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下调Notch1信号抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖能力
目的 探讨Notch1基因与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖能力的关系.方法 应用-分泌酶抑制剂DAPT或表达Notch1-shRNA慢病毒载体阻断SH-SY5Y细胞Notch1信号的活化,RT-PCR和Western blot法行Notch1及Hes1表达水平的检测,MTT法和裸鼠体内种植检测瘤细胞体内外增殖能力的变化.结果 DAPT处理和表达Notch1-shRNA慢病毒载体转染均能减少细胞内NICD和Hes1表达,其细胞体外增殖能力受到明显抑制(P＜0.01),Notch1 RNAi细胞体内种植瘤重为0.20±0.13 g,明显轻于对照组的0.89 ±0.58 g(P ＜0.01).结论 Notch1信号的活化与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力密切相关,有望成为神经母细胞瘤基因治疗的潜在靶点.
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shRNA干扰NOTCH1基因对套细胞淋巴瘤Akt/mTOR信号通路的影响
本研究旨在探讨RNA干扰沉默NOTCH1基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响.针对NOTCH1基因设计短发夹RNA并将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建NOTCHl shR-NA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞;应用RT-PCR及Westem blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、procaspase-3、procaspase-9及Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达.结果表明:NOTCH1 shRNA转染Jeko-1细胞后,NOTCH1基因的mRNA和蛋白表达均明显下调,有统计学差异(P＜0.05);转染组增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白组(P＜0.05),NOTCH1 shRNA转染48 h后,凋亡率为(34.58±3.46)％,而Neg-shRNA组和空白组分别为(2.44±1.35)％、(1.72±0.64)％,有统计学差异(P＜0.05);凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-3、pro-caspase-9的表达下调,而BAX表达上调;干扰NOTCH1基因后Akt总蛋白未见明显变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达下降.结论:干扰沉默NOTCH1基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,通过去磷酸化抑制Akt/mTOR信号通路可能是其机制之一.
关键词： 套细胞淋巴瘤 Notch1基因 RNA干扰 Akt/mTOR信号途径 -
RNAi沉默Notch1基因对多发性骨髓瘤细胞致瘤性的影响
目的:探讨RNAi沉默Notch1基因对多发性骨髓瘤细胞在NOD/SCID小鼠体内致瘤性的影响.方法:使用shRNA方法靶向沉默骨髓瘤RPMI8226细胞Notch1基因,建立NOD/SCID小鼠多发性骨髓瘤模型,观察Notch1基因沉默后骨髓瘤的成瘤速度、大小的变化;用ELISA法检测荷瘤小鼠血清中IL-6和VEGF水平变化.结果:Notch1-shRNA沉默Notch1基因后肿瘤细胞成瘤速度明显减慢,肿瘤体积缩小,与对照组比较差异显著.实验组小鼠血清中IL-6和VEGF水平与对照组比较明显降低(P＜0.05).结论:靶向沉默Notch1基因可显著抑制骨髓瘤细胞的致瘤能力,其机制可能与Notch1基因沉默后瘤细胞分泌IL-6和VEGF的能力降低有关,Notch1基因沉默有可能成为治疗多发性骨髓瘤的新策略.
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靶向沉默Notch1基因对骨髓瘤细胞增殖的影响
目的:明确沉默Notch1基因对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,寻找骨髓瘤治疗的新靶点.方法:在多发性骨髓瘤RPMI8226细胞中转染Notch1-shRNA靶向沉默Notch1基因,用CCK-8及流式细胞术评价Notch1基因沉默后骨髓瘤细胞增殖和凋亡的变化,应用荧光定量PCR方法分析Notch1 mRNA表达变化,用Westem blot方法检测Notch信号通路相关蛋白Hes-1、Jagged-1、Jagged-2、BCL-2、PTEN、AKT、p-AKT的表达变化.结果:骨髓瘤细胞转染Notch1-shRNA后Notch1基因和蛋白表达均受到显著抑制,Notch1 mRNA相对表达量下调(66±0.1)％,Notch1蛋白相对表达量下调(88.0±3.4)％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).转染后48 h实验组细胞增殖的速度明显减低;流式细胞术结果显示实验组瘤细胞凋亡明显增加;Notch1基因沉默后下游蛋白Hes-1、p-AKT和BCL-2表达水平明显下调,PTEN表达水平明显升高.结论:靶向沉默Notch1基因可以抑制骨髓瘤细胞增殖,促进细胞凋亡进程,其作用机制与p-AKT信号活化和PTEN基因功能复活有关,Notch1信号可作为潜在的骨髓瘤治疗靶点.
