泊酚组与依托咪酯组GFAP的平均积分光密度值均高于对照组(P<0.05),而丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,丙泊酚组与依托咪酯组PKA和CREB mRNA的表达均降低(P<0.05),丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 丙泊酚或依托咪酯可能通过抑制PKA-CREB信号通路而损害大鼠海马神经元,使星形胶质细胞反应性增生、GFAP表达增加.
关键词： 丙泊酚 依托咪酯 胶质纤维酸性蛋白 蛋白激酶A 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 -
外源性硫化氢改善癫痫大鼠脑认知功能障碍
目的 探讨外源性硫化氢对癫痫( epilepsy,EP)所致大鼠脑认知功能障碍的保护作用及机制.方法 利用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射复制雄性SD大鼠96只,6周龄,体质量180 ～220 g.癫痫模型,大鼠分为正常对照组(NC组)、癫痫模型组(EP组)、癫痫+硫氢化钠组(NaHS组)；采用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力；实时荧光定量PCR检测海马中的胱硫醚-β-合酶(CBS) mRNA和CREB mRNA表达变化.结果 EP组的空间辨别学习记忆能力与NC组比较明显减退:Morris水迷宫定位航行实验中逃避潜伏期明显延长(P＜0.01),第3象限探索有效时间显著缩短(P＜0.05)、第3象限游泳距离占总距离的百分比以及穿越平台次数明显减少(P ＜0.01)；NaHs可提高癫痫大鼠的学习记忆能力,与EP组比较,空间学习记忆能力各项检测指标均有显著差异(P＜0.05,P＜0.01).7、30 d时EP组大鼠海马CBSmRNA表达水平明显低于NC组(P＜0.05),而NaHS组CBS mRNA表达水平明显高于EP组(P＜0.05);EP组海马CREBmRNA表达在7、30d时均明显低于NC组(P＜0.05),而NaHS组CREB mRNA在24h、7、30d时表达显著高于EP组(P＜0.05),与NC组相比,7、30 d时均无差异(P＞0.05).结论 外源性H2S可能通过上调癫痫大鼠其海马CBS、CREBmRNA表达来改善癫痫大鼠的学习记忆能力.
关键词： 硫化氢 癫痫 学习记忆 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 -
脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用
转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(Cyclic AMP response element-binding protein,CREB)是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)诱导基因表达的重要调节因子.我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用,为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化,本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化.结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser133磷酸化CREB表达增加,在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强 (P＜0.01), BDNF干预组1 h后Ser133磷酸化CREB表达至高峰,以后持续表达维持6 h以上,维持时间较单纯缺氧组明显延长;在缺氧0～3 h, BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致;随着缺氧时间的延长,单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少,以第5～6 h明显.结果表明,BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化.
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绞股蓝总苷对血管性痴呆小鼠海马组织神经元损伤及pCREB表达的影响
目的 探讨绞股蓝总苷对血管性痴呆模型小鼠海马组织神经元损伤和pCREB表达的影响.方法 反复夹闭两侧颈总动脉致缺血再灌注制作小鼠血管性痴呆模型.将雄性C57BL/6J小鼠80只随机分假手术(Sham)组、血管性痴呆模型(VD)组、绞股蓝总苷低、中、高剂量(100、200、400mg/kg)处理组.苏木精伊红染色法示小鼠海马组织CA1区神经元损伤的变化情况;Real-time PCR检测海马组织pCREBmRNA的表达量.结果 绞股蓝总苷干预可显著减轻VD小鼠的海马神经元损伤;VD模型组海马pCREBmRNA的表达明显低于假手术组(P＜0.05);绞股蓝总苷各剂量处理组海马pCREB mRNA的表达水平明显高于VD模型组(P＜0.05).结论 血管性痴呆小鼠海马神经元损伤可被绞股蓝总苷减轻,上调海马神经元pCREB的表达.
关键词： 绞股蓝总苷 血管性痴呆 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 海马 小鼠 -
热应激对小鼠海马CA1区神经元保护作用的机制
本文探讨热应激预处理对脑缺血小鼠海马神经元保护作用的可能机制.以72只6月龄昆明小鼠为研究对象,热应激预处理小鼠,随后夹闭双侧颈总动脉7 min后再通制成脑缺血/再灌注损伤模型.根据不同的处理方法将动物随机分为四组:(1)正常对照组,(2)热应激预处理后缺血再灌注组(HS/IR),(3)缺血再灌注组(IR),(4)热应激组(HS).将HS组、IR组和HS/IR组又分为1 d、4 d、14 d 3个亚组.用免疫组织化学及图像分析方法观察热应激对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)以及降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响.结果表明,与正常对照组比较,HS、HS/IR、IR组小鼠海马CREB表达明显增多(P＜0.05).热应激可诱导CGRP的分泌和在脑内的重分布,和其他组比较,CGRP在4 dHS/IR组增多的为明显(P＜0.01).热应激后,光镜下可见CGRP免疫阳性产物出现在海马CA1区的曲张纤维和神经元的核周质.以上实验结果提示,脑缺血状态下热应激的保护作用可能是通过激活信号蛋白CREB进而促进内源性保护物质CGRP释放而实现.
关键词： 热应激 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 降钙素基因相关肽 缺血/再灌注 海马
