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大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响
目的 构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响.方法 设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体.将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响.结果 成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达.与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs (n =5,P＜0.01).结论 成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化.
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血清-糖皮质激素诱导激酶1基因对少突胶质细胞分化的影响
目的:探讨血清-糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)对少突胶质细胞分化的影响.方法:利用免疫荧光染色检测糖皮质激素对体外培养少突胶质前体细胞(OPCs)分化的影响;原位杂交检测SGK1在少突胶质细胞中的表达情况;通过构建SGK1真核表达载体和鸡胚神经管电穿孔转化,研究SGK1过表达对少突胶质细胞发生发展的影响.结果:在体外,SGK1的激活物氢化可的松能促进OPCs分化;抑制物GSK650394则会阻断OPCs分化,鸡胚神经管过表达SGK1会促进少突胶质细胞转录因子2和Sox10的提前表达.结论:SGK1能促进少突胶质前体细胞的发生及分化.
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过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞
目的:观察少突胶质细胞转录因子2(O1ig2)过表达对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向少突胶质祖细胞(OPCs)分化的影响.方法:将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2(NG2)免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果:Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2+/GFP+,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论:过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2+的OPCs样细胞.
关键词： 少突胶质细胞转录因子2 基因过表达 小鼠胚胎干细胞 少突胶质祖细胞 分化 -
少突胶质细胞转染因子2在胶质瘤中作用的研究进展
胶质瘤是中枢神经系统常见的肿瘤,具有发病率、复发率、病死率均较高等特点,临床亟待寻找参与胶质瘤恶性生物学行为的分子标记物,为胶质瘤的诊断、治疗和预后判断提供参考.少突胶质细胞转录因子2 (oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)是胶质细胞特异性转录因子.Olig2几乎在所有胶质瘤中都有表达,参与胶质瘤的发生发展.Olig2维持GSC干性,促进胶质瘤的形成;调节GSC上皮间质转化,促进胶质瘤侵袭;调节GSC表型,促进不同亚型胶质瘤的发生.本文就Olig2在少突胶质瘤诊断及预后判断中的价值,胶质瘤发生发展中的作用机制以及治疗胶质瘤药物的设计和筛选中的应用作一综述.
关键词： 胶质瘤 少突胶质细胞转录因子2 胶质瘤干细胞 -
f3b 基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc 的表达观察
目的：观察f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统少突胶质细胞转录因子2（olig-2）、神经系统特异表达RNA结合蛋白（ Huc）的表达情况。方法将单细胞阶段的斑马鱼胚胎随机分为两组（胚胎数量分别为90枚和85枚），分别注射针对f3b起始密码区域序列的吗啡啉反义核苷酸（ATG-MO）和作为标准对照的随机序列吗啡啉反义核苷酸（ CON-MO）。在CON-MO注射后的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为对照组，在ATG-MO注射后出现特异表型的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为实验组，通过原位杂交的方法检测两组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc。结果实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达评分分别为（1．9±0．4）、（5．6±0．5）分，两组比较，P＜0．01。实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统Huc表达评分分别为（6．3±0．6）、（6．5±0．3）分，两组比较差异无统计学意义。结论 f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达减弱、Huc表达无明显变化。
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CCH条件下海马神经胶质重构及MDP干预的研究
目的 研究脑慢性低灌注(CCH)条件下海马神经胶质重构及加减薯蓣丸(MDP)干预,阐明CCH对海马神经胶质的影响及MDP作用机制.方法 40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组及药物组.采用改良的双血管阻断(2-VO)法制作CCH模型,药物组以加减薯蓣丸浓缩汤剂(湖北省中医院制剂室提供)进行灌胃45 d(10 g· kg-1·d-1),模型组和假手术组以生理盐水灌胃,剂量、疗程同药物组.疗程结束后采用水迷宫行为学实验对各组大鼠进行智能测定;取大鼠海马进行病理学观察及免疫组化测定Olig 2及GFAP表达,RT-PCR测定GAP 43mRNA表达.结果 与模型组相比,药物组可明显降低定位航行逃避潜伏期(P＜0.05),增加跨越平台次数(P＜0.01);与假手术组相比,模型组海马组织辐射层、分子层、腔隙层纤维结构疏松,排列紊乱,星型胶质细胞明显增生;药物组海马辐射层,分子层及腔隙层纤维排列致密,星型胶质细胞增生明显减少,少突胶质细胞明显增生;药物组GFAP平均光密度值较模型组低,但较假手术组高,均达到极显著性差异(P＜0.01);药物组Olig-2平均光密度值较模型组高,较假手术组低,达到显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).假手术组、模型组、药物组GAP-43mRAN相互之间比较均达到统计学差异(P＜0.01及P＜0.05).结论 CCH条件下海马神经胶质发生重构,表现为轴突丢失及髓鞘化程度低、胶质增生,可能是大鼠学习记忆受损的原因之一;加减薯蓣丸通过促进轴突的生成及髓鞘化,抑制星型胶质细胞增生,从而保持持神经纤维的正常有序联系,可能是其改善CCH状态下学习记忆能力的机制之一.
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Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响
目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响.方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bFGF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况.结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mESCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱.结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达.
关键词： 小鼠胚胎干细胞 神经前体细胞 过表达 少突胶质细胞转录因子2 巢蛋白
