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CD44介导的透明质酸对单核细胞黏附和迁移的作用
目的研究透明质酸(HA)在单核细胞中的分布,HA受体CD44和细胞问黏附分子-1(ICAM-1)在单核细胞中的表达以及HA及其受体对单核细胞黏附和迁移的影响.方法用Percoll非连续密度梯度离心法分离狗外周血单核细胞,然后用免疫荧光染色法标记单核细胞的HA、CD44和ICAM-1.通过用透明质酸酶(HAase)消化细胞表面的HA、在培养皿底面和细胞培养池膜上涂布HA和在培养液中添加HA,观察细胞表面的HA、底物HA和游离HA对细胞黏附和迁移的影响.以抗体阻断剂抑制CD44或ICAM-1,研究HA受体的介导作用.结果单核细胞表面和细胞内存在HA,并表达CD44和ICAM-1.消化细胞表面HA后,黏附和迁移的单核细胞数减少.在培养皿底面和细胞培养池膜上铺HA,黏附和迁移的细胞数增加.培养液中加入HA,黏附和迁移的细胞数减少.阻断CD44后,HA底物上黏附和迁移的细胞数减少,而阻断ICAM-1后黏附和迁移的单核细胞数无明显变化.结论单核细胞内外分布有HA.单核细胞表面的HA和底物HA促进细胞的黏附和迁移,但游离HA阻碍单核细胞的黏附和迁移.CD44介导HA对单核细胞黏附和迁移的作用.
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人巨细胞病毒被膜磷蛋白65检测的临床意义
肾移植受者中人巨细胞病毒(HCMV)感染较为常见,其中10%～30%为术后有症状的HCMV感染[1].HCMV被膜磷蛋白65(HCMV-pp65)是HCMV DNA复制时即出现的一种抗原,在出现临床症状数日或1周前可检出HCMV-pp65阳性标本.我们采用间接免疫荧光染色法(IFA),检测肾移植术后病人外周血多形核细胞(PMNLs)中HCMV-pp65,以辅助临床对HCMV进行早期诊断与治疗.
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原发性纤毛不动综合征诊断方法的应用进展
原发性纤毛不动综合征(PCD)是一种常染色体隐性或性染色体相关的遗传疾病,需要结合患者的临床表现及多种检测手段进行诊断.其中鼻呼出气一氧化氮检测、高频数字视频成像、透射电镜和基因检测是国际指南推荐的检测手段,然而由于复杂的检测设备难以普及,往往对PCD的诊治造成延误.在目前对PCD的诊断中,免疫荧光染色法(IF)的应用日益受到重视,该方法通过对纤毛结构的特异性标志物进行染色,间接检测纤毛结构是否存在异常,具有较高的特异性,在PCD的早期筛查和辅助诊断等方面具有巨大潜力.本文针对PCD的诊断方法进行概述,并着重介绍IF在PCD诊断中的应用进展.
关键词： 原发性纤毛不动综合征 诊断 免疫荧光染色法 -
乳腺癌术前外周血循环肿瘤细胞计数的临床应用价值研究
目的:探讨乳腺癌患者术前循环肿瘤细胞(CTCs)检测与术后临床病理特征的关系,研究其临床应用价值.方法:采用免疫磁珠阴性富集联合免疫荧光染色法检测60例乳腺良性结节患者及136例乳腺癌患者术前外周血CTCs水平,分析CTCs与患者临床病理特征的关系.结果:136例乳腺癌患者CTCs总阳性率为46.32％,在乳腺良性结节患者中未检出(P＜0.01).乳腺癌CTCs阳性率在年龄、肿瘤大小、Grade分级、淋巴结转移、AJCC分期、ER、PR、Ki67状态、分子分型表达差异均无统计学意义(P＞0.05).Her2阳性组低于Her2阴性组(36.2％ vs 51.7％),但差异无统计学意义.多因素分析表明CTCs阳性水平与AJCC分期及Her2状态具有相关性(P=0.011及P=0.057).结论:乳腺癌术前CTCs表达阳性率与术后病理AJCC分期及Her2状态相关,术前检测对病情评估有一定的临床应用价值.