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CD4+CD25+CDl27low调节性T细胞、TGF-β及Notch1基因在特发性血小板减少性紫癜发病机制中作用研究
目的:探讨CD4+ CD25+ CDl27owTreg、TGF-β及Notch1 mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中作用.方法:收集30例初发ITP患者治疗前及治疗后和20例正常对照组的外周血,采用流式细胞术检测CD4+ CD25+ Treg和CD4+ CD25+ CDl2lowTreg数量;ELISA法检测TGF-β浓度;实时荧光定量PCR检测Notch1基因相对表达量.结果:ITP初治组外周血中CD4+ CD25+ CDl27lowTreg和CD4+ CD25+ Treg比例均明显低于对照组,治疗后为(5.17％±0.74％)和(4.16％±0.68％),较初治组显著增高;初治组外周血中TGF-β浓度明显低于对照组,治疗后为(961.53±60.10 ng/l),较初治组显著增高;初治组外周血中Notch1 mRNA表达量明显低于对照组,治疗后为(1.35±0.10),较初治组显著增高.经治疗后,显效组Treg比例、TGF-β水平及Notch1 mRNA表达水平明显高于良效组和改善组、无效组,其差异均有统计学意义(P＜0.01).TGF-β、Notch1表达均与CD4+ CD25+CDl27lowTreg比例呈正相关性关系(P＜0.01).结论:ITP患者中CD4+ CD25+ CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1明显低于正常对照组,预示ITP患者存在明显细胞免疫调控异常;CD4+ CD25+ CDl27lowTreg与Notch1表达存在正相关性,提示Notch信号可能参与了Treg细胞免疫抑制作用途径,此结果为临床治疗提供新的思路.
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微小RNA-137调控Notch1基因介导自噬在肝癌细胞增殖和迁移中的作用
目的 探讨微小RNA-137(miR-137)调控Notch1基因并介导自噬对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 体外培养人SMMC7721肝癌细胞系,用miR-137模拟物、miR-137抑制物以及Notch1基因的干扰RNA(siRNA)转染细胞,分为正常对照组(NC组)、miR-137模拟物组、miR-137抑制物组、Notch1 siRNA组.采用实时定量-PCR (RT-PCR)检测SMMC7721细胞转染后miR-137与Notch1 mRNA的表达.细胞迁移实验(Transwell)分析miR-137及Notch1基因对SMMC7721细胞迁移侵袭的影响.细胞免疫组化观察SMMC7721细胞β-链蛋白(β-catenin)和波形蛋白(vimentin)的表达情况,自噬双标腺病毒检测SMMC7721细胞自噬体个数的变化.采用蛋白印迹法(Western blot)检测Notch1基因、上皮型钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)、vimentin、选择性自噬接头蛋白(P62)及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达.结果 实时荧光定量PCR (RT-PCR)结果显示miR-137抑制物组Notch1基因的相对表达含量(5.71±0.45)明显高于miR-137模拟物组(0.21±0.06),差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验显示miR-137模拟物组(66.00 ±4.55)和Notch1 siRNA组(88.00 ±6.78)肝癌细胞侵袭转移的个数较miR-137抑制物组(515.00±35.12)明显降低(P＜0.05).细胞组化检测显示miR-137模拟物组及Notch1 siRNA组β-catenin表达明显增加且vimentin表达明显下降(P＜0.05).自噬双标腺病毒检测结果显示miR-137模拟物组自噬体数量(5.50 ±3.70)明显低于miR-137抑制物组(32.75±4.11),差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测显示,与miR-137抑制物组、NC组比较,miR-137模拟物组Notch1基因、N-Cadherin、vimentin 和LC3表达水平明显降低,E-Cadherin、P62表达水平明显增高.Notch1 siRNA组Notch1基因、N-Cadherin、LC3表达水平明显低于NC组,E-Cadherin、P62表达水平明显高于NC组.结论 miR-137可通过抑制Notch1基因的表达抑制自噬从而抑制肝癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭,有可能成为肝癌治疗的新靶点.
