首页 > 文献资料
-
油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达
目的 探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用.方法 MTT法检测细胞增殖活性；实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达；Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量.结果 油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖.油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍.IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍.200 μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29 ±0.22)比较P＜0.05.LPS组TR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P＜0.05).结论 油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达.
关键词： 人主动脉血管平滑肌细胞 油酸 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达 -
果蝇样受体4介导游离脂肪酸调节人血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达
目的 探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因表达的调节及果蝇样受体4(TLR4)信号通路的作用.方法 采用不同剂量的软脂酸(100、200、400 μmol/L)处理HA-VSMC 6、12、24h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞MCP-1 mRNA表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测MCP-1蛋白表达,观察软脂酸调节MCP-1表达的剂量依赖关系和时间效应；采用蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红碱、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂wortmannin、神经酰胺抑制剂myriocin和核因子κB(NF-κB)抑制剂parthenolide分别处理细胞30 min,再加入软脂酸(400 μmol/L)处理细胞6h后,实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平,ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平,研究软脂酸调节MCP-1表达依赖的信号通路；构建TLR4短发夹RNA(shRNA)腺病毒pGSadeno-TLR4并感染HA-VSMC沉默TLR4基因表达,实验同时设空白对照组(PBS缓冲液)和对照病毒(pGSadeno-GFP)组.细胞感染96 h后更换培养基,再加入软脂酸(400 μmol/L)处理细胞6h,采用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平,ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平.提取细胞核蛋白,采用ELISA检测NF-κB p65亚基活性,观察TLR4/NF-κB通路在软脂酸调节HA-VSMC MCP-1基因表达中的作用.组间均数比较采用单因素方差分析.结果 采用软脂酸处理细胞6h后,对照组及100、200和400 μmol/L软脂酸组MCP-1 mRNA表达分别为1.00±0.02、3.30±2.84、8.21 ±4.31和11.25±2.73(F=7.57,P＜0.05)；MCP-1蛋白表达分别为(127±10)、(147±10)、(163 ±18)和(194±14)ng/L(F =7.81,P＜0.05).软脂酸可促进HA-VSMC MCP-1mRNA和蛋白表达且具有明显的剂量依赖关系.细胞培养12 h和24 h后,随着软脂酸浓度的增加,MCP-1 mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增加趋势,但时间效应则不明显.采用不同的信号通路抑制剂和软脂酸处理细胞6h后,对照组、软脂酸组、软脂酸+parthenolide组、软脂酸+白屈菜红碱组、软脂酸+ wortmannin组和软脂酸+myriocin组MCP-1 mRNA表达分别为1.00±0.02、10.80±1.23、3.49±0.28、10.84±0.24、11.24±0.27和10.62±0.36(F=1313.07,P＜0.05)；MCP-1蛋白表达分别为(132±8)、(218±12)、(152±4)、(213±12)、(225±7)和(226±9)ng/L(F=106.83,P＜0.05).成功地构建并获得TLR4 shRNA腺病毒pGSadeno-TLR4,采用pGSadeno-TLR4感染HA-VSMC阻断TLR.信号后,软脂酸+pGSadeno-TLR4组的NF-κBp65结合活性、MCP-1 mRNA和蛋白表达均显著低于软脂酸组[分别为0.48±0.12比1.24±0.16、1.88±0.33比10.80±1.23、(154±10)比(218±12)ng/L;F =591.86、659.16、118.37,均P＜0.01].而对照病毒pGSadeno-GFP对软脂酸诱导的NF-κB p65结合活性和MCP-1表达均无明显影响.结论 TLR4/NF-κB信号通路介导了软脂酸诱导的人主动脉血管平滑肌细胞MCP-1基因表达.
