首页 > 文献资料
-
FOXO1质粒稳定转染人骨肉瘤细胞的筛选及意义
目的 建立稳定表达FOXO1-GFP的人骨肉瘤U2OS细胞系,并验证U2OS-FOXO1-GFP细胞模型对氧化应激损伤的指示作用.方法 将pcDNA3-GFP-FOXO1质粒转染到U2OS细胞中,利用G418和FCM筛选稳定细胞系.40mmol/LAAPH处理U2OS-FOXO1-GFP细胞4h,CCK-8检测细胞活力,荧光显微镜观察FOXO1-GFP的分布情况.结果 成功获得U2OS-FOXO1-GFP稳转细胞系.经G418和FCM筛选后,FOXO1-GFP阳性细胞占细胞总数的92％.CCK-8结果显示,AAPH处理后,U2OS-FOXO1-GFP细胞存活率下降至0.55 ±0.04明显低于对照组(P＜0.05).荧光显微镜观察发现,正常情况下,FOXO1-GFP位于细胞质;AAPH处理后,FOXO1-GFP易位到细胞核.结论 U2OS-FOXO1-GFP细胞系能很好的指示细胞氧化应激损伤,为筛选抗氧化应激药物提供了一种有利工具.
-
人骨肉瘤细胞系OS-732与血管生成的相关作用
一、材料与方法 1.细胞株和细胞培养：人骨肉瘤细胞株OS-732， 购自北京积水潭医院骨科实验室，常规培养于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中。 2.鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）制备及瘤细胞接种：选取孵育至9 d的胚蛋，参考付生法［1］的方法制备CAM，选择近胚头1 cm处的两条前卵黄静脉间的相对无血管区接种对数生长期OS-732细胞，每只5×106/100 μl,共接种10只。另10只设为空白对照组。于接种第2天至接种第9天在解剖显微镜下逐日观察接种区5 mm范围内血管数目及形态学变化。
-
1,25(OH)2D3及其类似物对人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化调节作用的分子机制
目的:研究维生素D3受体(VDR)及其靶基因p21在1,25(OH)2D3及其类似物调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用.方法:构建VDR反义cDNA的真核表达载体,用Lipofectamine法转染人骨肉瘤细胞系HOS-8603,经G418筛选后获得稳定转染的单克隆细胞株(VDRasl～6),并采用免疫组化方法和瞬时转染报告基因技术分别检测VDRas3细胞内源性VDR蛋白的表达情况和转录激活功能;继而利用VDRas3细胞研究VDR被阻断后细胞增殖以及靶基因p21 mRNA表达的变化.用定量RT-PCR法检测1,25(OH)2D3对p21 mRNA表达的诱导作用;构建p21真核表达载体(pcDNA3-p21)并稳定转染HOS-8603细胞(细胞株命名为HOS-p21),Western blot法鉴定HOS-p21细胞内p21蛋白的表达情况;采用组织化学染色法检测细胞内碱性磷酸酶(AKP)的表达,观察该细胞的生长情况并绘制生长曲线.结果:VDRas3细胞内源性VDR蛋白的表达量低于对照细胞;1,25(OH)2D3作用72 h后,对照细胞的报告基因CAT转录活性增加约3.5倍,而VDRas3细胞CAT的转录基本不受激素诱导;在内源性VDR被阻断后,1,25(OH)2D3及其类似物对细胞增殖的抑制作用以及对VDR的靶基因p21 mRNA表达的诱导作用均明显减弱.1,25(OH)2D3作用2 h即可诱导HOS-8603细胞内源性p21的表达,4 h达高峰,24 h仍未回降.细胞过度表达p21后生长速度明显减慢,培养6 d时细胞数为未转染细胞的50%;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶的表达明显增强.结论:1,25(OH)2D3及其类似物对HOS-8603细胞增殖抑制作用是由VDR介导的.1,25(OH)2D3对p21 mRNA诱导作用可能是激素调节细胞增殖分化的重要机制之一.
-
YKL-40在肿瘤中的研究进展
YKL-40又名人类软骨糖蛋白-39(HCgp-39),一项对新生骨蛋白的研究中发现在人骨肉瘤细胞系MG63的体外培养中发现一种蛋白的大量分泌,因为其一条肽链氨基端的起始3个氨基酸:酪氨酸、赖氨酸和亮氨酸的符号分别为Y、K和L,其相对分子质量约为40 000而被称为YKL-40.1993年,报道公布了人类软骨糖蛋白的完整氨基酸序列及cDNA序列,YKL-40含383个氨基酸,编码的蛋白序列与糖基水解酶相似,基于其氨基酸序列,发现YKL-40属于哺乳动物18糖基水解酶家族的成员.YKL-40结合不同长度的壳多糖的形式类似壳多糖酶18家族,但没有壳质酶活性.
