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遗传性弥漫型胃癌家系上皮型钙黏素基因的分析
目的 研究在遗传性弥漫型胃癌家系中是否存在上皮型钙黏素基因(CDH1)以及基因表达的异常.方法 收集符合遗传性弥漫型胃癌(HDGC)诊断标准的1个家系中15例成员的外周血和组织标本.用免疫组化和Westernblot法检测组织CDH1蛋白表达；提取基因组DNA,通过PCR扩增DNA直接测序检测CDH1基因16个外显子突变.用克隆测序法,鉴定CDH1基因启动子区CpG位点甲基化状况.结果 先证者和另一胃癌患者(家系2号成员)的癌旁胃黏膜上皮细胞CDH1蛋白表达较正常胃黏膜减弱,两者肿瘤组织的蛋白表达几乎为阴性.包括先证者在内的11例家系成员第14外显子mRNA水平2 377位点存在一个C→T的单核苷酸多态性(SNP),但未检测到16个外显子的胚系突变.相对于正常胃黏膜,先证者和家系2号成员的胃癌组织均有CDH1基因启动子的高甲基化,其瘤旁黏膜也有高甲基化.结论 此HDGC家系中,CDH1基因外显子胚系突变不是其致病原因,基因启动子区的甲基化可能是导致基因失活的原因之一.
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CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证的相关性
目的:研究CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证的关系.方法:应用连接酶检测反应,对387例胃腺癌患者和392例健康对照的CDH1基因的4个位点进行基因分型,并且按中医舌诊辨证要求,由中医诊断学专家进行舌色、舌质的诊断.结果:胃腺癌组不按时吃饭的比例高于对照组(x2=9.124,P=0.010),胃腺癌组与对照组相比饮食口味偏咸(x2=74.409,P＜0.001),胃腺癌组的吸烟率高于对照组(x2=18.019,P＜0.001),胃腺癌组经常吃豆制品的频率明显低于对照组(x2=10.669,P=0.014),并且其经常吃新鲜水果的频率明显低于对照组(x2=59.905,P＜0.001).rs13689、rs 17690554位点携带突变基因型并且苔色为黄色的个体在病例组的分布频率明显高于对照组(x2=4.064,P=0.044;x2=5.868,P=0.015).两组人群在各位点同一基因型的不同苔质的差异均具有统计学意义(P＜0.050).结论:CDH1基因多态性与胃腺癌患者舌苔辨证有一定关联,本研究结果有助于揭示胃腺癌患者基因位点突变与舌苔形成和变化的科学内涵.
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CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义
目的 探讨CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及临床意义.方法 对中国医科大学附属第一医院妇科、辽宁省肿瘤医院妇科1999年至2006年63例上皮性卵巢癌组织原发灶、41例相应的盆腹腔转移灶、10例癌旁卵巢组织及20例正常卵巢组织,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法检测CDH1基因启动子区甲基化状态.结果 上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆腹腔转移灶中存在CDH1基因启动子区异常甲基化,发生率分别为28.6%、39.0%,显著高于正常卵巢组织(P＜0.01).10例癌旁卵巢组织中1例检测到CDH1基因启动子区甲基化,20例正常卵巢组织未检测到CDH1基因启动子区甲基化.CDH1基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ期和Ⅱ期显著低于Ⅲ期和Ⅳ期(P＜0.05),在高分化癌中低于低分化癌(P＜0.05).结论 CDH1基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关,并可能与上皮性卵巢癌转移、临床分期及分化程度有关.
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家族性胃癌研究进展
随着分子遗传学的发展,人们对家族性胃癌的遗传学基础、发病机制、临床病理特征有了新的认识.积极开展家族性胃癌的遗传学检测,对家族性胃癌家系中CDH1胚系突变者采取合理的预防性干预治疗,能有效地改善家族性胃癌患者预后.本文就近年来国内外关于家族性胃癌的研究进展作一综述.
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遗传性弥漫性胃癌的诊治进展
遗传性弥漫性胃癌(HDGC)是一种常染色体显性遗传疾病,其发病可能与CDH1、CTNNA1等基因突变有关.HDGC的内镜活检或术后病理多提示印戒细胞癌,可伴发胃外肿瘤(女性乳腺癌多见).指南建议相关高危人群进行CDH1基因突变检测,多学科参与诊断和治疗评估.对致病性CDH1基因突变携带者,应行预防性胃切除术.对于CDH1基因无突变或发生无明确意义突变的人群,则可考虑定期内镜监测.本文就HDGC的概念、遗传学特征、临床病理表现、基因筛查等内容作一综述,以期为相关临床工作提供参考.