关键词： 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 果蝇样受体4 单核细胞趋化蛋白-1 -
1,25(OH)2D3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用
目的 探讨1,25 (OH)2D3(1,25-dihydroxyvitamin D3)对人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC)果蝇样受体(Toll like receptor4,TLR4)基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用.方法 不同浓度1,25 (OH)2D3干预HA-VSMC后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1 mRNA的表达水平.结果 1,25(OH)2D3在浓度为1～20nmol/L之间抑制TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1 mRNA水平的表达且具有明显的剂量依赖关系.在浓度为1 nmol/L时1,25(OH)2D3下调TLR4和MCP-1 mRNA表达的作用明显,浓度为10nmol/L时,1,25(OH)2D3下调IL-6mRNA表达的作用明显,浓度为20nmol/L时,1,25(OH)2D3下调IL-8 mRNA表达的作用明显.TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达的大下调幅度分别为对照组的3.08、2.39、3.19、2.23倍(均P＜0.05).结论 1,25(OH)2D3通过下调TLR-4信号抑制了人主动脉血管平滑肌细胞的炎症反应.
-
TLR4通路在软脂酸诱导人血管平滑肌细胞IL-6基因表达中的作用
构建Toll样受体4(TLR4)shRNA腺病毒表达载体(pGSadeno-TLR4)并感染人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC),采用软脂酸和不同的信号通路阻断剂处理HA-VSMC,以实时定量PCR检测白细胞介素6(IL-6) mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测NF-κB p65活性和IL-6的蛋白水平.结果显示,软脂酸增加HA-VSMC IL-6 mRNA和蛋白水平,且具有明显的剂量依赖关系,软脂酸(400 μmol/L)处理6h作用明显,IL-6 mRNA的表达水平为对照组的10.43倍(P＜0.01).IL-6蛋白水平在软脂酸作用24h时达到峰值,约为对照组的2.18倍(P＜0.01).NF-κB阻断剂parthenolide下调软脂酸诱导的IL-6 mRNA和蛋白表达分别为65％和59％(均P＜0.01),蛋白激酶C(PKC)阻断剂白屈菜红碱下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为24％和28％(均P＜0.05).而细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和磷酸肌醇3激酶抑制剂wortmannin对软脂酸诱导的IL-6 mRNA和蛋白表达均无明显作用(均P＞0.05).pGSadeno-TLR4下调软脂酸诱导的IL-6 mRNA和蛋白表达分别为72％和75％(均P＜0.01),下调软脂酸刺激的NF-κB p65活性约62％ (P＜0.01).这些结果提示TLR-4/NF-κB和PKC信号通路介导了软脂酸诱导的人主动脉血管平滑肌细胞IL-6基因表达.
关键词： 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 Toll样受体4 白细胞介素6 -
三七花总皂苷对内皮素诱导的入主动脉血管平滑肌细胞c-myc、c-fos表达的影响
目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对内皮素(ET-1)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)癌基因c-myc、c-fos表达的影响.方法:采用ET-1诱导HASMC异常增殖,应用RT-PCR方法检测PNFS对c-myc、c-fos mRNA表达的影响.结果:PNFS能明显抑制HASMC原癌基因c-myc mRNA表达(P＜0.05),而对c-fos mRNA表达影响不明显.结论:PNFS可影响癌基因c-myc mRNA表达以抑制HASMC异常增殖.