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B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察
目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异.方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片.采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况；FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架；Hoechst染色眼睑部位细胞核.结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移.结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放.
关键词： 遗传性角膜混浊突变系小鼠 眼睑发育 角膜混浊 细胞骨架 免疫荧光染色法 -
施万细胞与背根节神经元体外共培养成髓鞘模型的建立
目的：探讨施万细胞与背根节神经元髓鞘化共培养的标准化方法，为研究周围神经髓鞘化的形成机制提供稳定的周围神经髓鞘化体外模型。方法：取出生1~3 d新生SD大鼠，培养施万细胞，经纯化鉴定后用于共培养。取孕14~15 d的SD大鼠胚鼠背根神经节，经纯化后用于共培养；将2种分别纯化的细胞进行共培养，加抗坏血酸诱导髓鞘的形成。利用免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜，检测髓鞘的形成。结果：纯化后施万细胞纯度可达到98%以上，可用于共培养。背根节神经元贴壁良好，经纯化后几乎无杂细胞可见，可用于共培养。对共培养细胞进行MAG与NF的免疫组化染色，发现有数量可观的髓鞘形成，并且髓鞘是紧密包绕在神经元轴突上。扫描电镜下可观察到施万细胞包绕轴突形成髓鞘，而透射电镜下则可观察到有致密的髓鞘板层结构形成。结论：本实验成功建立稳定可靠的体外成髓鞘模型，可用于轴突的新髓鞘化实验研究。
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大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经TNC表达变化及功能分析
目的:研究大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经组织中胞外基质分子TNC(tenascin-C)的表达变化及初步功能分析.方法:采用冰冻切片和免疫荧光染色法,检测神经缺损0d(对照组),4d(实验组)损伤近端神经组织TNC的表达变化及表达位置；并利用体外共培养施万细胞/成纤维细胞及细胞划痕实验初步研究TNC的作用.结果:免疫荧光染色发现TNC在损伤后4d处于高表达状态,并在神经外膜处与波形蛋白(Vimentin)共定位状况良好；体外细胞共培养实验发现下调成纤维细胞中的TNC可以降低与之共培养的施万细胞的迁移速度.结论:在神经损伤后成纤维细胞分泌TNC并比对照组表达大幅上调,且体外实验发现TNC可促进施万细胞的迁移速度.
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糖皮质激素快速激活PC12细胞Erk1/2 MAPK
目的:研究皮质酮在PC12细胞是否能激活Erk1/2 MAPK及探讨其胞内信号转导机制.方法:(1)PC12细胞培养;(2)免疫蛋白印迹(Western blotting)法检测Erk1/2 MAPK的磷酸化;(3)用间接免疫荧光染色法观察激活的Erk 1/2 MAPK由胞质向核转位的情况;(4)MAPK活性直接测定法.结果:(1)皮质酮可以浓度依赖性方式刺激MAPK磷酸化,激活曲线为钟形,大激活浓度为10-9 mol/L(时间为15 min);(2)皮质酮以时间依赖性方式刺激MAPK磷酸化,皮质酮作用5 min时,有Erk1/2 MAPK激活,大激活时间为15 min;(3)皮质酮、B-BSA(皮质酮偶连的牛血清白蛋白)和NGF可激活Erk1/2 MAPK活性,Erk1/2 MAPK的激活可能不是由经典的糖皮质激素受体介导,因为B-BSA能快速激活Erk1/2 MAPK;(4)MAPK激酶抑制剂(PD98059)可抑制皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK磷酸化,进一步证明皮质酮激活Erk1/2 MAPK;(5)皮质酮、B-BSA和NGF可引起Erk1/2 MAPK核转位,免疫荧光染色结果显示15 min时,由皮质酮和B-BSA激活的Erk1/2 MAPK从胞质转移到细胞核;(6)皮质酮可通过蛋白激酶C激活Erk 1/2 MAPK,蛋白激酶C激活剂(PMA)能激活Erk1/2MAPK,而蛋白激酶C抑制剂(G6976)能阻断皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK激活.结论:本研究首次发现皮质酮在PC12细胞能快速激活Erk1/2 MAPK,并清楚地显示皮质酮可能作用在细胞膜上通过蛋白激酶C激活Erk1/2 MAPK.