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胃癌/乳腺癌先证者家族性癌症综合征家系CDH1突变分析及病理学特征
目的探讨CDH1基因种系突变与中国人家族性胃癌/乳腺癌综合征的关系.方法收集弥漫型胃癌/乳腺癌先证者及其一、二级亲属外周血,应用CDH1基因第1～16外显子引物进行PCR扩增,对扩增产物行单链构象多态性(SSCP)分析.对电泳条带异常外显子的PCR扩增产物纯化后进行基因序列测定.对先证者胃癌/乳腺癌组织应用免疫组化方法进行CDH1编码蛋白E-cadherin表达检测.结果CDH1基因第13外显子在mRNA水平2200位点(序号:NM-004360)存在核苷酸C→T置换,导致编码序列GCC→GCT改变(Ala154Ala).先证者胃癌呈典型的弥漫型印戒细胞癌,左乳腺肿瘤为浸润性导管癌,两种肿瘤细胞均不同程度保留E-cadherin/β-catenin蛋白表达.结论以弥漫型胃癌/乳腺癌为先证者的中国人多发性癌症综合征家系发病年龄较轻,部分家系成员第13外显子存在的单核苷酸置换可能增加了对某些肿瘤的易感性.该家系中1例未患病的变异携带者已纳入定期随访范围.
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胃癌家族遗传性的研究
目的 检测30例伴家族史胃癌和8例遗传性胃癌家系患者的E-钙黏附素基因(CDH1)的蛋白表达和启动子甲基化及胚系突变情况,探讨CDH1基因在我国家族性遗传性胃癌中的意义.方法 采用免疫组织化学、甲基化特异性PCR(MS-PCR)、变性高效液相色谱技术(DH-PLC)和直接测序法对30例伴家族史胃癌和8例符合家族遗传性胃癌筛选标准(ICG-HGC)的患者的血液或正常组织标本的CDH1基因进行检测.结果 16例伴胃癌家族史胃癌肿瘤组织标本CDH1阴性表达,遗传性胃癌肿瘤标本CDH1基因7个表达阴性,1个表达明显下调;伴胃癌家族史胃痛19例和遗传性胃癌6例标本表现为启动子甲基化.在30例伴家族史胃癌中2例患者发现了3个同义突变,而在遗传性胃癌的中未发现CDH1种系突变.结论 我国家族遗传性胃癌中CDH1种系突变可能并不常见,或有其他遗传易感基因参与;CDH1基因启动子区甲基化是导致了CDH1基因表达下调的主要原因.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对Hela细胞增殖及CDH1、HPV18E6mRNA表达的影响
目的:探讨DNA去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对宫颈癌Hela细胞株增殖及抑癌基因CDH1和HPV18E6 mRNA的表达水平的影响.方法:不同浓度5-Aza-CdR干预Hela细胞株24h以后,四唑氮蓝法(MTT)检测其对Hela细胞增殖的影响,半定量RT-PCR检测CDH1及HPV18E6 mRNA表达的改变.结果:与对照组(DMSO)相比,5-Aza-CdR能显著抑制Hela细胞增值,且呈量-效性.5-Aza-CdR能显著抑制Hela细胞CDH1 mRNA的表达水平(P＜0.05),而对HPV18E6 mRNA表达水平无明显影响(P＞0.05).结论:5-Aza-CdR能抑制Hela细胞增殖,其作用可能是通过上调宫颈癌抑癌基因CDH1的表达实现,有望为宫颈癌的治疗提供新的治疗思路.
关键词： DNA甲基化 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 CDH1基因 宫颈癌 HPV -
遗传性和散发性胃癌上皮型钙黏附素的表达和启动子甲基化状态的关系
目的 检测上皮型钙黏附素的表达和其基因(CDH1)的启动子甲基化情况,探讨上皮型钙黏附素在家族遗传性胃癌和散发性胃癌发生中的作用.方法 收集符合诊断标准的家族性遗传性胃癌19例、不伴胃癌家族史散发性胃癌19例,正常胃粘膜组织对照组19例.采用免疫组织化学方法检测上皮型钙黏附素表达情况,采用甲基化特异的PCR检测基因启动子甲基化情况.结果 上皮型钙黏附素在遗传性和散发性胃癌组的表达均有明显下调,与正常组织的差异具有统计学意义(P＜0.001).遗传性胃癌和散发性胃癌的上皮型钙黏附素均降低,但两组差异没有统计学意义(P=0.84).正常组织中未检测到启动子甲基化,遗传性胃癌中3例检测到甲基化,散发性胃癌组中检测到10例启动子甲基化,散发性胃癌组的甲基化率高于遗传性胃癌组(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子区甲基化可能是导致散发性胃癌上皮型钙黏附素表达下调的重要原因,但可能不是遗传性胃癌的上皮型钙黏附素表达下调的主要作用机制.