关键词： 三七花总皂苷 人主动脉血管平滑肌细胞 c-myc c-fos -
高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制
目的：观察高脂血清对人主动脉血管平滑肌细胞（HASMC）增殖的影响，并探讨其机制。方法取对数生长期HASMC细胞分为实验组和和对照组，实验组包括实验1、2、3组，另设空白对照组。对照组常规培养；实验1、2、3组分别加入10％、15％、20％浓度的高脂血清培养；空白对照组仅加培养基无细胞。继续培养6、12、24、48 h，用CCK-8法测算实验组HASMC细胞增殖率；培养24 h时采用实时荧光定量PCR法检测各组HASMC中GRIM-19和p-STAT3 mRNA，采用Western blotting法检测GRIM-19和p-STAT3蛋白。结果相同时间点细胞增殖率实验3组高于实验2组，实验2组高于实验1组，P均＜0．05。随着高脂血清培养时间增加，各组HASMC细胞增殖率呈递增趋势，P均＜0．05。培养24 h时HASMC中GRIM-19 mRNA和蛋白实验3组低于实验2组，实验2组低于实验1组，P均＜0．05；HASMC中p-STAT3 mRNA和蛋白实验3组高于实验2组，实验2组高于实验1组，P均＜0．05。结论高脂血清可以促进HASMC增殖。与10％、15％的高脂血清相比，20％高脂血清促进HASMC增殖的效果为明显。其作用机制可能与GRIM-19下调p-STAT3表达有关。
-
黄连素对人主动脉血管平滑肌细胞钙化的作用及其机制
目的 探讨黄连素影响人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化的作用及机制.方法 利用糖基化终末产物(AGEs)建立HASMCs钙化模型,予以不同浓度(10、25、50μmol/L)的黄连素干预.用冯库萨、茜素红染色观察细胞钙化程度,采用细胞内钙含量试剂盒测定钙含量,Western blotting检测各组细胞骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)及骨形成蛋白2(BMP2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38蛋白表达.结果 与对照组比较,AGEs组钙化程度、细胞内钙含量升高(P均<0.05),不同浓度黄连素干预HASMCs钙含量呈浓度依赖性减少(P均<0.05);AGEs组OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量较对照组明显增高(P均<0.05),不同浓度黄连素呈浓度依赖性地减少HASMCs的OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量(P均<0.05).结论 黄连素可抑制AGEs诱导的HASMCs钙化,其机制可能与下调ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路导致OPG、OPN、BMP2表达减少有关.
关键词： 黄连素 人主动脉血管平滑肌细胞 血管钙化 糖基化终末产物 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
透明质酸对游离脂肪酸引起的人主动脉血管平滑肌细胞表达IL-6、IL-8和TNF-α的影响
目的 探讨透明质酸(HA)对游离脂肪酸(FFA)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)表达白细胞介素6(1L-6)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 培养HA-VSMC,用不同浓度(0、100、200、400μmol/L) FFA和不同浓度FFA+高分子量HA(HMW-HA)或低分子量HA (LMW-HA)处理细胞24、48 h.噻唑蓝法检测FFA和FFA+HA对HA-VSMC存活率的影响;EdU染色检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测培养上清IL-6、IL-8和TNF-α含量;实时荧光定量PCR和Western blot检测IL-6、IL-8和TNF-α mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)FFA在400 μmol/L内呈浓度依赖性诱导HA-VSMC增殖;(2) HMW-HA、LMW-HA均对FFA诱导的HA-VSMC增殖有抑制作用,且HMW-HA抑制作用强于LMW-HA;(3) FFA显著促进HA-VSMCIL-6、IL-8和TNF-α的分泌,且有明显的时间和浓度依耐性;HA可以抑制上述作用;(4)实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,FFA+HMW-HA组、FFA+LMW-HA组IL-6、IL-8、TNF-α mRNA及蛋白表达水平均低于FFA组(均P＜0.01),其中FFA+HMW-HA组又低于FFA+LMW-HA组(P＜0.0l).结论 (1)FFA诱导HA-VSMC IL-6、IL-8、TNF-α mRNA和蛋白表达升高;(2)HA对FFA引起的HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的表达有抑制作用,且HMW-HA抑制效果强于LMW-HA.
-
晚期糖基化终末产物通过AKT信号通路促进人主动脉血管平滑肌细胞钙化
目的 探讨蛋白激酶B在晚期糖基化终末产物(AGEs)引起的人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化中的作用.方法 体外培养HASMCs,随机分为对照组、DMSO组、AGEs组和AGEs+LY294002组,冯库萨染色检测各组钙化情况;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,AGEs组钙化相关蛋白骨形成蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)表达量明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;与对照组相比,AGEs组P-AKT表达量明显升高(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性;与AGEs组相比,AGEs+LY294002组钙化相关蛋白BMP-2、OPG的表达量明显降低(P<0.01).结论 AKT信号通路在AGEs引起的HAVSMCs钙化中可能起重要作用.
关键词： 人主动脉血管平滑肌细胞 晚期糖基化终末产物 血管平滑肌细胞 钙化 AKT
