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佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响
目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响.方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测、Southwestern blotting等方法检测PMA(100 μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响. 结果经PMA(100 μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD. 结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达.
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冬凌草甲素诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及G2/M细胞周期阻滞作用研究
目的 研究冬凌草甲素体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用,阐明其作用机理,为临床应用提供科学依据.方法 用MTT方法测定冬凌草甲素体外抑制BGC-823细胞生长的作用.用共聚焦荧光显微镜和流式细胞仪分别观察诱导凋亡的情况.线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度分别用荧光探针标记后流式细胞仪测定.凋亡和细胞周期相关蛋白的表达用Westem blotting进行测定.结果 冬凌草甲素对BGC-823细胞的半数生长抑制浓度IC50值为22.21μmol·L-1,并诱导细胞凋亡,呈现浓度依赖性.此外,能够降低线粒体膜电位,升高细胞内钙离子浓度,激活caspase-3前体.同时,冬凌草甲素能够使得BGC-823细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,伴随有cyclin A 蛋白的表达下降.在发生凋亡和细胞阻滞之前,观察到p53蛋白的表达增加.结论 冬凌草甲素能够诱导BGC-823细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G2/M期.其凋亡机理与caspase-3的激活,p53蛋白表达上调及cyclin A表达下调相关.
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香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制
目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制.方法采用Giemsa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和survivin mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和survivin蛋白表达的变化.结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图.经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%.CPE可抑制BGC-823细胞bcl和survivin mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达.CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性.结论 CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和survivin基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关.
关键词： 香加皮 人胃癌细胞BGC-823 Bcl-2 Bax survivin -
新城疫病毒HN基因重组体对人胃癌细胞BGC-823凋亡作用机制研究
目的本实验研究旨在探讨含新城疫病毒HN基因的重组质粒对人胃癌细胞BGG-823凋亡的联合作用机制.方法将含有HN基因的重组质粒pIRVP3IL-18HN经脂质体介导转染人胃癌细胞BGC-823,通过MTT方法检测细胞活力;电镜下观察细胞形态;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(△ψ)和活性氧(ROS)水平变化;底物染色反应检测Caspase-3活性.结果重组质粒pIRVP3IL-18HN转染人胃癌细胞BGC-823后,MTT法结果显示致肿瘤细胞死亡率升高,细胞活力下降;电镜观察肿瘤细胞呈现明显凋亡状态;与阴性空白质粒对照显示,线粒体△ψ下降,ROS水平升高;Caspase-3活性被激活.结论含新城疫病毒HN基因的重组质粒可以诱导人胃癌细胞BGC-823进入特定的凋亡程序,从而导致人胃癌细胞BGC-823的凋亡.
关键词： 新城疫病毒 HN基因 重组质粒 人胃癌细胞BGC-823 凋亡 -
藤黄酸对人胃腺癌细胞BGC-823细胞端粒酶逆转录酶和AKt蛋白磷酸化表达的影响
目的探讨藤黄酸（ GA）对人胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和端粒酶逆转录酶（ hTERT） mRNA、AKt蛋白磷酸化表达的影响。方法将处于对数生长期的BGC-823细胞制成细胞悬液，加入96孔酶标板内，加入不同浓度的GA孵育24、48、72 h后，收集细胞，采用MTT比色法测定半抑制浓度（ IC50）值；分别采用聚合酶链式反应（ PCR）、酶联免疫反应（ ELISA）法检测端粒酶的活性和逆转录PCR（ RT-PCR）法检测hTERT mRNA的表达；通过免疫共沉淀（IP）法获得hTERT与磷酸化AKt（p-AKt）蛋白的结合体，然后用Western blot法检测p-AKt蛋白表达的变化。结果 GA可以明显抑制胃癌细胞BGC-823的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达，呈一定的时效、量效关系；进一步研究发现，GA能够抑制hTERT 和p-AKt蛋白的结合，且作用呈时间依赖性，进而影响p-AKt参与的hTERT的活化，从而完成对hTERT转录后的调控，抑制端粒酶的活性。结论 GA可明显抑制胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和hTERT的表达，GA对BGC-823细胞生长抑制的作用机制可能与GA影响p-AKt参与的hTERT的活化，从而完成对hTERT转录后的调控有关。
关键词： 人胃癌细胞BGC-823 藤黄酸 端粒酶 端粒酶逆转录酶 磷酸化Akt -
小檗碱诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡
目的观察小檗碱对人胃癌细胞BGC-823凋亡的诱导作用,以探讨具抗癌作用机理.方法采用体外细胞培养技术,以lO～40 mg/L小檗碱作用于培养的BGC-823细胞48 h后,进行光镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪和TUNEL法的观察和分析.结果小檗碱作用后,光镜、TUNEL观察到细胞呈现凋亡特征,琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解,流式细胞仪分析出现典型亚二倍体峰.结论小檗碱可诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡,这可能为小檗碱抗癌的机理之一.
关键词： 小檗碱 人胃癌细胞BGC-823 细胞凋亡 -
伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭的影响及机制研究
目的:研究伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:0、2.5、5、10、20、40μmol/L伊维菌素分别作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后用MTT法检测细胞抑制率,再采用Transwell小室侵袭实验观察5μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用24 h对BGC-823、MGC-803细胞迁移和侵袭的影响,West-ern blot法分别检测5、10μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后上皮-间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和EMT转导通路转化生长因子β(TGF-β)/Smad中TGF-β1、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白的表达水平.结果:伊维菌素对BGC-823、MGC-803细胞生长均有抑制作用,其细胞抑制率与其浓度呈正相关.与对照组比较,5μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞的迁移数和侵袭数均明显减少(P<0.01或P<0.001);5、10μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞中E-cadherin蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01或P<0.001),N-cadherin、Vimentin、Snail、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白表达均明显减弱(P<0.05或P<0.01或P<0.001),TGF-β1蛋白仅在10μmol/L伊维菌素作用后明显减弱(P<0.05).结论:伊维菌素能显著抑制BGC-823、MGC-803细胞的迁移和侵袭,其可能与抑制TGF-β/Smad活性从而影响EMT过程有关.