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靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响
目的 探讨RNA靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌的增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(protein kinase B/mammalian target of rapamycin,Akt/mTOR)信号通路的影响.方法 设计针对Notch1基因小干扰RNA(siRNA)片段,经脂质体转染入786-0细胞,RT-PCR及蛋白印迹法检测其干扰效果;MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL法分析细胞凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3及Akt/mTOR信号途径相关蛋白Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(Phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的表达.结果 Notch1 siRNA转染786-O细胞后,Notch1基因的mRNA、蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).经Notch1 siRNA 0、40、60、80、100、120 nmol/L作用24 h后,786-0细胞的增殖率分别为(98.51±1.33)％、(87.34±2.26)％、(64.72±3.24％)％、(57.68±3.32％)％、(31.91±1.85)％、(19.27 ±2.73)％,随Notch1 siRNA浓度的增加细胞增殖率下降,差异有统计学意义(F=47.65,P＜0.01).0、40、80、120 nmol/L Notch1 siRNA处理786-O细胞24 h后,凋亡率分别为(7.6±3.8)％、(21.5±4.8)％、(32.3±3.5)％、(46.3±4.7％)％,随着Notch1 siRNA浓度的增加细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P＜0.05);凋亡相关蛋白Bcl-2、pro-caspase 3的表达下降;干扰Notch1基因后Akt总蛋白未见明显变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达下降.结论 靶向沉默Notch1基因后,可抑制786-O细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默Notch1基因可通过去磷酸化抑制该Akt/mTOR信号通路.
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下调Notch1基因对前列腺癌PC-3细胞迁移和增殖的影响
目的 研究体外下调Notch1基因对前列腺癌细胞迁移和增殖能力的影响.方法 选取人前列腺癌PC-3细胞,分别转染Notch1的小干扰RNA(siRNA)序列(实验组)和阴性对照序列(阴性对照组),使用荧光定量PCR和蛋白质印迹技术分别检测转染后各组细胞中Notch1和其下游靶基因Hes1的表达.以Transwell小室法和MTS法分别检测细胞的迁移和增殖能力.结果 较之阴性对照组和空白对照组,实验组Notch1基因相对表达量显著降低(实验组3.960±0.510,阴性对照组36.097±1.941,空白对照组38.762±1.897),差异具有统计学意义(P＜ 0.01).在Notch1表达下调的同时,实验组中Hes1的表达也明显下降(实验组1.690±0.994,阴性对照组8.776±0.916,空白对照组9.803±1.001)(P＜0.01).迁移实验中,实验组细胞数为(657.867±27.610)个,明显多于阴性对照组的(158.533±18.263)个和空白对照组的(146.933±15.733)个,差异有统计学意义(P＜ 0.01).细胞增殖能力方面,开始检测时细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05),实验组细胞在24、48、72 h的吸光度(A)值均高于两对照组细胞(均P＜0.01).结论 下调Notch1基因可以促进前列腺癌PC-3细胞的迁移和增殖,这一效应可能是通过Notch1调节其靶基因Hes1实现的.
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Notch1和Bmi-1蛋白在肺癌组织中的表达及意义
背景：有研究发现，Notch通路与 Bmi-1基因均有调节干细胞自我更新的能力，二者功能障碍可能与肿瘤的发生有很大的关系。目的：探讨Notch1和Bmi-1蛋白在肺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法：获取87例肺癌患者术后肺癌组织(肺癌组)、40例心胸外科开胸手术和肺部纤维支气管镜检查所取经病理证实的正常肺组织(正常组)作为研究对象。采用免疫组织化学SP法检测两组标本中的Notch1和Bmi-1蛋白表达情况，并分析Notch1、Bmi-1蛋白表达与肺癌患者临床病理特征的关系。结果与结论：肺癌组Notch1、Bmi-1蛋白表达阳性率分别为61%、47%，均显著高于正常组标本(P<0.05)；肺癌组Notch1蛋白表达与Bmi-1蛋白表达具有显著的正相关关系(r=0.567，P<0.001)。不同性别、不同病理类型患者的Notch1、Bmi-1蛋白阳性表达率差异无显著性意义(P >0.05)；低分化肺癌、发生淋巴结转移、TNM分期Ⅲ-Ⅳ级患者的Notch1、Bmi-1蛋白阳性表达率显著高于高中分化肺癌、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ、Ⅱ级患者(P <0.05)。结果表明Notch1基因和Bmi-1基因可能与肺癌的发生、发展有一定的关系。
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白英水提物对胃癌细胞凋亡与Notchl信号通路的影响
目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响.方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组.白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL.MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中Notch1、caspase-9基因表达.结果:与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P＜0.05),Notch1基因表达呈显著性的下降(P＜0.05)、caspase-9基因表达有明显的上调(P＜0.05),并随白英浓度增加而加强.结论:白英水提物能下调人胃癌SGC-7901细胞中Notch1信号蛋白表达和促进细胞凋亡,这可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一.