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铁超载对大鼠肝星状细胞的影响
目的：研究铁超载对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响以初步证实铁超载对肝纤维化的促进作用。方法：大鼠肝星状细胞HSC－T6给予硫酸亚铁2μmol／L负载24 h，正常对照组给予DMSO 2μmol／L。免疫荧光染色法观察铁在HSC－T6中的分布面积，流式细胞术检测HSC－T6增殖， TUNEL法检测HSC－T6凋亡，Western blot检测HSC－T6基质金属蛋白酶1（MMP－1）和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1）蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比，铁超载组HSC－T6内铁染色阳性的平均面积为39．02％±2．03％，平均增殖率为61．02％±2．21％，平均凋亡率为13．01％±0．95％，MMP－1和TIMP－1的蛋白平均表达水平分别增加了38．82％±7．62％和179．88％±17．52％。结论：铁超载导致肝星状细胞的增殖率大于其凋亡率，并且肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂的表达水平高于其基质金属蛋白酶的水平，因此推断铁超载促进了肝星状细胞的活性，从而促进了肝纤维化的进程。
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脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6的检测及其早期诊断价值
目的 探讨免疫荧光染色法检测脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6 (ESAT-6)对结核性脑膜炎诊断的价值.方法 收集36例确诊结核性脑膜炎患者的脑脊液为病例组,45例非结核性脑膜炎患者脑脊液为对照组.用双盲法对2组脑脊液细胞进行ESAT-6免疫荧光染色,统计分析灵敏度和特异度等.结果 病例组ESAT-6存在于中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞中,对照组脑脊液细胞中无ESAT-6表达.灵敏度为88.89％、特异度为93.33％;阳性预测值为91.43％、阴性预测值为91.30％;阳性似然比为13.33、阴性似然比为0.12;Youden指数为82.22％,ROC曲线下面积为0.94.结论 免疫荧光染色检测脑脊液细胞中ESAT-6的灵敏度及特异度均较高,是结核性脑膜炎诊断的有效方法.
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急性脑血管病患者红细胞免疫功能和T淋巴细胞亚 群变化的初步研究
[苗建亭，雷革胜，李柱一，王者晋. 中国神经免疫学和神经病学杂志, 2001;8(1) :23-25] 目的 探讨急性脑血管病患者红细胞免疫功能和T淋巴细胞亚群的变化及其临 床意义. 方法 应用免疫粘附酵母菌花环法和流式细胞仪(FCM)直接免疫荧光染色法，检测79例 脑血管病 患者(脑梗死41例，脑出血38例)外周血RBC-C3bRR和RBC-ICR以及T淋巴细胞亚群，并进行 相 关分析. 结果 急性期脑梗死组和脑出血组RBC-C3bRR, CD3+, CD4+ 和CD4+/CD8+均明显低于对照 组，RBC-ICR则显著增高. 不同损伤部位对细胞免疫功能的影响为基底节区>脑干>额叶>顶 叶>颞叶>小脑>枕叶，且出血量或梗死面积越大，机体细胞免疫功能下降越显著. RBC-C3bR R 与CD4+/CD8+呈显著正相关. 结论 脑血管病患者发病后存在严重的红 细胞和T细胞免疫功能 低下和平衡失调，病变的性质(梗死或出血)不是其决定性因素，而可能取决于脑损伤的部位和程度.(井晓梅)