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CDH1基因甲基化状态与结直肠癌临床病理特征及预后的相关性研究
目的：探讨CDH1基因启动子所在5'-CpG岛的异常甲基化与临床病情发展、病理变化及术后预后的相关性。方法选取2013年1~12月在我院肿瘤科进行结直肠癌切除术的原发性结直肠癌患者184例，其中甲基化组86例，非甲基化组98例，所有入选患者由专人进行跟踪随访。检测CDH1基因启动子所在5'-CpG岛的异常甲基化，通过全基因组扩增技术对修饰后的DNA进行扩增，根据GenBank基因库设计CDH1基因甲基化特异性引物及CDH1基因非甲基化特异性引物。结果甲基化组肿瘤直径为(6.5±2.1) cm，大于非甲基化组的(3.2±2.2) cm，甲基化组肿瘤浸润性所占比例54.7%，高于非甲基化组的42.9%，差异均有显著统计学意义(P<0.01)；甲基化组肿瘤分化程度(高分化14.0%，中分化36.0%)低于非甲基化组(高分化40.8%，中分化45.9%%)，差异有显著统计学意义(P<0.01)；甲基化组淋巴转移率为67.4%、远处转移率为31.4%，高于非甲基化组的21.4%和17.3%，差异均有统计学意义(P<0.05)；甲基化组临床TNM分期更晚(甲基化组：Ⅰ期11.6%，Ⅱ期11.6%，Ⅲ期37.2%，Ⅳ期39.5%；非甲基化组：Ⅰ期27.6%，Ⅱ期32.7%，Ⅲ期20.4%，Ⅳ期19.4%)，差异均有显著统计学意义(P<0.01)；非甲基化组患者生存率(89.5%)高于甲基化组患者(68.7%)，差异有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险模型结果显示，腹腔灌洗液悬浮细胞CDH1基因甲基化是原发性结直肠癌患者术后预后生存率的独立危险因素(RR=28.5，P<0.01)。结论原发性结直肠癌患者腹腔灌洗液悬浮细胞CDH1基因甲基化程度提高，恶性程度高，预后差。
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组织CDH1基因异常甲基化和血清HE4检测对卵巢癌和卵巢内异症囊肿的鉴别价值
目的 探讨组织上皮-钙粘连素(CDH1)基因异常甲基化和血清人附睾分泌蛋白4 (HE4)检测对卵巢癌和卵巢内异症囊肿的鉴别价值.方法 选取卵巢癌患者(卵巢癌组) 38例、卵巢内异症囊肿患者(内异症组) 41例,另选取子宫或卵巢良性病变患者42例(对照组),采用甲基化聚合酶联反应技术检测CDH1基因启动子区甲基化状态,采用酶联免疫吸附试验检测血清HE4水平.比较以上指标的变化.结果 CDH1 DNA在内异症组、卵巢癌组及对照组中的甲基化表达率分别为4.8%(2/41)、39.4%(15/38)、2.3%(1/42).内异症组的CDH1 DNA甲基化表达率与对照组比较差异无统计学意义(χ2=0.37,P=0.542),卵巢癌组的CDH1基因甲基化表达率与对照组比较差异有统计学意义(χ2=11.24,P=0.001),卵巢癌组的CDH1基因甲基化表达率与内异症组比较差异有统计学意义(χ2=13.79,P=0.000).血清HE4在内异症组、卵巢癌组及对照组水平分别为52.7 pmol/L、537.2 pmol/L、50.3 pmol/L,内异症组血清HE4水平与对照组比较差异无统计学意义(t=0.63,P=0.532),卵巢癌组的血清HE4水平与对照组比较显著增高,差异有统计学意义(t=54.27,P=0.000),卵巢癌组与内异症组比较显著增高,差异有统计学意义(t=55.33,P=0.000).卵巢癌组CDH1基因甲基化DNA表达量与血清HE4水平具有相关性(r=0.527,P<0.01),卵巢癌组CDH1甲基化DNA表达量、血清HE4水平分别与CA125水平具有相关性(r=0.539、0.520,P<0.01).内异症组血清HE4水平与CA125水平无明显相关性(r=0.127,P>0.05).结论 联合检测组织CDH1 DNA甲基化的发生和血清HE4水平可应用于卵巢内异症囊肿和卵巢癌的鉴别诊断,提高两种疾病的诊断率.