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MicroRNA-146a抑制胶质瘤细胞增殖的研究
目的:检测胶质瘤中miR-146a的表达水平,并研究miR-146a对胶质瘤细胞增殖的影响.方法:应用实时定量PCR的方法检测胶质瘤组织和癌旁组织中miR-146a的表达水平,采用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-146a,MTT法检测转染后细胞的增殖率,利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因.结果:miR-146a在胶质瘤组织中表达明显降低(P＜0.01),相对表达水平为癌旁组织的35％,细胞转染miR-146a模拟物后,miR-146a表达明显增加,癌细胞增殖率明显降低(P＜0.01),仅为原细胞的47％.Notchl基因是miR-146a影响胶质瘤细胞增殖活力的可能靶基因.结论:miR-146a可能通过抑制Notchl基因的表达调控胶质瘤细胞的增殖.
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儿童T细胞型急性淋巴细胞白血病中NOTCH1基因突变的特征及临床意义研究
目的：阐明NOTCH1基因突变在儿童T细胞型急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中的特征及临床意义。方法通过对28例T-ALL患儿NOTCH1基因的异二聚体（HD）区及脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸（PEST）区测序，研究T-ALL患儿中NOTCH1基因突变的发生率、位点、类型及其与预后的相关性。结果28例T-ALL患儿中，15例（51.57%）患儿的NOTCH1基因发生突变，均为杂合性突变。突变患儿入院时外周幼稚淋巴细胞比例及骨髓幼稚细胞比例与无突变患儿相比均明显升高（P<0.05）。28例患儿的一年缓解率为75.0%（21/28），其中突变患儿的一年缓解率为80.0%（12/15），无突变患儿为69.2%（9/13）。此外，3例复发的突变组患儿至一年随访时均已死亡（一年时病死率为20%），而4例复发的无突变患儿经再次化疗后至一年随访时均存活（一年时病死率为0%）。结论儿童T-ALL患者中NOTCH1基因突变发生率高、位点多样；NOTCH1突变者初诊时疾病更严重，短期预后较好、而复发后挽救治疗预后更差的趋势。
关键词： T细胞型急性淋巴细胞白血病 Notch1基因 儿童 -
CRISPR-Cas9敲除Notch1对CNE2细胞增殖及辐射敏感性的影响
背景与目的:Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用,既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失.本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系,并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响.方法:采用蛋白质印迹法(Western blot)检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中Notch1表达水平;利用sgRNA在线设计工具,针对Notch1设计sgRNA;利用PX459质粒构建含sgRNA的敲除载体PX459-Notch1-sgRNA;将质粒瞬时转染CNE2细胞,经过药物筛选、克隆化培养、Western blot检测、免疫荧光染色验证得到Notch1敲除的CNE2鼻咽癌细胞系;采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测方法、克隆形成实验检测Notch1敲除组(Notch-KO)与未转染亲本组(Parental)、转染PX459空载体水平较的对照组(Ctrl)的增殖活性及辐射敏感性,并进一步采用流式细胞术检测侧群细胞比例.结果:与NP69细胞相比,CNE2细胞中Notch1蛋白水平较高;Western blot检测、免疫荧光染色验证Notch1基因被完全敲除.Notch1基因敲除可抑制细胞增殖活性(P<0.05);Notch1-KO组的D0、Dq和SF2值分别为1.160、1.881和0.630 Gy,低于Parental(1.176、2.533和0.824 Gy,P<0.001)和Ctrl组(1.182、2.516和0.819 Gy,P<0.001);Notch1-KO中侧群细胞比例[(1.13±0.01)％]较Parental[(3.81±0.03)％]、Ctrl[(3.70±0.03)％]明显下降(P<0.001).结论:运用CRISPR-Cas9技术可成功敲除CNE2细胞中的Notch1基因,Notch1基因敲除导致CNE2细胞增殖能力下降、辐射敏感性增加、侧群细胞比例降低.
关键词： Notch1基因 CRISPR-Cas9 鼻咽癌 辐射敏感性 -
圆锥动脉干畸形患儿NOTCH1和JAG1基因3'非编码区变异分析
目的 · 探索NOTCH1和JAG1的3'非编码区(3'UTR)核苷酸变异与心脏圆锥动脉干畸形(CTD)的相关性.方法 · 采用病例-对照的研究方法,收集600名无22q11缺失的CTD患儿以及300名正常对照儿童.应用高通量测序技术直接检测样本人群NOTCH1和JAG13'UTR区段的序列,筛选变异位点,通过PCR和Sanger测序法验证变异的准确性.运用在线软件TargetScan、PicTar和microRNA.org对变异位点进行功能预测分析.结果 · 检测出CTD患儿NOTCH13'UTR区存在1个新发突变和3个单核苷酸多态性(SNP),JAG13'UTR区存在3个新发突变和6个SNP位点.其中JAG13'UTR区有2个SNP位点(rs3840074、rs8708)的基因型在病例组和对照组间的分布差异有统计学意义(均P<0.05).预测结果显示4个突变位点及2个有差异的SNP位点均可与微小RNA结合.结论 ·NOTCH1和JAG13'UTR区的核苷酸变异可能与心脏圆锥动脉干畸形的发生相关.
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Notch1基因在神经干细胞分化过程中的表达
目的研究Notch1基因在全反式维甲酸(all-trans-retinoic-acid,ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用.方法用1 μmol/L的ATRA在体外诱导人胚胎神经干细胞,诱导7 d后,做神经元特异性烯醇化酶(neuron specific endase,NSE)免疫荧光染色,计数分化为神经元的比例.于诱导前、诱导3 d和诱导7 d,提取细胞的总RNA.用半定量RT-PCR法检测Notch1基因的表达.结果与对照组相比,ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例(P＜0.01).Notch1基因在ATRA诱导后明显下调(P＜0.001).结论ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例,Notch1基因在人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起负调控作用.
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原发性肺癌患者Notch1基因rs3124599位点单核苷酸多态性与肺癌易感性的相关性分析
目的 分析原发性肺癌患者Notch1基因rs3124599位点的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymor-phisms,SNP)与肺癌易感性的相关性.方法 78例原发性肺癌患者(观察组),我院非呼吸科患者及患者同一社区健康人群156例为对照组,抽取两组晨起肘部静脉血2 mL,采用酚-氯仿抽提法提取DNA,采用PCR-PFLPS技术分析Notch1基因rs3124599位点分型.收集两组临床资料,采用条件Logistic回归分析法评价各因素与肺癌易感性的相关性,采用交互作用系数(γ)评估环境因素与基因多态性的交互作用.结果 观察组Notch1基因rs3124599位点基因型AA、AG、GG的分布频率分别为25.6％(20/78)、39.7％(31/78)、34.6％(27/78),等位基因A、G的分布频率分别为45.5％(71/156)、54.5％(85/156);对照组分别为37.2％(58/156)、44.9％(70/156)、17.9％(28/156),等位基因A、G的分布频率分别为59.6％(186/312)、40.4％(126/312);两组基因型分布及等位基因A、G的分布频率差异存在统计学意义(χ2=6.518,3.987;P均<0.05).观察组吸烟例数、吸烟程度、存在肿瘤家族史者均高于对照组(χ2=23.890,5.647;P均<0.05).条件Logistic回归分析显示,与rs3124599位点AA型基因人群比较,rs3124599位点GG基因型的个体患肺癌的风险性增加(校正OR=1.596,95％CI:1.058～2.429);且携带G等位基因的个体患肺癌的危险度是A基因的1.193倍(95％CI:1.132～2.501,P<0.05).rs3124599位点AG或GG基因型与吸烟(γ=2.296)、饮酒(γ=1.130)具有正向交互作用.rs3124599位点AG/GG基因型与肿瘤家族史同时存在时,患者发生肺癌的风险增加(OR=3.751,95％CI=1.665～18.034).相对于rs3124599位点基因型AA不吸烟的个体,单独吸烟及吸烟且携带AG/GG的暴露者患肺癌的危险性分别升高4.495倍、12.134倍.结论 肺癌患者Notch1基因rs3124599位点G等位基因突变频率较高.Notch1基因rs3124599(A/G)的G等位基因可能是肺癌患病风险的一个危险因素,其与患者肿瘤家族史、吸烟史间存在交互作用.