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乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义
目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.
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CDH1基因-160(C→A) 多态与福建地区中国人群胃癌遗传易感性的关联研究
目的上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)的编码基因CDH1是重要的肿瘤抑制基因,本研究探讨CDH1基因-160(C→A)多态性在福建地区胃癌人群中的分布及其与福建地区胃癌发病风险的相关性. 方法采用聚合酶链反应-变性高效液相色谱分析方法对102例胃癌患者和101名正常对照者进行CDH1基因-160(C→A)多态的基因型分析,比较基因型分布和发病风险的关系;危险度OR及95%CI应用非条件Logistic回归分析计算.结果CDH1基因-160(C→A)多态的CC、CA、AA基因型在病例组中的分布频率分别为58(56.9%),38(37.3%),6(5.9%);在对照组的分布频率分别为55(54.5%),41(40.6%),5(5%);两组间分布的差异无统计学意义(P＞0.05).AA基因型没有显著性地提高或降低胃癌的发病危险(OR=1.12;95%CI:0.32～3.95);携带A等位基因与胃癌的临床病理特征也无关联性.结论CDH1基因-160(C→A)多态性可能与福建地区中国人群胃癌发生的遗传易感性无关.
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CDH1基因启动子甲基化与宫颈癌临床病理特征的关系
目的:检测Cadlherin 1(CDH1)基因启动子区CpG岛甲基化状态,并分析CDH1基因甲基化率与临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测95例宫颈癌标本及对照组40例正常宫颈组织的CDH1基因启动子甲基化状态,荧光定量PCR检测高危型HPV DNA.分析CDH1基因甲基化状态与不同临床病理特征之间的联系.结果:宫颈癌组CDH1基因甲基化率明显高于正常对照组(分别为49.5%,12.5%,P<0.01).宫颈癌CDH1基因甲基化检测和高危型HPV DNA检测结果有较好的一致性(Kappa=0.332,P<0.001).鳞癌组甲基化率较腺癌组高(分别为66.2%,7.4%,P<0.01).CDH1甲基化阳性率随肿块增大及FIGO分期升高而增高(P<0.05).不同年龄、肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移和CDH1基因甲基化未见明显关系(P>0.05).结论:宫颈癌CDH1基因启动子甲基化与高危型HPV具有良好的一致性.CDH1基因启动子高甲基化为频发事件,并与不同宫颈癌病理类型相关,可作为宫颈癌诊断及分型的生物学标志物.
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E-Cadherin(CDH1)基因胚系突变与胃癌风险的研究
背景与目的:检测E-Cadherin(CDH1)基因在家族性胃癌中的突变情况以探讨CDH1基因胚系突变在家族性胃癌中的作用.方法:采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)、变性高效液相色谱分析(Denaturing high-performance liquidschromatography,DHPLC)和直接测序法对CDH1基因进行全基因筛查,检查80名胃癌患者的CDH1基因突变情况,其中62例有家族史.同时检测80例正常人CDH1基因,进行分析比较.结果:2.5%(2/80)的胃癌患者检出CDH1基因错义突变Thr340Ala(杂合型),在80例正常人中未检出这一突变;第13外显子上游(内含子)第13位碱基检出多态位点IVS(13)-13T→C,这一多态性存在于12.5%(10/80)的胃癌患者和15.0%(12/80)的正常对照,两组差异无统计学意义;23.8%(19/80)的胃癌患者中检出同义突变Asn751Asn,相同的突变存在于8.8%(7/80)的正常对照.统计结果表明,胃癌患者中CDH1基因Asn751Asn检出率高于正常人群(P＜0.05),这种差异主要表现在高年龄组胃癌患者(P＜0.01).结论:CDH1基因胚系突变在家族性胃癌中不是频发事件,但多态位点Asn751Asn的存在可使携带者胃癌发病风险增高,可能是部分癌高发家族癌症发生的原因之一.