关键词： Notch1基因 rs3124599位点 单核苷酸多态性 肺肿瘤 肺癌 -
Notch1基因沉默的人绒毛膜上皮癌细胞增殖及侵袭能力变化
目的：观察Notch1基因沉默后人绒毛膜上皮癌细胞增殖及侵袭能力变化。方法查阅GenBank提供的Notch1序列（NM-001105721．1）设计引物，合成Notch1 siRNA。分离培养人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞，分为A、B、C组。 A组不做转染，B组转染control siRNA ，C组转染Notch1 siRNA。分别于转染后12、24、36、48、60 h采用MTT法检测各组细胞增殖能力（ OD值）。转染后48 h采用Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭能力。转染后72 h采用Western blotting法检测各组细胞中的MMP-2、MMP-9蛋白。结果转染后36、48、60 h C组OD值低于A、B组（ P均＜0．05）。 A、B、C组穿膜细胞数分别为（109±6）、（118±7）、（59±4）个，C组与A、B相比，P均＜0．05。 A、B、C组细胞中MMP-2蛋白相对表达量分别为0．91±0．08、0．87±0．01、0．29±0．05，MMP-9蛋白相对表达量分别为0．85±0．04、0．79±0．03、0．35±0．05，C组MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量与A、B组相比，P均＜0．05。结论Notch1基因沉默后，人绒毛膜上皮癌细胞增殖受到抑制，侵袭能力减弱。
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RNAi沉默Notch1基因对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用
目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,观察阻断Notch信号通路对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用及其机制.方法 构建mNotch-1短发夹状RNA(mNotch-1 shRNA),利用MTT增殖试验分析mNotch-1 shRNA转染前及转染24、48、72 h时MG63细胞的增殖情况；通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡率及与mNotch-1 shRNA作用时间的关系；Western blot检测细胞中Notch1、Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞增殖水平明显下降.Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高.Western blot结果分析显示mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞中Notch1基因表达明显降低,并且显著抑制Bcl-2基因和上调Bax基因的表达.结论 RNAi沉默Notch1基因能明显抑制人MG63细胞增殖,促进细胞凋亡；其作用机制可能与调控Bcl-2及Bax蛋白表达有关.
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基因突变在先天性心脏病发病中的作用研究进展
先天性心脏病是我国常见的出生缺陷,其发病机制与多种因素有关,与遗传机制密切相关.越来越多的研究证实单个或多个基因突变可导致先天性心脏病的发生,涉及的基因包括NKX2.5、GATA4、TBX5、TBX1、NOTCH1、CRELD1、TFAP2B基因,这些基因的突变导致房间隔缺损、室间隔缺损、法洛四联症、大动脉转位、三尖瓣闭锁、三尖瓣下移畸形、右室双出口、动脉导管未闭、房室间隔缺损、单心室等先天性心脏病发生.
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shRNA抑制NOTCH1基因对膀胱癌细胞BIU87生物学行为的影响
目的:探讨NOTCH1基因沉默对人源性膀胱癌细胞增殖及分化的影响.方法:用pGenesil质粒构建靶向NOTCH1的shRNA真核表达载体psiRNA1并将其转染到膀胱癌细胞系BIU87中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测NOTCH1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况.WesternBlot和RT-PCR法检测NOTCH1基因的蛋白和mRNA在转染前后表达变化.结果:转染psiRNA1质粒后BIU87细胞中NOTCH1基因在蛋白和mRNA表达水平相对于对照组明显下调(P<0.05),BIU87的生长受到明显抑制,呈现一定的时间依赖性(<60 h).凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:沉默NOTCH1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖和分化,NOTCH1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用.
